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鸡小肠液蛋白酶活力及其饲喂菜籽饼后酶活力的变化
优质期刊推荐生长猪小肠仿生消化试剂设计依据的研究--《中国农业科学院》2010年硕士论文
生长猪小肠仿生消化试剂设计依据的研究
【摘要】：
本研究的目的是,通过对猪小肠消化生理环境的模拟,研发一套标准化的生长猪小肠消化酶谱制剂及缓冲液试剂,并验证其体外消化的效果。为体外快速模拟猪小肠消化提供依据,也为模拟猪全消化道的消化及仿生法评定猪饲料营养价值解决关键问题。?
本论文第一部分旨在通过研究4种日粮条件下生长猪空肠液组成的差异,探讨一般生产条件下,日粮蛋白质来源与水平同生长猪空肠液组成的关系。试验采用4×4拉丁方设计,将4头体重接近,安装空肠瘘管的试验猪分期、分试验猪号分别饲喂4种试验日粮(玉米-豆粕型日粮、玉米-豆粕低蛋白日粮、玉米-豆粕-棉粕-菜粕日粮和玉米-豆粕-棉粕-菜粕低蛋白日粮),通过低温离心收集食糜上清液并分析其中消化酶活性和离子浓度。结果表明,日粮蛋白质来源与水平对生长猪空肠液中胰蛋白酶、糜蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶活性及钠离子、钾离子、氯离子、钙离子、镁离子与pH的影响均未达到差异显著水平(P
0.05)。这表明,生长猪肠液中离子的含量较稳定,而酶活测值的变异受诸多其它因素影响,日粮因素并未现主导地位。日粮蛋白质水平及来源对生长猪空肠液的组成没有显著影响。?
第二部分旨在研究饱和硫酸铵法与直接冻干法提取生长猪肠道消化酶活性回收率的差异,来确定一种提取消化酶的方法,为仿生消化法中模拟小肠液的配制提供高纯度、高活性的内源消化酶制剂。饱和硫酸铵法试验采用双因素完全随机设计,做6个pH 7的饱和硫酸铵溶液浓度梯度处理(30 %、40 %、50 %、60 %、70 %、80 %),直接冻干法做1个直接冻干浓缩处理。样品处理后,用自主研发的蛋白透析纯化系统低温下透析掉样品中的盐离子及部分杂蛋白,并制成冻干粉剂,计算各消化酶活性回收率和总蛋白回收率。每种方法做两个批次肠液,以考察方法的重复性。结果表明,直接冻干法提取生长猪小肠液消化酶较饱和硫酸铵法重复性好,回收率高。
第三部分旨在通过比较来自生长猪空肠段的内源消化液与模拟消化液的消化性能的差异,来验证自配模拟消化液的消化活力。试验采用配对设计,以内源肠液及模拟消化液为小肠段的消化液,用单胃动物仿生消化系统模拟猪小肠段的消化功能,测定4种原料(玉米、豆粕、麸皮、棉粕)和4种日粮(豆粕日粮、麸皮日粮、棉粕日粮、花生粕日粮)的干物质及能量消化率。结果表明,内源肠液与模拟肠液测定样品的干物质消化率、能量消化率均非常相关(R2=0.9909、R2=0.9840)且各消化率间绝的对偏差也很小。这表明,自配模拟消化液与生长猪内源空肠液的消化力非常接近。?
【学位授予单位】：中国农业科学院【学位级别】：硕士【学位授予年份】：2010【分类号】：S828
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创新得现在赢未来。在目前肠衣、肝素钠行情较去年都不好的情况下，其他生产厂家哀鸿遍野，我们富程却借助我们掌握的先进技术迅速发展了，由原来一天生产50根的量发展成为300根以上了。在可预见的今后时间，我们会继续扩展，计划1年后实现日产根的中等规模，5年后我们将成长为中国较大规模的肝素钠生产厂家之一，而后实现直接出口。&& 本所于2003年开发出了低温提取肝素钠技术，通过我们8年时间的推广发展这一技术已经在全国广泛使用！8年后的今天，我们技术上再次破茧成蝶获取了新的突破，利用生物萃取方法采用猪小肠提取肝素钠获得巨大成功，800根左右可提取一公斤肝素钠（效价在80左右，符合全国各地收购商之要求。这样的品质，早期提取技术需要2000根左右才能够做到）。这一技术上的成功，使信阳富程掌握的肝素钠提取技术再次走在了全国这一行业的前列。
&&&&&新技术学习费5800元 。我们也在专业生产，随到随学，在我们生产场地和工人师傅一起亲手操作，2-3天就可以全部掌握生产技术。回收全部产品。根据现在的市场价格，肝素钠每公斤2.1万元，肠衣一把100米30元，采用我们新技术，平均一根猪小肠提取肝素钠价值17.5元，肠衣和肠皮价值6元，总价值23.5元。加工一根猪小肠人工费用和原材料费2元。如果15元一根收购，一天收购加工100根，一根纯利润6元以上,年利润20万元以上。&有条件使用本所这种新技术的早期生产者也可以买断区域使用权，一个省20万，一个市区5万，签订合同保证长期使用。&&&&&&&
&&&&&本所近期全面更新和调整了我们2003年开发出的低温提取肝素钠技术，衍生出了第5种提取方法。这种方法的神奇之处在于汇聚了我们20年的关于提取肝素钠的技术精华（已经把影响产量和品质的6个关键技术要点全部完美地结合在了一起），从而能够使产量更高、品质更为稳定。我们经过多次实际生产，获取了怎么样高产的全部的细节数据，因而确定了提取肝素钠高产技术的根本规则，为一年四季能够高产稳产打下了牢固的坚实基础。我们探索出来的这种提取肝素钠的神奇技巧已经改变了很多投资人的命运，让他们拥有了波澜壮阔的人生！早期技术以及使云南的袁老板和高老板、贵州的李老板和刘老板、山东的谭老板和李老板、广东的罗老板和詹老板、湖南的艾老板（女）、四川的肖老板、黑龙江的马老板、辽宁的张老板、河北的刘老板、河南的李老板、新疆的朱老板和陈老板、甘肃的胡老板（女）和肖老板、浙江的华老板等等，都是我们近年来培训出来的优秀学员。本所优秀学员已遍布全国！这些优秀学员，学习使用我们低温提取肝素钠技术，都已快速成为了本地区这个行业的领军人物！
&&&&&&&&这项提取肝素钠技术是本所和中南大学材料加工硕士研究生共同开发，历经6年之久，耗资30多万元，经过上千次的实验始获成功。据专家评估预测，这种提取肝素钠技术其学术价值和经济价值极高，20年内不会有人超越。它作为一种肝素钠提取的新方法，由于具备了高产和节能两大优势，将被广泛的使用！本技术确实能够堪称为肝素提取史上***经典之技术：能够把组成小肠部分的多种蛋白质十分彻底地分解成肽链结构的核酸和氨基酸产物，肝素这种多糖成分就失去了可以依附的载体，形不成大的离子集团，就可以全部被提取出来。本技术非常完美，知道猪小肠重量即可知道能够提取多少肝素钠，并且品质可以控制，想要多高的品质，就可以做多高的，不需另外提纯就可以保证质量，而且在提取的过程中就可以知道品质是多少！
&&&&&&&&我们免费赠送提取器具，小规模生产手采用工刮肠衣，其它工具和原料投资2000元左右即可。同时，本所除可以免费传授国际标准的产品质量检测技术外，还可以传授一套由本所经过多年研究探索出的不需要投资，只要按照此方法操作，就能知道品质是多少。这样可避免卖产品时被欺瞒品质！
&&&&&&&&本所此项代技术已被1999年国家知识产权局专利局受理为发明专利：，发明专利公报公开号：CN121654A，专利申请日期99年10月11日；专利公开日2001年4月18日。并在2000年荣获河南省科技成果银奖。本所在此项技术已经很领先的代和第二代的基础上又改进创新发明了第三代低温提取技术！此项第三代技术有四个领域是国内和世界首创！为较安全的保护本所技术要点不被查阅盗窃，本所技术要点已全面放弃了申报国家专利，将作为一种神秘配方传授给学习我们技术的投资人，一旦掌握，就可以轻松高产，创造巨大财富，受益一生！
&&&&&&&&山西忻州的李老板已经从事肝素钠生产8年多了，知道我们这种低温新技术后就很快赶来学习了。他看到产品出来后，激动万分地说：&我这几年为学习肝素钠提取新技术，先后去过河北、江苏、四川、湖南等地，他们都声称研究出了什么新技术，可和我的几乎差不多，有的甚至还没有我的技术好！唯独你们的技术大大超出了我的想象，真是太了不得了！你们50根比我100根出的还多！！！其他地方的所谓新技术，加酒精后，肝素反应现象就如小雪花一样，看着就心凉！那样地反应现象产量***多只有0.6克，而你们的却象大雪飘飘，看着真叫人激动兴奋！***低也有1克啊！&
&&&&&&&&江苏徐州的一个老板也做肝素钠近20年了，今年看到我们在使用开发的低温提取肝素钠技术信息后，经过反复咨询，感觉我们这边确实很专业，而且我们敢于和学习者签订保证产量和质量的合同。有这样的承诺，所以他坚定地来了。当他看到我们肝素钠洗脱水出来，加酒精后，那种大雪飘飘的肝素钠沉淀反映现象就震撼了他！他说，之前也去学习过其他单位的肝素钠提取技术，说是比什么什么技术高，却怎么也看不到象你们这种反应结果啊！反而以研究出了什么技术，骗取投资人的血汗钱而已！学习技术真应该多考察几家，以免上当！要不是经常和你们沟通了解，感觉你们技术真正先进，真不敢乱学习技术了！你们技术能够提取这样多，真是创造了中国肝素钠生产技术上的奇迹！
&&&&&&&是啊，我们这样的技术的确值得每一个从事这个行业的老板来做做学生。哪怕你已经利用这个项目博取了千万财富，成了富甲一方的著名企业家。因为我知道，你的千万财富靠的是你薄利大干的规模获得的，而不是我们这样的优秀技能创造的。成熟先进的技术它比黄金还赤亮的光芒一定会照亮你以后的创业人生之路！河南焦作市武陟县的李老板，收购周边几个地方的货源，日加工200根以上，年获利50万左右。四川自贡的李老板也日生产300根左右，利润惊人！云南楚雄的袁老板建了2个加工点，日加工300根，去年获利90万以上。哈密的朱老板与别人合作，今年日生产500根以上！湖北咸宁的杨老板，在长春去年与人合作日生产1000根以上！本所这样的优秀学员遍布全国各地都有。本所也在专业生产，随到随学，学习费5800元，并赠送提取器具。包销全部产品，多少都收，现金结账，签订20年产品包销法律合同，本所多年从事该项目的发展，与各地的产品收购点都有联系，可给离我所远的学员提供各地的肠衣和肝素钠收购点，也可在本地卖产品。其他收购电话，如上海、徐州、南京、杭州、义乌、富阳、合肥、阜阳、济南、枣庄、哈尔滨、长春、沈阳、大连、天津、唐山、正定、石家庄、西安、太原、郑州、安阳、洛阳、漯河、武汉、襄樊、长沙、南昌、昆明、贵阳、成都、自贡、重庆等地。本产品在国际上用于心脑血管疾病，从1940年至今。持久的市场，一次学成，可干一生的事业。本所强大的技术力量将支持每一位投资人获取事业辉煌！该技术曾荣获河南省科技成果奖！
单位：信阳市富程生化工业研究所
办公地址：河南省信阳市南京大道1号
办公电话：&&&&所　　长：刘建军（工程师，低温提取肝素钠技术发明人。2003年成功开发出了高产节能的低温提取肝素钠技术,使中国肝素钠提取进入了一个新时代；且如何把肝素从肠粘膜里彻底地解离出来，实现高产，探索制定出了一套完善的技术方案，成为提取肝素钠行业专家)
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本所于1991年4月由信阳市科委和工商局批准，注册成立（注册号：7）。主要从事猪小肠肠衣、肝素钠的生产与技术研究推广工作。本所下设生产和技术研究两大体系。我们一直致力于本行业的发展，创造出了多个国内领先。所推广培训的学员遍布全国各地。自1991年以来，是全国一家这样致力于该项目技术传播的单位，为本项目能在全国广泛地收集资源加工为国家出口创汇，作出了矫人的成绩！较为全面地发展体现了“科技是生产力”的正确理论！
近两年来本所又依据多年技术实践经验和现代科技手段，又创造出了低温肝素钠提取技术。低温节能稳定高产环保，实现了几代肝素钠提取人的梦想！为能尽快把这一新技术全面推向社会，改变目前国内仍以老工艺为主，浪费国家资源状态，本所将进一步加大宣传，作好发展推广工作。
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*联系我们时请说明来自中国供应商！猪模拟小肠液的制备及仿生消化法测定饲料可消化养分含量的研究--《中国农业科学院》2015年硕士论文
猪模拟小肠液的制备及仿生消化法测定饲料可消化养分含量的研究
【摘要】：本试验首先研究生长猪空肠液中消化酶的特性、空肠液消化酶的纯化与模拟肠液的制备方法,在此基础上探讨了基于单胃动物仿生消化系统(SDS-Ⅱ)和模拟小肠液的仿生消化法测定日粮消化能和可消化氨基酸含量的可行性。从5个方面开展工作:试验一旨在研究不同生长阶段及日粮条件下猪空肠液消化酶的活性,为模拟小肠液的制备参数提供参考。试验采用2×2两因素完全随机设计,其中日粮设两个水平,即玉米-豆粕型日粮和玉米-玉米干酒糟(DDGS)-米糠粕型日粮,猪生长阶段设两个水平,即生长期(60-100天)和育肥期(100-140天),测定空肠液中淀粉酶、胰蛋白酶、糜蛋白酶、脂肪酶的活性、总蛋白含量和p H。结果表明:日粮类型与生长阶段对生长猪空肠液中各消化酶体积比活性及p H均无显著影响(P0.05),猪空肠液单位体积主要消化酶平均活性和p H分别为:淀粉酶189.79 U/ml、胰蛋白酶62.10U/ml、糜蛋白酶7.36 U/ml、脂肪酶4.91U/ml和p H 6.44。试验二旨在探讨空肠消化液中主要消化酶的活性与日粮养分消化率间的相关性,为模拟肠液制备中消化酶活性的误差控制标准提供参考。玉米-豆粕型日粮和玉米-DDGS-米糠粕型日粮分别设16个重复,每个重复1头猪,测定日粮及粪样的干物质、盐酸不溶灰分(AIA)、粗蛋白、总能及肠液中主要消化酶的活性,然后对每种日粮下的养分消化率与主要消化酶的活性进行简单相关分析和典型相关分析。结果表明:1)两种日粮下,生长猪个体间4种主要消化酶活性的变异系数均在20%以上,而日粮干物质、粗蛋白、能量消化率的变异系数均在1.5%以内;2)猪空肠液中淀粉酶、胰蛋白酶和糜蛋白酶活性与日粮养分消化率无显著相关性(P0.05),而脂肪酶的活性与日粮养分消化率有一定的相关性,但对养分消化率变异的贡献是有限的。试验三分为两部分进行:首先探讨猪空肠液中消化酶的纯化方法,然后比较以空肠液纯化粉剂制备的模拟小肠液与以试剂酶制备的模拟小肠液在消化能力上的差异。采用2×2两因素完全随机设计,即日粮和猪生长阶段各设两个水平。采用冰乙醇沉淀-冻干纯化空肠液中的消化酶,测定纯化过程中消化酶的活性损失和肠液纯化粉剂的比活性。然后,根据四个处理下的空肠液中消化酶的活性,以试剂酶、处理组内肠液纯化粉剂+试剂酶、所有处理肠液混合液纯化粉剂+试剂酶制备模拟小肠液分别测定日粮的水解物能值(EHGE),并与生物学法测值进行相关性分析。结果表明:1)乙醇沉淀-冻干获得的肠液消化酶活性的回收率均在60%以上,日粮类型和生长阶段对纯化粉剂的消化酶活性无显著影响;2)乙醇沉淀过程中消化酶的活性损失显著的高于冻干过程(P0.01);3)以肠液纯化粉剂制备的模拟小肠液测定日粮的EHGE均显著高于以试剂酶制备模拟肠液的相应测值(P0.05),且与生物学法测值的相关性更高。以上结果表明,乙醇-沉淀冻干法提纯的肠液消化酶粉剂可以更好地模拟小肠液。试验四旨在研究基于胃蛋白酶-模拟猪肠液-Viscozyme复合酶的仿生消化法估测猪棉籽粕日粮的消化能值。分别采用肠液纯化粉剂和试剂酶模拟猪小肠液测定11种脱酚棉籽蛋白和19种棉籽粕日粮的酶水解物能值,并与生物学法测值进行简单相关分析。结果表明:1)采用肠液纯化粉剂模拟小肠液测定脱酚棉籽蛋白的表观酶水解物能值(AEHGE)和真酶水解物能值(TEHGE)与试剂酶测值间均具有很高的相关性(P0.05,r=0.96);2)采用肠液纯化粉剂比试剂酶制备的模拟小肠液测定的棉籽粕日粮的酶水解物能值与生物学法测值的相关性更高(r=0.94 VS 0.87)。这表明基于猪源性消化酶粉剂制备的模拟小肠液在棉籽粕酶水解物能值的测定上优于试剂酶。试验五研究基于胃蛋白酶-肠液纯化粉剂两阶段仿生消化法测定棉籽粕可消化氨基酸的含量。以仿生消化法分别测定10种不同来源棉籽粕的可消化氨基酸含量,并与生物学法测值进行相关性分析。结果表明:仿生消化法测定的棉籽粕除蛋氨酸外的其他氨基酸的可消化含量均与体内法测值显著相关(P0.05),这表明猪源性消化酶粉剂制备的模拟小肠液适用于棉籽粕可消化氨基酸含量的测定。
【学位授予单位】：中国农业科学院【学位级别】：硕士【学位授予年份】：2015【分类号】：S828
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