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&&&肝细胞癌肝移植患者外周血AFP及GPC3 mRNA检测及其临床意义
肝细胞癌肝移植患者外周血AFP及GPC3 mRNA检测及其临床意义
　　目的 检测肝细胞癌(HCC)肝移植患者外周血细胞甲胎蛋白(AFP) mRNA及磷脂酰肌醇蛋白聚糖3 (GPC3) mRNA基因水平并初步探讨其在预测肝移植术后肿瘤复发中的临床价值.方法 利用TaqMan实时荧光逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法测定29例HCC肝移植患者外周血AFP mRNA及GPC3 mRNA表达水平.结果 29例HCC肝移植患者中有8例外周血检测出AFP mRNA.
摘要： 　　目的 检测肝细胞癌(HCC)肝移植患者外周血细胞甲胎蛋白(AFP) mRNA及磷脂酰肌醇蛋白聚糖3 (GPC3) mRNA基因水平并初步探讨其在预测肝移植术后肿瘤复发中的临床价值.方法 利用TaqMan实时荧光逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法测定29例HCC肝移植患者外周血AFP mRNA及GPC3 mRNA表达水平.结果 29例HCC肝移植患者中...&&
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抗-GPC3抗的制备及肝癌循环肿瘤细胞检测方法研究.pdf 76页
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抗-GPC3抗的制备及肝癌循环肿瘤细胞检测方法研究
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军事医学科学院硕士学位论文
抗一GPC3抗体的制备及肝癌循环肿瘤细胞检测方法研究
性肿瘤之一，发病率一直呈上升趋势，早期诊断对肝癌的防治是十分重要
的。磷脂酰肌醇蛋白聚糖3基因((琅∞)是新近发现的具有肝癌组织特异
性的高表达基因，其在正常肝组织及良性肝脏病变中不表达，而在肝癌中
高表达，可能是一种潜在的敏感性好、特异性高的新型肝细胞癌的标志物。
GPC3的生物学功能还不是很清楚，需要进行深入研究。肝癌细胞具有容
易侵犯血管的特性，极易造成癌细胞的血行播散，这可能是导致肝癌切除
术后及肝移植术后肿瘤复发、转移率高、预后较差的重要原因，因此对肝
癌病人外周血进行循环肿瘤细胞(Circula：cingCell，CTC)检测，对
于判断肝癌的病理分期、治疗效果及预后都具有重要的意义。本研究制备
了针对(沪C3的单抗和多抗，为建立灵敏的肝细胞癌早期诊断方法及深入
研究G驴∞的生物学功能提供了技术手段；建立了肝癌C1℃检测方法并
评价了CTC检测在肝癌病人临床诊断中的应用价值。
1．抗一GPC3抗体的制备及鉴定
①．抗．凹C3多抗的制备及鉴定：本研究采用基因工程技术重组表达
GPC3一N端蛋白。从人肝癌细胞株Hep(讫中提取总RNA，反转录合成
cDNA后用RT．PCR扩增出GPC3．N端基因；利用基因重组技术，将这部
表达并纯化GPa．N末端蛋白；用纯化的蛋白GPC3．N免疫大耳白兔制备
针对GPQ的特异性抗体。EUSA检测结果显示，用重组蛋白凹C3．N
免疫大耳白兔制备的兔源多克隆抗体效价高，其滴度达到l：20万以上；
采用硫酸铵沉淀法纯化了兔多抗血清，用WbsterIlblot及细胞免疫荧光技
术对纯化后的兔多抗进行免疫学鉴定。实验结果表明，制备的多克隆抗体
是针对GPC3．N重组蛋白的高效价抗体。
军事医学科学院硕士学位论文
应用生物分析软件预测分析GPC3蛋白优势抗原表位，根据分析结
果合成2个多肽(LWl和U坨)，免疫大耳白兔制备相应的多克隆抗体。
EUSA检测显示，LWl制备的兔源多克隆抗体有较高效价，其滴度可达
到1：20万以上；采用硫酸铵沉淀法纯化兔多抗血清，用细胞免疫荧光技
术对纯化后的兔多抗进行免疫学鉴定，结果显示LWl多克隆抗体能特异
识别GP∞蛋白。
‘②．抗．GPQ单克隆抗体的制备与鉴定：以合成的IMl及LW2多肽免
疫BAI．B／c小鼠，第三次加强免疫后，检测小鼠血清抗体效价，抗体滴度
达到1：20万以上。选择效价最高的免疫小鼠进行细胞融合制备单克隆抗
体。经筛选和鉴定，成功获得了10株高效价单抗细胞株。用Westemblot
法，以纯化的单克隆抗体为一抗，检测肝癌细胞系HepG2、Hull7、人正
常肝细胞L舵中GPC3．N的表达，对抗体的特异性进行鉴定。结果显示
LWl抗单克隆抗体能特异识别我们制备的重组蛋白(予C3．N和肝癌细胞
上表达的凹C3蛋白。采用细胞免疫荧光技术检测肝癌细胞系HepG2，
宫颈癌细胞细胞系Hela和正常肝细胞系L02中C舻C3的表达情况，结果
显示GPC3蛋白定位于癌细胞胞膜及胞浆，只在肝癌细胞系里有特异表
达，在人正常细胞及宫颈癌细胞中不表达。将制备的抗．(矛C3单抗应用
于肝癌患者循环肿瘤细胞的检测中，结果显示抗．GPC3单抗能特异识别
肝癌病人外周循环血液中的肝癌细胞。实验结果表明，本研究获得的抗
．GPa单抗具有良好的特异性，为深入研究GPa蛋白的生物学功能及其
在诊断中的应用奠定了基础。
2．肝癌病人外周血循环肿瘤细胞检测方法研究
外周血循环肿瘤细胞(CTC)指自发或因诊疗操作从原发肿瘤脱落下
来从而进入外周血循环的肿瘤细胞。CTC检测在肿瘤的分期、转移、复发
的早期预测等方面具有重要的意义。本研究采用免疫磁珠分离技术，去除
肝癌患者外周血中的绝大多数白细胞，从而将血中剩余的稀有细胞包括肿
瘤细胞进行富集，再利用免疫荧光技术对肿瘤细胞进行鉴别诊断。通过肝
癌细胞回收实验验证了CTC富集方法的有效性。实验结果显示，对血液标
军事医学科学院硕士
正在加载中，请稍后...血清GPC3联合AFP对原发性肝癌的诊断价值探讨--《中华检验医学杂志》2007年10期
血清GPC3联合AFP对原发性肝癌的诊断价值探讨
【摘要】：正 原发性肝癌早期诊断是改善预后的关键。AFP 联合肝脏超声筛查和随访是早期诊断的主要途径,但对慢性肝病基础上较为常见的良性病变与小肝癌的鉴别仍较困难。AFP≥200μg/L 作为诊断肝癌临界值(cut-off 值),敏感度仅为20%～45%。AFP 异质体(AFP-L3)检测等对肝癌有很好的特异度,但是敏感度也低。磷脂酰肌醇硫酸类肝素蛋白聚糖3(glypican-3,GPC3)是通过磷脂酰肌醇(GPI)锚定于细胞膜表面脂质的硫酸类肝素蛋白聚糖,参与调节胚胎生长发育。国外研究显示,GPC3在80%～90%肝癌组织中表达水平显著上调,在正常成人组织和其他肿瘤中低水平表达或不表达,约50%肝癌患者血清中亦可检测到升高水平的可溶性 GPC3蛋白,可能是一个值得期待的肝癌特异性标志。本研究采用 ELISA 测定肝癌和肝硬化患者血清
【作者单位】：
【分类号】：R735.7
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400-819-9993AFU,AFP,GP73和GPC3联合检测对原发性肝癌的诊断价值--《现代生物医学进展》2017年10期
AFU,AFP,GP73和GPC3联合检测对原发性肝癌的诊断价值
【摘要】：目的:研究α-L-岩藻糖苷酶(AFU)、甲种胎儿球蛋白(AFP)、高尔基体蛋白73(GP73)和磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3)联合检测对原发性肝癌的诊断价值。方法:选择2014年1月~2016年5月在我院进行诊治的原发性肝癌患者90例为肝癌组,同期住院诊治的肝硬化患者60例为肝硬化组,以及同期在我院体检健康者60例为对照组。比较三组的AFU、AFP、GP73和GPC3水平和阳性检出率,并观察AFU、AFP、GP73和GPC3单独检测和联合检测对原发性肝癌的诊断效率。结果:肝癌组和肝硬化组的AFU、AFP、GP73和GPC3水平均明显高于对照组(P0.05),且肝癌组明显高于肝硬化组(P0.05);肝癌组和肝硬化组的AFU、AFP、GP73和GPC3阳性率均明显高于对照组(P0.05),且肝癌组明显高于肝硬化组(P0.05);AFU、AFP、GP73和GPC3联合检测对原发性肝癌的特异性、敏感性、阳性预测值及阴性预测值均明显高于单独检测和三项指标联合检测(P0.05)。结论:AFU、AFP、GP73和GPC3联合检测可以提高对原发性肝癌的检出率,具有较高的临床应用价值。
【作者单位】：
【分类号】：R735.7
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