基因敲除是应用DNA重组原理发展起来的一门新兴技术.“基因敲除细胞 构建过程如下: 第一步:从小鼠囊胚中分离出胚胎干细胞(ES).在培养基中扩增.这些细胞中需要改造的基因称为“靶基因 . 第二步:构建基因表达载体.取与靶基因序列同源的目的基因.在同源臂上接入neoR等.由于同源臂与靶基因的DNA正好配对.所以能像“准星 一样.
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（15分）基因敲除是应用DNA重组原理发展起来的一门新兴技术。“基因敲除细胞”构建过程如下：第一步：从小鼠囊胚中分离出胚胎干细胞（ES），在培养基中扩增。这些细胞中需要改造的基因称为“靶基因”。第二步：构建基因表达载体。取与靶基因序列同源的目的基因（同源臂），在同源臂上接入neoR（新霉素抵抗基因）等。由于同源臂与靶基因的DNA正好配对，所以能像“准星”一样， 将表达载体准确地带到靶基因的位置。第三步：将表达载体导入胚胎干细胞，并与其内靶基因同源重组，完成胚胎干细胞的基因改造。第四步：基因改造后的胚胎干细胞增殖、筛选。请根据上述资料，回答下列问题：（1）在把与靶基因序列同源的目的基因导入受体细胞前，应首先完成&&&&&&&&&&&&&&&&。（2）如果要获得一只含目的基因的小鼠，则选择的受体细胞通常是&&&&&&&&&&&&；若用大肠杆菌储存目的基因，则需先将其处理为&&&&&&&&&&&&细胞。（3）上述资料中neoR基因的作用最可能是&&&&&&&&&&&&。（4）获得的小鼠，通过有性生殖产生的后代是否都含该目的基因&&&&&&&&&&&&。&
【答案】（1）表达载体的构建（2）受精卵&& 感受态（3）作为标志基因，便于筛选（4）否【解析】&
练习册系列答案
科目：高中生物
来源：学年湖北省高二下学期期中考试生物试卷
题型：综合题
基因敲除是应用DNA重组原理发展起来的一门新兴技术。通常意义上的基因敲除主要是应用DNA重组原理，用设计好的DNA片段替代动物细胞内的基因片段，从而达到基因敲除的目的。在后基因组时代，研究的重点是利用转基因动物或基因敲除的动物研究基因的功能，运用基因重组进行基因敲除依然是构建基因敲除动物模型中最普遍的使用方法，其基本原理如下图所示。请回答下列问题：（1）在把目的基因导入受体细胞前，应选择一个合适的　　　　　　与之结合，在这一过程中所需要的工具酶是限制性内切酶和　　　　　　　。（2）如果要获得一只含目的基因的小鼠，则一般是通过病毒感染或显微注射技术将目的基因导入受体细胞，选择的受体细胞应该是&&&&&&&&。（3）在此类基因操作中，通常可以用水母的发光蛋白作为标记物。水母发光蛋白有发光环，能在一定条件下发出荧光，现已将这种蛋白质的基因作为生物转基因的标记，在转基因技术中，这种蛋白质的作用是（&&& ）A．促使目的基因导入受体细胞中&&&&&&& B．促使目的基因在寄主细胞中复制C．使目的基因的转移容易被检测出来&&& D．使目的基因容易表达成功（4）按上述操作获得的转基因小鼠是杂合子，如果想获得一个目的基因纯合的个体，以研究该种动物体内靶基因的功能，应该如何进行下一步实验？&&&
科目：高中生物
来源：学年吉林省吉林一中高二下学期第一次月考生物试卷
题型：综合题
基因敲除是应用DNA重组原理发展起来的一门新兴技术。通常意义上的基因敲除主要是应用DNA重组原理，用设计好的DNA片段替代动物细胞内的基因片段，从而达到基因敲除的目的。在后基因组时代，研究的重点是利用转基因动物或基因敲除的动物研究基因的功能，运用基因重组进行基因敲除依然是构建基因敲除动物模型中最普遍的使用方法，其基本原理如下图所示。请回答下列问题：（1）在把目的基因导入受体细胞前，应选择一个合适的　　　　　　与之结合，在这一过程中所需要的工具酶是限制性内切酶和　　　　　　&&&&&&　。（2）如果要获得一只含目的基因的小鼠，则一般是通过病毒感染或显微注射技术将目的基因导入受体细胞，选择的受体细胞应该是&&&&&&&&&&&&&&&&&&。（3）在此类基因操作中，通常可以用水母的发光蛋白作为标记物。水母发光蛋白有发光环，能在一定条件下发出荧光，现已将这种蛋白质的基因作为生物转基因的标记，在转基因技术中，这种蛋白质的作用是（&&&）A．促使目的基因导入受体细胞中B．促使目的基因在寄主细胞中复制C．使目的基因的转移容易被检测出来D．使目的基因容易表达成功（4）按上述操作获得的转基因小鼠是杂合子，如果想获得一个目的基因纯合的个体，以研究该种动物体内靶基因的功能，应该如何进行下一步实验？&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&
科目：高中生物
来源：学年吉林省高二下学期第一次月考生物试卷
题型：综合题
基因敲除是应用DNA重组原理发展起来的一门新兴技术。通常意义上的基因敲除主要是应用DNA重组原理，用设计好的DNA片段替代动物细胞内的基因片段，从而达到基因敲除的目的。在后基因组时代，研究的重点是利用转基因动物或基因敲除的动物研究基因的功能，运用基因重组进行基因敲除依然是构建基因敲除动物模型中最普遍的使用方法，其基本原理如下图所示。请回答下列问题：（1）在把目的基因导入受体细胞前，应选择一个合适的　　　　　　与之结合，在这一过程中所需要的工具酶是限制性内切酶和　　　　　　&&&&&& 　。（2）如果要获得一只含目的基因的小鼠，则一般是通过病毒感染或显微注射技术将目的基因导入受体细胞，选择的受体细胞应该是&&&&&&&&&&&&&&&&&&。（3）在此类基因操作中，通常可以用水母的发光蛋白作为标记物。水母发光蛋白有发光环，能在一定条件下发出荧光，现已将这种蛋白质的基因作为生物转基因的标记，在转基因技术中，这种蛋白质的作用是（&&& ）A．促使目的基因导入受体细胞中&&&& B．促使目的基因在寄主细胞中复制C．使目的基因的转移容易被检测出来 D．使目的基因容易表达成功（4）按上述操作获得的转基因小鼠是杂合子，如果想获得一个目的基因纯合的个体，以研究该种动物体内靶基因的功能，应该如何进行下一步实验？&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&
科目：高中生物
来源：湖南省长郡中学学年下学期高二学业水平模拟考试（理综）生物部分
题型：综合题
（15分）基因敲除是应用DNA重组原理发展起来的一门新兴技术。“基因敲除细胞”构建过程如下：第一步：从小鼠囊胚中分离出胚胎干细胞（ES），在培养基中扩增。这些细胞中需要改造的基因称为“靶基因”。第二步：构建基因表达载体。取与靶基因序列同源的目的基因（同源臂），在同源臂上接入neoR（新霉素抵抗基因）等。由于同源臂与靶基因的DNA正好配对，所以能像“准星”一样，将表达载体准确地带到靶基因的位置。第三步：将表达载体导入胚胎干细胞，并与其内靶基因同源重组，完成胚胎干细胞的基因改造。第四步：基因改造后的胚胎干细胞增殖、筛选。请根据上述资料，回答下列问题：（1）在把与靶基因序列同源的目的基因导入受体细胞前，应首先完成&&&&&&&&&&&&&&&&。（2）如果要获得一只含目的基因的小鼠，则选择的受体细胞通常是&&&&&&&&&&&&；若用大肠杆菌储存目的基因，则需先将其处理为&&&&&&&&&&&&细胞。（3）上述资料中neoR基因的作用最可能是&&&&&&&&&&&&。（4）获得的小鼠，通过有性生殖产生的后代是否都含该目的基因&&&&&&&&&&&&。
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基因敲除技术中，一个基因的表示，例如：nogo-/- nogo+/- nogo trap/trap 是什么意思呢？
我知道第一个nogo-/-是指基因全敲除，但是nogo+/- 是什么意思？半敲除？有没有nogo-/+的表达呢？又是什么意思呢？
nogo-/- 是纯合体，是指两个同源基因都是敲除的（nn）；nogo+/- 是杂合体是指两个同源基因中一个被敲除了（Nn）。一般不用nogo-/+表达。
采纳率：54%
基因敲除中有些是不能存活的，得用杂合体保证， nogo+/- 就是杂合型
你指的不能存活是什么意思？什么又叫做用杂合体保证？
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为什么要基因敲除,而不是直接用限制酶切掉基因呢？保证染色体结构吗？
为什么要基因敲除,而不是直接用限制酶切掉基因呢？保证染色体结构吗？还有，载体带着目的基因与靶基因发生同源重组的时候，是用限制酶处理的吗??还是自然发生的重组呢？（就像减数分裂的时候非姐妹染色单体的重组一样吗？？）具体过程不是很清楚。。。
1、敲除基因一般都是做的同框缺失，即保证整个序列不会出现移码突变，敲除掉的通常是从起始密码子开始三个三个的敲掉，这样的话被敲掉的基因不能正常表达了，但是不会影响后面无关基因的表达。2.同源重组是发生在同源序列上的，一般能够发生同源重组的载体都带有同基因序列同源的序列，这样这两段序列在体内就会结合在一起，从而有很高的几率发生交换从而重组。具体说的话就很长了，可以去找一本分子生物学方面的书，会讲得很详细的，有图看，会很好理解~~~祝早点解决疑惑哈~o(∩_∩)o ~~
采纳率：44%
1 因为相同的酶切位点在基因组内出现的次数极多，你没办法专门只切其中的几个位点来切除目的基因。2 是同源重组。载体上有序列，在特定的酶作用下和基因组发生同源重组而将外源基因整合到基因组上。
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我们会通过消息、邮箱等方式尽快将举报结果通知您。为什么要基因敲除，而不是直接用限制酶_百度知道
为什么要基因敲除，而不是直接用限制酶
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1、敲除基因一般都是做的同框缺失,即保证整个序列不会出现移码突变,敲除掉的通常是从起始密码子开始三个三个的敲掉,这样的话被敲掉的基因不能正常表达了,但是不会影响后面无关基因的表达.2.同源重组是发生在同源序列上的,一般能够发生同源重组的载体都带有同基因序列同源的序列,这样这两段序列在体内就会结合在一起,从而有很高的几率发生交换从而重组.具体说的话就很长了,可以去找一本分子生物学方面的书,会讲得很详细的,有图看,会
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我们会通过消息、邮箱等方式尽快将举报结果通知您。基因敲除之后敲除以后的有基因都会会乱码吗_百度知道
基因敲除之后敲除以后的有基因都会会乱码吗
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通过敲除来研究基因的功能、胞外多糖分泌测定，通过致病力筛选，如果是第三种情况得到的突变株不做回补也没关系，已经做了敲除转化子的胞外酶活性测定所以拿到突变株后要做回补实验来排除是由polar effect引起的，将几个可能与致病力相关的基因做了敲除，前两种情况因为插入了抗性基因比较好筛选突变子，所谓的敲除不外乎有三种情况；3）同框缺失即完整的使原基因敲除掉。第三种情况得到的突变株比较好但筛选工作量很大，做了会更好，现在正在构建互补载体，但是由于外源的插入了抗性基因容易引起polar effect；2）抗性基因双交换替换掉原基因做黄单胞、比对获得全基因之后，不过不知道将互补做完了之后还有什么可以做的、致病性测定等等、Tail-PCR获得侧翼序列，在通过Tn5构建转化子库之后：1）单交换插入抗性基因使原基因失活
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