一、了解奶粉配方什么奶粉最好?大家都会异口同声的答“越接近母乳的奶粉越好”，但就目前研究情况，母乳的成分构成还未完全清楚，那么我们如何判断成分含量的科学合理性呢?这就要依据婴儿配方食品的国家标准。

1、配方奶粉必需含有的成分国家标准规定了婴幼儿配方食品中必须添加的成分及含量，以及允许添加的成分及含量，是配方奶粉必需符合的基本的要求。包括蛋白质、脂肪、碳水化合物、维生素、矿物质等基础营养素。 《食品安全国家标准婴儿配方食品》(GB)规定了适用于0-1岁婴儿食用的配方食品；《食品安全国家标准较大婴儿和幼儿配方食品》(GB)规定了适用于6个月-3岁婴幼儿食用的配方食品。

2、配方奶粉可添加成分国标中还给规定了部分可添加成分的添加范围，其中益生元、DHA、ARA、牛磺酸、微量元素硒、锰、肌醇、左旋肉碱等成分都是可添加但非必须添加的成分。由于市面上的奶粉产品基本无一例外地加入，所以很多人都会误以为这都是奶粉必含成分。

3、奶粉中不能含的成分

A、蔗糖、果糖:看奶粉成分表可知，碳水化合物是奶粉中含量最多的，主要成分为乳糖。根据国标《食品安全国家标准婴儿配方食品》(GB)规定：“对于乳基婴儿配方食品，首选碳水化合物应为乳糖、乳糖和葡萄糖聚合物。只有经过预糊化后的淀粉才可以加入到婴儿配方食品中，不得使用果糖。”蔗糖可以水解成葡萄糖和果糖，甜度是乳糖的5倍，不易被消化。国家明文规定配方奶粉中禁止添加蔗糖，不得添加任何食用香料。

B、香精、香料:卫生部公布《食品用香料、香精使用原则(征求意见稿)》及相关附件，把包括婴儿配方食品、较大婴儿和幼儿配方食品在内的20种食品，列为禁加食用香料、香精的范围。按相关定义，这些食品包括适用于6-36个月的婴幼儿配方奶粉和辅食产品。4、特殊配方以上成分构成是普通配方奶粉的要求。实际上，对市面上还有一些特殊配方奶粉并不适用，如配方豆奶粉是完全不含乳糖的，是专为不能食用乳糖的婴幼儿设计的配方。

1、DHA并非越多越好任何营养补充都是要有合理的量，摄入过剩的DHA会成为宝宝成长的负担和障碍，影响其他营养成分(如蛋白质)的正常摄入，反会导致营养不良。因此我国配方食品标准中明确规定，DHA含量必须低于总脂肪酸的0.5%。

2、1段奶粉（通常指0到6个月的宝宝食用的奶粉）不能含蔗糖蔗糖难消化、导致日后肥胖、龋齿、导致偏食挑食……目前，限于1段奶粉不能含蔗糖，但部分3段幼儿配方奶粉（通常指1到3岁的宝宝食用的奶粉）可以添加。

3、别把棕榈油魔鬼化曾有一段时间，几乎所有的品牌都在强调自己奶粉不含棕榈油，含棕榈油的奶粉就此被列入“禁品黑名单”。奶粉中要不要添加棕榈油仍是目前的争议话题，美国一些研究专家认为棕榈油会影响奶粉中的钙质吸收，宝宝长期饮用有棕榈油的奶粉容易形成钙皂，会有便秘的现象，因此引出了“奶粉不能添加棕榈油”的误传。

实际上，棕榈油是普通食品，被人们当成天然食品被广泛用于烹饪和食品制造业。棕榈油容易被消化、吸收以及促进健康，能够在婴儿体内合成母乳中同样的成分棕榈油酸。母乳中的饱和脂肪酸以棕榈酸为主，单不饱和脂肪酸以油酸为主。母乳中含有较多的棕榈酸，可以减轻婴幼儿自身合成棕榈酸的负担。因此含有棕榈油的奶粉，帮助宝宝对能量吸收和利用。至于棕榈油已引起宝宝大便干硬的现象，实际上是任何一种脂肪酸与钙结合都会形成钙盐，并非只有棕榈油如此，只不过奶块的大小不同而已。关于婴儿喝奶粉后引起便秘、热气、上火，其实原因不仅仅是饮食造成的，而是与外在环境、宝宝体质（肠道功能，生理缺陷等体质因素）、妈妈的饮食等众多因素有关。

1.母乳与牛奶中乳清蛋白的比例？

奶类中的蛋白质主要是由乳清蛋白和酪蛋白组成，乳清较容易被消化，母乳中的70%乳清蛋白，30%酪蛋白；牛奶中含20%乳清蛋白，80%酪蛋白。

2.a-乳清蛋白的作用？

在母乳中α-乳清蛋白的浓度是2-3克/升，占总蛋白含量的25-35％。相比较，在牛乳中α-乳清蛋白只占总蛋白的2-5％。

（1）提高蛋白质的生物利用度，从而降低蛋白质的总量，有效降低宝宝肾脏的负担。更容易让宝宝消化吸收。

（2）抗菌、抗病毒、抗肿瘤、抗氧化，有免疫刺激作用从而提高免疫力。

（3）含有丰富的色氨酸（快乐因子），有助于促进宝宝的神经发育，调节睡眠情绪，增进食欲。

（4）可以在宝宝体内转化成牛磺酸，保证视力、心脏、大脑的正常发育，并有抗疲劳作用。

（5）是唯一能结合钙的乳蛋白成分，可紧密结合2个ca2＋,有利于骨骼发育和维持骨骼健康。

（6）婴儿期重要的器官及神经系统的发育都是在高质量的睡眠中完成的。缺少α-乳清蛋白的摄入可能影响宝宝的睡眠质量，宝宝睡眠不好可能会使宝宝烦躁哭闹、消化吸收减弱奶量降低、生长发育迟缓。

牛磺酸又称牛胆酸最初是从雄牛的胆汁中发现的，是一种非蛋白质氨基酸是婴幼儿生长发育的必需氨基酸。牛磺酸对促进大脑生长发育,增强机体免疫能力；对心血管系统有较强的保护作用，有增强心肌细胞功能等作用；可以促进脂肪乳化和视网膜的发育，帮助神经传导和视觉机能的完善。成人可以通过肝合成牛磺酸，由于婴幼儿的身体内酶类的合成的系统还没有完全发育好，还不能通过自身合成，婴幼儿体内所需要的牛磺酸只能依靠食物来提供。

各种食物中包含的牛磺酸的数量也是不一样的，一般说来，植物性的食物中是不会包含牛磺酸的，动物性的食物中含有的牛磺酸却是相当的丰富，比如平均每一百克的食物中含有的牛磺酸的数量是这样的：牛奶四毫克，人初乳七十毫克，人成熟乳五十四毫克，猪肉五十毫克，牛肉三十六毫克，羊肉四十七毫克以及鸡肉三十四毫克等。母乳中含有的牛磺酸要比牛奶中多十几倍，人的初乳中的牛磺酸的含量要比成熟乳来的更加的多，母乳是婴儿体内牛磺酸的主要来源，牛乳、鸡蛋等食品中几乎不含牛磺酸。

所以喂养的时候建议尽量母乳喂养，在母乳不足的情况下，要给宝宝适量添加婴幼儿配方奶粉。以保证体内各种营养素的供给。

OPO目前是一种比较珍贵的成份，它的结构与母乳中脂肪非常相近，因此放在奶粉里更亲和人体，促进宝宝营养的吸收。

（1）帮助DHA、AA的有效利用，促进智力发育，使宝宝头脑更聪明；

（2）与可溶性膳食纤维组合，帮助增加肠道双歧杆菌的数量，改善胃肠道，激活免疫细胞，降低胃肠道疾病发生率；

（3）促进钙和能量吸收，促进体格发育；

（4）改善吸收，亲和肠道，帮助“便便”软化约20%，解决便秘上火老问题。

贝凯目前经营品牌S&C以及欧乐宝经营品牌咔旺金装产品均有添加。

5.CPP酪蛋白磷酸肽

是以牛乳酪蛋白为原料，通过生物技术制得的具有生物活性的多肽，可用于各种营养、保健食品中，能有效促进人体对钙、铁、锌等二价矿物营养素的吸收和利用。

6.4A配方是什么？有什么作用？

DHA、ARA、ALA（α_亚麻酸）、LA（亚油酸）；α_亚麻酸与亚油酸是DHA＆ARA的前提物质，可在婴儿体内分别转化为DHA和ARA;4A配方让宝宝聪明好视力。

7.五种核苷酸的作用是什么？

按照母乳中核苷酸的配比，贝凯经营品牌强化了五种核苷酸的添加：

（1）提高机体免疫系统功能

（2）有利于肠道生长发育；刺激双歧杆菌生长，抑制其他有害菌的生长，从而减少婴儿腹泻的发生。

（4）提高婴儿血浆中系列多不饱和脂肪酸的水平

（5）神经细胞的营养作用。

（6）参与调剂肝的蛋白组成，维持肝的正常功能。

8.什么是水解蛋白？什么奶粉含水解牛乳蛋白？

水解蛋白是将蛋白质分解成较小分子的混合物，容易被消化吸收，使用后不易引起过敏、腹泻，贝凯经营防腹泻奶粉内均含水解牛乳蛋白。

9.叶黄素的作用是什么？

帮助眼睛健康的关键抗氧化剂，保护婴幼儿的眼睛视力

10.双重免疫活性组合因子是什么？作用是什么？

双重活性组合因子：IgG+乳铁蛋白

作用：提高系统免疫力、调节肠道菌群，促进有益菌生长发育

11.乳铁蛋白（lf)的作用是什么？

（1）抗菌和抑菌、抗病毒效应，调节机体免疫功能，增强机体抗病能力。

（2）促进肠道有益菌的增长，调整肠微生物菌群。

（3）在肠道中刺激和强化铁的吸收，提高肠道对铁离子的吸收等作用。

12.双歧因子组合是什么？作用是什么？

低聚果糖+低聚半乳糖，作用是促进有益菌的生长，抑制有害菌数量，为宝宝营造有益的肠道环境，帮助宝宝更好吸收，提高免疫力

13.β_胡箩卜素的作用是什么？

保护视力；抗氧化，提高宝宝免疫力。

是指改善宿主微生态平衡而发挥有益作用,达到提高宿主健康水平和健康状态的活菌制剂及其代谢产物。常见的有乳酸菌、双歧杆菌、酵母菌等。

通过选择性的刺激一种或少数种菌落中的细菌的生长与活性而对寄主产生有益的影响从而改善寄主健康的不可被消化的食品成分，即供给益生菌利用的营养物质。

是神经递质乙酰胆碱的前体，具有促进大脑发育、提高记忆力及信息传递的作用。

是一种促使脂肪转化为能量的类氨基酸，红色肉类是左旋肉碱的主要来源。

是甲硫氨酸的一个类型（分L型和D型），是人体必需氨基酸之一。能够预防和治疗有毒金属非金属对人体的伤害。

卵磷脂具有提高认知能力和提高长链多不饱和脂肪酸生物活性的作用。

主要生理功能为维持正常生长、生殖、视觉、上皮组织健全及抗感染免疫功能。缺乏会导致夜盲症、干眼病、皮肤及粘膜角化等。

专利名称：：地衣芽孢杆菌α-淀粉酶的改良变体的制作方法
：本文公开的是编码具有淀粉酶活性的多肽的核酸，其中多肽是芽孢杆菌α-淀粉酶，尤其是地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)α-淀粉酶的修饰形式。
：淀粉由直链淀粉(15-30%w/w)和支链淀粉(70-85%w/w)的混合物组成。直链淀粉由具有约60，000-约800，000的分子量(MW)的α-1,4-连接的葡萄糖单元的线性链所组成。支链淀粉是包含相同α-1，4-连接葡萄糖单元以及每24-30个葡萄糖单元有一个α-1，6分支点的分支聚合物；其分子量可高达1亿。目前，通过酶催化的工艺自淀粉生产浓缩的葡萄糖浆形式的糖，该工艺包括(1)用α-淀粉酶将固态淀粉液化(或稀化)为具有平均聚合度约7-10的糊精，和(2)用淀粉葡糖苷酶(也称作葡糖淀粉酶)将生成的液化淀粉(即淀粉水解产物)糖化。生成的浆液具有高葡萄糖含量。多数商品化生产的葡萄糖浆液随后被酶促异构化为称作异糖浆(isosyrup)的葡萄糖/果糖混合物。α-淀粉酶(mun.151(1)，25-31(1988))的氨基酸残基对应的氨基酸残基。可在位于编码的变体表面的带电荷残基上或在活性位点氨基酸残基上进行至少一个氨基酸取代、插入或缺失。在一个实施方案中，在除1位残基外的氨基酸残基上进行至少一个氨基酸取代、插入或缺失。变体包含从残基2延伸至残基105和从残基208延伸至残基396的结构域A、从残基106延伸至残基207的结构域B和从残基307延伸至C端的结构域C。变体可在结构域A、B或C中具有至少一个氨基酸取代、插入或缺失。变体可具有至少2个、至少5个、至少10个、11-30个或11-70个氨基酸取代、插入或缺失。氨基酸取代、插入或缺失的总数可以是1-30、或1-50、或1-70、或这些范围之间的任一整数。在一些实施方案中，变体具有SEQIDN0:3-15(SEQIDNO.3是变体的亲本)的氨基酸序列之一。变体可以包含以下氨基酸取代、插入或缺失中的一个或多个K23N、Q26R、A33K、T49A、A52N、H68N、E82Q、K88N、H91K、R93N、D94G、D114L、T116R、D121N、A123N、D124N、R127Q、V128E、I129V、H133Y、L134T、K136E、H140Y、H142D、S148N、Y150H、D152N、H156R、T163V、E167Q、K170R、在172位插入N、Q178R、A181G、S187D、N188T、N190F、K213R、R214N、E222T、F238Y、E250S、K251A、E255N、Y262F、Q264K、H293Y、T297K、R305Q、K306N、K319H、G332E、Q333E、S334A、Q340E、T341E、从TKGDSQREI至IPTHGV-—(其中连接号代表缺失)中取代或缺失残基369-377、K389E、K392Q、Q393K、A398R、H400N、D416N、V419H、R437W、N444K、E447Q、H450S、E458G、E469N或H471S。另一目的是提供包含上述核酸的宿主细胞。还提供包含上述核酸的载体以及包含该载体的宿主细胞。该宿主细胞可以是微生物，其包含但不限于细菌或真菌。细菌宿主细胞可以是选自枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)、地衣芽孢杆菌、迟缓芽孢杆菌(B.Ientus)、短芽孢杆菌(B.brevis)、嗜热脂肪芽孢杆菌(B.stearothermophilus)、嗜碱芽孢杆菌(B.alkalophilus)、解淀粉芽孢杆菌(B.amyloliquefaciens)、凝结芽孢杆菌(B.coagulans)、环状芽孢杆菌(B.circulans)、灿烂芽孢杆菌(B.Iautus)、苏云金芽孢杆菌(B·thuringiensis)、变铅青链霉菌(Streptomyceslividans)或鼠灰链霉菌(S.murinus)的革兰氏阳性菌；或革兰氏阴性菌，其中该革兰氏阴性菌为大肠杆菌(Escherichiacoli)或假单胞菌属(Pseudomonas)物种。另一目的是提供产生地衣芽孢杆菌α-淀粉酶变体的方法，其包括(1)将野生型地衣芽孢杆菌α-淀粉酶的结构与相对于该地衣芽孢杆菌α-淀粉酶具有至少一种优选特性的模式α-淀粉酶进行比较；(2)用模式α_淀粉酶鉴定野生型地衣芽孢杆菌α-淀粉酶的至少一个结构保守的氨基酸或结构区域；(3)构建野生型地衣芽孢杆菌α-淀粉酶的变体，其在上述步骤(2)鉴定的氨基酸残基或结构区域中经修饰；并(4)测试变体以确定是否赋予变体所述至少一种优选特性，其中变体与野生型地衣芽孢杆菌α“淀粉酶相比具有至少一种改变的特性。在一个实施方案中，模式α-淀粉酶是芽孢杆菌属物种707号α-淀粉酶。另一目的是提供包含上述变体的手工或自动洗涤组合物(dishwashingcomposition)。手工或自动洗涤组合物还可以包含表面活性剂、洗涤剂助剂、络合剂、聚合物、漂白体系、稳定剂、增泡剂、抑泡剂、防腐蚀剂、悬污剂、抗污垢再沉积剂、染料、杀菌剂、助水溶剂、晦暗抑制剂和香料中的一种或多种。清洁餐具的方法包括使用手工或自动洗涤组合物足以清洁餐具的时间。另一目的是提供包含上述变体的洗涤剂添加剂。包含洗涤剂添加剂的衣物洗涤剂还可以包含表面活性剂、洗涤剂助剂、络合剂、聚合物、漂白体系、稳定剂、增泡剂、抑泡剂、防腐蚀剂、悬污剂、抗污垢再沉积剂、染料、杀菌剂、助水溶剂、荧光增白剂、织物调节剂和香料中的一种或多种。洗涤剂添加剂可以用于洗衣或洗餐具。洗涤剂添加剂可选地可以是无粉尘颗粒、微粒、稳定的液体或受保护的酶的形式。洗涤剂添加剂可以还包含选自以下的酶纤维素酶、蛋白酶、氨肽酶、淀粉酶、糖酶、羧肽酶、过氧化氢酶、几丁质酶、角质酶、环糊精葡聚糖转移酶、脱氧核糖核酸酶、酯酶、α-半乳糖苷酶、半乳糖苷酶、葡糖淀粉酶、α-葡糖苷酶、β-葡糖苷酶、卤代过氧化物酶、转化酶、漆酶、脂肪酶、甘露糖苷酶、氧化酶、溶果胶酶、肽谷氨酰胺酶(peptidoglutaminase)、过氧化物酶、肌醇六磷酸酶、多酚氧化酶、蛋白水解酶、核糖核酸酶、转谷氨酰胺酶、木聚糖酶、支链淀粉酶、异淀粉酶、卡拉胶酶(carrageenase)或其任意组合。淀粉酶可以是另一种α-淀粉酶、β-淀粉酶、异淀粉酶或葡糖淀粉酶。另一目的是提供包含上述洗涤剂添加剂或上述变体的洗涤剂组合物。该洗涤剂组合物还可以包含选自以下的酶纤维素酶、蛋白酶、氨肽酶、淀粉酶、糖酶、羧肽酶、过氧化氢酶、几丁质酶、角质酶、环糊精葡聚糖转移酶、脱氧核糖核酸酶、酯酶、α“半乳糖苷酶、β“半乳糖苷酶、葡糖淀粉酶、α-葡糖苷酶、β-葡糖苷酶、卤代过氧化物酶、转化酶、漆酶、脂肪酶、甘露糖苷酶、氧化酶、溶果胶酶、肽谷氨酰胺酶、过氧化物酶、肌醇六磷酸酶、多酚氧化酶、蛋白水解酶、核糖核酸酶、转谷氨酰胺酶、木聚糖酶、支链淀粉酶、异淀粉酶、卡拉胶酶或其组合。另一目的是提供包含在水溶液中的上述变体，可选地和其他酶的纺织品脱浆组合物。纺织品脱浆的方法包括使用该脱浆组合物足以脱浆所述纺织品的时间。另一目的是提供包含在水溶液中的上述变体的淀粉加工组合物。淀粉加工组合物还可以包含葡糖淀粉酶、异淀粉酶、支链淀粉酶、肌醇六磷酸酶或其组合。加工淀粉的方法包括使用该组合物足以加工淀粉的时间。另一目的是提供包含在溶液或凝胶中的上述变体的生物膜水解组合物，其可选地具有纤维素酶、半纤维素酶、木聚糖酶、脂肪酶、蛋白酶、果胶酶、抗微生物剂或其组合。水解生物膜的方法包括使用该组合物足以处理生物膜的时间。另一目的是提供包含在溶液中的变体的用于糖化淀粉的组合物。糖化淀粉的方法包括使用该组合物足以糖化淀粉的时间。另一目的是提供包含在溶液中的上述变体的用于液化淀粉的组合物。液化淀粉的方法包括使用该组合物足以液化淀粉的时间。另一目的是提供包含在溶液或在凝胶中的上述变体的烘焙组合物。烘焙的方法包括对待烘焙物质使用该烘焙组合物。附图简述附图并入本说明书中并构成其一部分，用于举例说明实施方案。在附图中图1显示了PURASTAROxAm(DaniscoUSInc.,GenencorDivision；之前称为GenencorInternational,Inc.)中所用的地衣芽孢杆菌α-淀粉酶和枯草芽孢杆菌属物种707号α-淀粉酶(Swissport检索号Ρ19571)间的三维结构比对。结构比对包含显示为结合至活性位点的底物类似物Acarbose(一种抑制剂)。α_淀粉酶的A结构域位于比对结构中间底物的右边，B结构域在左边底物的左手侧，C结构域占据图片的右侧。图2显示野生型地衣芽孢杆菌α-淀粉酶(检索号CAA01355；上一行)和芽孢杆菌属物种707号α-淀粉酶(Swissprot检索号Ρ19571；下一行)间的序列比对。在相同残基下用星号标记。图3显示12种地衣芽孢杆菌α-淀粉酶变体的氨基酸取代、插入或缺失的数目、一般类型和/或结构域定位。图4显示用于OxAm亲本和变体表达的pHPLT_0xAm质粒示意图。图5显示培养于培养基Ml或M2中的OxAm和OxAm变体(V2、V3和V5)的清洁活性。图6显示生长于培养基Ml中的OxAm禾ΠOxAm变体(VI、V2、V3、V5、V6和V9)的清洁活性。发明详述提供在包含含漂白剂的清洁制剂(如自动餐具洗涤剂和衣物洗涤剂制剂)中具有更好性能的地衣芽孢杆菌α-淀粉酶的变体。特别是，该变体具有比野生型地衣芽孢杆菌α-淀粉酶更高的比活性。下文详述这是如何实现的，以及由此产生的α-淀粉酶变体的组合物和用途。1.定义和缩写词在本详述中，应用下面的缩写和定义。必须注意如本文所使用，除非上下文另有明确指明，否则单数形式“一”、“一个”和“该”涵盖对复数形式的提及。因此，例如，提到“一种酶”包括多种此类酶，而提到“该剂量”包括一种或多种剂量以及本领域技术人员已知的其等价剂量等。除非另有定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有本领域普通技术人员通常所理解的含义。下面提供如下的术语。1.1.定义淀粉酶”应指这样的酶，其能够催化淀粉的降解等。“淀粉酶”包括任何淀粉酶，例如葡糖淀粉酶、α-淀粉酶、淀粉酶、芽孢杆菌属物种(例如地衣芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌)的野生型α-淀粉酶。淀粉酶是切割淀粉中α-D-(1—4)0-糖苷键的水解酶。通常，将α-淀粉酶(EC3.2.1.1;a-D-(1—4)-葡聚糖葡聚糖水解酶)定义为以随机方式切割淀粉分子内α-D-(l—4)0-糖苷键的内切酶。与此相反，外切淀粉水解酶如β-淀粉酶(EC3.2.1.2;α-D-(1—4)-葡聚糖麦芽糖水解酶)和一些产物特异性淀粉酶如产麦芽糖(maltogenic)α-淀粉酶(EC3.2.1.133)从底物的非还原末端切割淀粉分子。β-淀粉酶、α"葡糖苷酶(EC3.2.1.20；α-D-葡糖苷葡糖水解酶)、葡糖淀粉酶(EC3.2.1.3；α-D-(1—4)-葡聚糖葡糖水解酶)，以及产物特异性淀粉酶可以从淀粉产生特定长度的低聚麦芽糖。“α-淀粉酶变体”、“α-淀粉酶变体多肽”和“变体酶”指具有已修饰野生型α-淀粉酶氨基酸序列的氨基酸序列的α-淀粉酶蛋白质。如本文所使用，“亲本酶”、“亲本序列”、“亲本多肽”、“野生型α-淀粉酶蛋白”和“(复数形式的)亲本多肽”应指α-淀粉酶变体多肽所衍生自的酶和多肽。野生型α-淀粉酶天然存在。为了本公开的目的，认为PURASTAROxAm中所用的地衣芽孢杆菌α-淀粉酶是“野生型”α-淀粉酶。这意味着，“地衣芽孢杆菌α-淀粉酶变体”特异地排除了PURASTAROxAm中所用的地衣芽孢杆菌α-淀粉酶。“PURASTAROxAm”、"PURASTAR”和“OxAm”在本文中可互换使用。“α-淀粉酶变体”还特异地排除了只有信号序列的氨基酸残基或成熟蛋白质的第一个残基与野生型α-淀粉酶不同的α-淀粉酶。这意味着，为了本公开的目的，成熟α-淀粉酶变体的序列在除第一个残基外的位置与成熟野生型α-淀粉酶不同。“变体”指多肽和核酸二者。术语“变体”可与术语“突变体”互换使用。变体包含分别在氨基酸或核苷酸序列中的一个或多个位置插入、取代、颠换、平截和/或倒位。变体核酸可以包括与能够同本文所示核苷酸序列杂交的序列相互补的序列。例如，变体序列与能在严格条件(例如50°C禾口0.2XSSCllXSSC=0.15MNaCl,0.015M柠檬酸钠，pH7.0})下杂交至本文所示核苷酸序列的序列互补。更具体地，术语变体包含与能在高度严格条件下(例如65°C和0.IXSSC)杂交至本文所示序列的序列互补的序列。“分离的”指序列至少基本上不含有与该序列天然相关的且天然存在的至少一种其它组分。“纯化的”指物质处于相对纯的状态，例如至少约90%纯的，或至少约95%纯的，或至少约98%纯的。“热稳定的”指所述酶比对照酶更热稳定。在本申请中，若在相同的实验条件(例如相同的温度、底物浓度等)下特定的时间间隔后，α-淀粉酶变体具有相对更高的酶活性，则α-淀粉酶变体比野生型地衣芽孢杆菌α-淀粉酶更热稳定。备选地，与对照酶相比，更热稳定的酶具有通过差示扫描量热法测定的更高的热容。"pH范围”指酶表现活性的pH值。如本文所使用，“pH稳定”指酶在特定pH下比对照酶更稳定。在本申请中，若α-淀粉酶变体在相同实验条件(例如相同的PH等)下特定的时间间隔后具有相对更高的活性，则α-淀粉酶变体比野生型地衣芽孢杆菌α-淀粉酶更PH稳定。如本文所使用，“食品”应当既包括准备好的食品，又包括食品配料，如面粉。如本文所使用，“食品配料”应当包括添加到或能够添加到功能食品或食料中的制齐U，并且包括在广泛种类的需要例如酸化或乳化的产品中以低水平使用的制剂。食品配料可以为溶液的形式或作为固体，这取决于用途和/或应用模式和/或使用模式。如本文所使用，“功能食品”指不仅能够提供营养功效和/或味觉满足，而且能够为消费者提供其它有益功效的食品。如本文所使用，“氨基酸序列”与术语“多肽”和/或术语“蛋白质”同义。一些情况下，术语“氨基酸序列”与术语“肽”同义。一些情况下，术语“氨基酸序列”与术语“酶”同义。如本文所使用，“核苷酸序列，，或“核酸序列，，指寡核苷酸序列或多核苷酸序列，及其变体、同源物、片段和衍生物。核苷酸序列可以是基因组的或合成的或重组的来源，并且可以是双链或单链(代表正义或反义链)。如本文所使用，术语核苷酸序列包括基因组DNA、cDNA、合成的DNA和RNA。“同源物是指与主题氨基酸序列和主题核苷酸序列具有一定程度同一性或“同源性”的实体。“同源序列”包括与主题序列具有至少75%、80%、85%或90%同一性、至少95%、96%、97%、98%或99%同一性的氨基酸序列。通常，同源物将包括与主题氨基酸序列相同的活性位点残基。如本文所使用，“杂交”应包括核酸链通过碱基配对与互补链结合的过程，以及如在聚合酶链式反应(PCR)技术中进行的扩增过程。α-淀粉酶变体核酸可以以单链或双链DNA或RNA、RNA/DNA异源双链体或RNA/DNA共聚物形式存在。如本文所使用，“共聚物”指包括核糖核苷酸和脱氧核糖核苷酸两者的单个核酸链。α-淀粉酶变体核酸甚至可以经密码子优化以进一步增加表达。如本文所使用，通过体外的化学或酶促合成而产生“合成”化合物。其包括但不限于用宿主生物(如甲基营养酵母毕赤酵母(Pichia)、汉逊酵母(Hansenula)、链霉菌(Str印tomyces)、里氏木霉(Trichodermareesei)或其他所选表达宿主)的最佳密码子选择产生的α-淀粉酶变体核酸。如本文所使用，“转化的细胞”包括通过重组DNA技术的应用而已被转化的细胞。转化通常通过向细胞中插入一种或多种核苷酸序列而发生。插入的核苷酸序列可以是异源核苷酸序列(即，对于待转化的细胞而言，非天然的序列，例如编码融合蛋白的序列)。如本文所使用，“有效连接的”指所述及的组分之间的关系将允许它们以它们期望的方式发挥功能。与编码序列有效连接的调控序列将如此连接，以致所述编码序列能够在与该调控序列相容的条件下获得表达。如本文所使用，“生物活性的”指与天然存在序列具有相似的结构功能(但不必是相同的程度)和/或相似的调控功能(但不必是相同的程度)和/或相似的生化功能(但不必是相同的程度)的序列。1.2.缩写词除非另有说明，使用下列缩写词AE醇乙氧基化物AEO醇乙氧基化物AEOS醇乙氧基硫酸盐AES醇乙氧基硫酸盐AFAU酸性真菌α-淀粉酶单位AGU葡糖淀粉酶活性单位AOSα-烯烃磺酸盐AS醇硫酸盐BAA细菌α-淀粉酶cDNA互补DNACMC羧甲基纤维素DE葡萄糖当量DNA脱氧核糖核酸DP3具有3个亚单位的聚合度DPn具有η个亚单位的聚合度DS干固形物DTMPA二乙基三胺五乙酸EC酶学委员会EDTA乙二胺四乙酸EDTMPA乙二胺四亚甲基磷酸EO环氧乙烷F&HC织物和家居护理HFCS高果糖玉米糖浆HFSS高果糖淀粉基糖浆IPTG异丙基-β-D-硫代半乳糖苷LAS线性烷基苯磺酸盐LU脂肪酶单位MW分子量nm纳米NOBS壬酰基氧基苯磺酸盐NTA次氮基三乙酸PCR聚合酶链式反应PEG聚乙二醇pi等电点ppm百万分之几PVA聚乙烯醇PVP聚乙烯吡咯烷酮RAU对照淀粉酶单位RMS均方根RNA核糖核酸SAS仲烷基磺酸盐IXSSC0.15MNaCl，0.015M柠檬酸钠，pH7.0SSF同时糖化和发酵TAED四乙酰乙二胺TNBS三硝基苯磺酸w/v重量/体积w/w重量/重量wt野生型μL微升2.α-淀粉酶变体本文的α_淀粉酶变体产生自野生型地衣芽孢杆菌α_淀粉酶。所述变体可以具有增强的比活性、PH谱、热稳定性、温度范围谱、钙离子需求或其他增强的特性。变体一般包含野生型地衣芽孢杆菌α-淀粉酶氨基酸序列的一个或多个修饰。野生型地衣芽孢杆菌α-淀粉酶可以分离自任意天然存在的地衣芽孢杆菌菌株。为了本公开的目的，氨基酸取代可以命名为例如Μ15Τ。“Μ15Τ”指用苏氨酸⑴残基取代15位的蛋氨酸(M)残基，其中通过本领域公知的单字母缩写词命名氨基酸。野生型地衣芽孢杆菌α-淀粉酶的蛋白质改造产生具有改良特性的变体α-淀粉酶。一方面，随机修饰变体酶的一个或多个氨基酸残基，变体在宿主细胞中表达后，通过随后对变体性能特征的分析确定该修饰的结果。另一方面，用具有与野生型地衣芽孢杆菌α-淀粉酶非常相似的结构的“模型”α-淀粉酶作为指导，可系统地产生对变体氨基酸序列的修饰，以使得可预测该修饰的影响。在一个实施方案中，就野生型地衣芽孢杆菌α-淀粉酶而论，模式α-淀粉酶具有一种或多种改良的或优选的特征。例如，模式α-淀粉酶可以具有更高的比活性、PH依赖性、稳定性、半衰期或钙结合常数，或其可以具有尤其有用的底物特异性等。若用模式α-淀粉酶指导变体α-淀粉酶氨基酸改变的设计，则不必精确地知道模式α-淀粉酶的哪一个残基促成该酶的性能。相反，在变体α-淀粉酶中一个或多个氨基酸(甚至整个组的氨基酸)修饰成模式α-淀粉酶的对应氨基酸。这种情况下，“对应”氨基酸不是通过常规的一级氨基酸序列的比对确定，而是通过两种酶多肽主链的三维结构比对确定。从而变体中待修饰的氨基酸可选择为例如酶表面的带电荷残基、活性位点残基或促成模型酶独特的特定二级结构元件的残基。还可以以修饰不会破坏两种酶间保守的三维结构，尤其是保守的二级结构元件(例如α-螺旋、β-折叠、转角)为基础来选择待修饰的残基。例如，已知改变带电荷残基在酶表面的分布一般可改变其酶特性。见如Russell等人，"Rationalmodificationofenzymecatalysisbyengineeringsurfacecharge,”Nature328=496-500(1987)。同样可修饰地衣芽孢杆菌α-淀粉酶表面的一个或多个残基来改变变体α-淀粉酶的酶特性，其中修饰的选择可由模式α-淀粉酶表面电荷分布来指导。为了此目的，通过至少部分暴露于溶剂的氨基酸的带电荷侧链带来“表面电荷”。图1显示地衣芽孢杆菌α-淀粉酶(见RCSBProteinDataBank,检索号PDBIDNo.IBLI；还见GenBank检索号CAA01355)与代表性的模式α-淀粉酶枯草芽孢杆菌属物种707号α-淀粉酶的三维结构比对。见Berman等人，“TheProteinDataBank,”Nucl.AcidsRes.28=235-242(2000)。对于此分析，从用来建立检索号PDBIDNo.IBLI中所示的三维结构的序列改变3个氨基酸(即M15T、W138Y和M197T)，以使结构与PURASTAROxAm中所用的地衣芽孢杆菌α-淀粉酶一致。按检索号PDBIDNo.IWPC(还见Swissprot检索号Ρ19571)从RCSBProteinDataBank检索枯草芽孢杆菌属物种707号α-淀粉酶的三维结构。可用如BRAGI(GesellschaftfurBiotechnologischeForschungmbH)或PyMOL(DeLanoScientificLLC)的比对算法获得两种酶的三维结构间的最佳拟合(bestfit)。这些程序反复比对两个分子的主链原子，使原子位置的空间距离的均方根(RMS)偏差最小化。图2显示了蛋白质序列比对的代表性输出结果，其在下面一行显示地衣芽孢杆菌α-淀粉酶序列(GenBank检索号CAA01355)，在上面一行显示枯草芽孢杆菌属物种707号α-淀粉酶(Swissprot检索号Ρ19571)。两条序列间的一排星号标记包含采用基本相同的三维结构的主链原子的残基。两种酶在酶的二级结构(如α-螺旋、β-折叠、转角等)中显示很强的结构保守性。对整个分子，酶间偏差的RMS是0.55λ,这个值小于测定两种酶晶体结构中的误差幅度的一半。如图2所示，两种酶间93%的残基采用相同的三维结构，这超过了两种酶间一级序列的同一性百分数(相同的残基加亮显示)。为了本公开的目的，采用相同三维结构的残基是“结构上保守的”，“结构上保守的”残基是两个结构中的“对应”残基。变体α-淀粉酶的残基可分类为属于本文称为结构域A、B和C的三个结构域之一。为了本公开的目的，结构域A从残基2延伸至残基105和从残基208延伸至残基396；结构域B从残基106延伸至残基207；结构域C从残基397延伸至蛋白质的C端。氨基酸还可分类为活性位点残基。活性位点残基至少位于49、52、163、167、170、172、187、188、190、238、262、264、293、297和332-334位。残基“位”按图2的地衣芽孢杆菌α-淀粉酶序列中所示编号。变体α-淀粉酶中的一个或多个氨基酸可修饰为模式α-淀粉酶中的对应氨基酸。修饰可以按结构域分组(cluster)，和/或其可以按带电荷和存在于酶表面分组。备选地或此外，可以对一个或多个活性位点残基进行修饰。通过这种方式，有可以产生多重氨基酸修饰，其中修饰对变体α-淀粉酶的性能特征具有可预测的影响。例如，变体一个或多个结构域中的每一个表面带电荷残基可以改变为模式α-淀粉酶的对应残基。在另一个实施方案中，变体可以有残基插入或缺失(例如可以插入或缺失环)，以使变体的多肽主链更类似于模式α-淀粉酶的结构。因此，只要变体保持α-淀粉酶活性，变体可以包含1、2、3、4、5、10、15、20、30、40、50、60、70，或这些范围之间的任意整数值个氨基酸取代、缺失或插入。变体的表面电荷也可以以任一数目改变。例如，酶表面带正电荷的氨基酸残基的数目可以减少1、2、3、4、5、6、7或8个。预期这种氨基酸替换可改变变体的等电点(pi)等。如下文所述，变体的其他特征可以不同于野生型酶。相应地，给出了产生地衣芽孢杆菌α-淀粉酶变体的方法，其中变体与野生型地衣芽孢杆菌α-淀粉酶相比具有至少一种改变的特性。该方法包括(1)将野生型α_淀粉酶与相对于野生型α"淀粉酶具有至少一种优选特性的模式α"淀粉酶进行比较；(2)用模式α-淀粉酶鉴定野生型地衣芽孢杆菌α-淀粉酶的至少一个结构上保守的氨基酸或结构区域；(3)构建地衣芽孢杆菌α-淀粉酶的变体，其在上述步骤(2)鉴定的氨基酸残基或结构部分中经修饰；并(4)检测产生的变体α-淀粉酶以确定是否赋予变体α-淀粉酶至少一种优选的特性。上述方法的步骤(2)中鉴定的结构可以由一个氨基酸残基组成；但是，该结构也可以包含一个以上的氨基酸残基，其位于A、B或C结构域和/或酶的活性位点中的一个或多个。一个以上氨基酸可以是相邻的，如从变体α-淀粉酶加入或缺失几个氨基酸的环。一般通过对编码所讨论的亲本酶的DNA序列的适当修饰来实现对氨基酸残基或结构区域的修饰。修饰可以是氨基酸残基或结构区域的取代、缺失或插入。在一个实施方案中，氨基酸替换、缺失或插入可以是以下的一种或多种或其任意组合K23N、Q26R、Α33Κ、Τ49Α、Α52Ν、Η68Ν、E82Q、Κ88Ν、Η91Κ、R93N、D94G、D114L、T116R、D121N、Α123Ν、D124N、R127Q、V128E、I129V、Η133Υ、L134T、Κ136Ε、Η140Υ、H142D、S148N、Υ150Η、D152N、H156R、T163V、E167Q、K170R、在172位插入N(即172+Ν)、Q178R、A181G、S187D、N188T、N190F、K213R、R214N、E222T、F238Y、E250S、K251A、E255N、Y262F、Q264K、H293Y、T297K、R305Q、K306N、K319H、G332E、Q333E、S334A、Q340E、T341E、从TK⑶SQREI至IPTHGV-—(其中连接号代表缺失)中取代或缺失369-377位残基、K389E、K392Q、Q393K、A398R、H400N、D416N、V419H、R437W、N444K、E447Q、H450S、E458G、E469N或H471S。例如，“K23N”指变体用天冬酰胺(N)残基取代具有图2的下面一行中所示序列的地衣芽孢杆菌α-淀粉酶的23位赖氨酸⑷残基。α-淀粉酶变体也可以是融合蛋白或“杂种蛋白质”或“嵌合蛋白质”，其包含地衣芽孢杆菌的非内源性多肽序列。在一个实施方案中，该多肽序列便于所表达蛋白质的纯化。在另一个实施方案中，异源序列是来源于地衣芽孢杆菌外的不同属或种的α-淀粉酶多肽。例如，α-淀粉酶变体可包含连接至另一种芽孢杆菌(如但不限于嗜热脂肪芽孢杆菌)α-淀粉酶的信号肽的地衣芽孢杆菌α-淀粉酶变体。2.1.α-淀粉酶变体的表征酶变体可以通过核酸和多肽序列、通过其上述三维结构和/或通过其比活来表征。α-淀粉酶变体的另外特征包含稳定性、钙离子(Ca2+)依赖性、ρΗ范围、氧化稳定性和热稳定性。一方面，清洁制剂中的α-淀粉酶变体具有更高的比活性，比活性可用本领域技术人员公知的标准测定法来评测。另一方面，变体显示其他改良的性能特征，如改良的在高温(即70-120°C)和/或极端pH(即ρΗ4.0-6.0或ρΗ8.0-11.0)和/或低于60ppm的钙浓度下的稳定性。改变的Ca2+稳定性指酶在Ca2+耗尽下的稳定性已被改变，即提高或降低。重要的突变体包含Ca2+稳定性改变的突变体，尤其是在高pH(即pH8.0-10.5)下改善的Ca2+稳定性。另一方面，为了用于清洁组合物，重要的突变体表现出改变的比活性，特别是在10-60°C、尤其是20-50°C和更尤其是30-40°C下的改变的比活性。对于烘焙产品，重要的突变体可以在更高的温度范围表现出改变的比活性。与亲本α-淀粉酶相比，α-淀粉酶变体也可以具有改变的氧化稳定性，特别是更高的氧化稳定性。增加的氧化稳定性在例如洗涤剂组合物方面有利，而降低的氧化稳定性可以在淀粉液化用组合物方面有利。变体α-淀粉酶可以比野生型α_淀粉酶更热稳定。此类α_淀粉酶变体能够用于烘焙或需要升高温度的其他条件。例如，热稳定的α-淀粉酶变体可在约55°C_约80°C或更高的温度降解淀粉。热稳定的α-淀粉酶变体在暴露于高达约95°C的温度后保留其活性。本文所述的α-淀粉酶变体多肽也可以具有在约55°C至约95°C或更高的升高的温度(例如约80°C或更高)使其半衰期相对于亲本酶延长例如10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、100%、200%或更多的突变。例如，α-淀粉酶变体能够在80°C或更高温度加热约1-10分钟。α-淀粉酶变体可以具有外特异性(exo-specificity)，例如通过本文所述外特异性指数测量的外特异性。α-淀粉酶变体包含这样的变体，任选当在相同条件下测量时，这些变体与其所衍生自的亲本酶或多肽相比具有更高或提高的外特异性。因此，例如，与其亲本多肽相比，α_淀粉酶变体多肽具有10%,20%,30%,40%,50%,60%,70%,80%,90%,100%,150%,200%,500%,%、10，000%或更高的外特异性指数。一方面，通过核酸编码的α-淀粉酶变体多肽具有与亲本序列相同的PH稳定性。另一方面，变体还可以具有赋予更大PH稳定性范围、或将ρΗ范围迁移至对于酶的终端商业目的而言期望的范围的突变。例如，在一个实施方案中，变体可以在约5.0至约10.5的PH降解淀粉。α-淀粉酶变体多肽与完全相同条件下的亲本多肽相比时可以具有更长的半衰期或更高的活性(取决于测定法)，或者可以具有与亲本多肽相同的活性。α-淀粉酶变体多肽与完全相同PH条件下的其亲本多肽相比时也可以具有约10%、20%、30%、40%、50%,60%,70%,80%,90%,100%,200%或更长的半衰期。备选地，或另外地，酶变体与完全相同PH条件下的亲本多肽相比时可以具有更高的比活性。另一方面，提供了与编码任何本文所述α-淀粉酶变体的核酸相互补的核酸。另夕卜，还提供了能够与所述互补物杂交的核酸。在另一实施方案中，用于本文所述方法和组合物的序列为合成序列。其包括但不限于用宿主生物——如甲基营养酵母毕赤酵母和汉逊酵母——中的表达而言具有最佳密码子选择产生序列。3.α-淀粉酶变体的制备可以使用通常包括编码适宜的启动子、操纵基因、核糖体结合位点、翻译起始信号、和任选的阻遏基因或多种激活物基因的调控序列的表达载体，以酶的形式，表达由本文所述方法或由任何本领域已知的替代方法产生的编码酶变体的DNA序列。3.1.载体携带编码α_淀粉酶变体的DNA序列的重组表达载体可以是任何可方便地进行重组DNA操作的载体，并且载体的选择通常将取决于其待引入的宿主细胞。因此，载体可以是自主复制载体，即以染色体外实体形式存在的载体，其复制与染色体复制无关，例如质粒、噬菌体或染色体外元件、微染色体或人工染色体。备选地，载体可以是当被引入到宿主细胞中后整合到宿主细胞基因组中并与其所整合到的染色体一起复制的载体。该整合的基因也可以通过使用可扩增构建体来扩增，以在染色体中产生该基因的多个拷贝，所述可扩增构建体可以由抗生素选择或者其它选择压力(例如必需调控基因)来驱动，或者可以利用必需代谢途径基因的剂量效应通过互补作用来驱动。表达载体一般包含克隆载体的成分，例如允许载体在所选择的宿主生物中自主复制的元件和用于选择目的的一个或多个表型上可检测的标记。表达载体一般包含编码启动子、操纵基因、核糖体结合位点、翻译起始信号、任选的阻遏基因或一个或多个激活基因的调控核苷酸序列。一方面，所用的所有信号序列将物质靶向至细胞培养基，以更容易地收集和任选纯化酶。用来连接分别编码α-淀粉酶变体、启动子、终止子和其他元件的DNA构建体，并将它们插入包含复制必需信息的适合载体的操作为本领域技术人员公知(见如Sambrook等人，MolecularCloning:ALaboratoryManual,第二版，ColdSpringHarbor,1989和第三版，2001)。载体中，DNA序列应与适宜的启动子序列有效连接。启动子可以是任何在所选宿主细胞中显示转录活性的DNA序列，并且可源自编码与宿主细胞同源或异源的蛋白质的基因。可用于指导编码α-淀粉酶变体的DNA序列转录(尤其在细菌宿主中)的适宜启动子的实例有大肠杆菌Iac操纵子的启动子、天蓝色链霉菌(Str印tomycescoelicolor)琼脂糖酶基因dagA或celA启动子、地衣芽孢杆菌α_淀粉酶基因(amyL)的启动子、嗜热脂肪芽孢杆菌产麦芽糖淀粉酶基因(amyM)的启动子、解淀粉芽孢杆菌α-淀粉酶(amyQ)的启动子、枯草芽孢杆菌XylA和XylB基因的启动子等。对于真菌宿主中的转录，有用的启动子的实例是源自编码米曲霉(Aspergillusoryzae)TAKA淀粉酶、米黑根毛霉(Rhizomucormiehei)天冬氨酸蛋白水解酶、黑曲霉(Aspergillusniger)中性α-淀粉酶、黑曲霉酸稳定性α-淀粉酶、黑曲霉葡糖淀粉酶、米黑根毛霉脂肪酶、米曲霉碱性蛋白酶、米曲霉磷酸丙糖异构酶或构巢曲霉(A.nidulanS)乙酰胺酶的基因的那些启动子。当在诸如大肠杆菌的细菌物种中表达编码α-淀粉酶变体多肽的基因时，可以例如从噬菌体启动子(包括Τ7启动子和λ噬菌体启动子)选择适宜的启动子。适于在酵母物种中表达的适宜启动子的实例包括但不限于酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)的Gal1和Gal10启动子和巴斯德毕赤酵母(Pichiapastoris)的AOXl或A0X2启动子。对于在里氏木霉(Trichodermareesei)中的表达，也可使用CBHII启动子。表达载体也可包括与编码α-淀粉酶变体的DNA序列有效连接的适宜转录终止子以及，在真核生物中，多腺苷酸化序列。终止序列和多腺苷酸化序列可适宜地与启动子源自相同的来源。载体还可包括使载体能够在所讨论的宿主细胞中复制的DNA序列。此类序列的实例是质粒pUC19、pACYC177、pUBllO、pE194、pAMBl、pICatH和pIJ702的复制起点。载体也可包括选择标记，例如其产物能在宿主细胞中弥补缺陷的基因，例如来自枯草芽孢杆菌或地衣芽孢杆菌的dal基因，或者赋予抗生素抗性(例如氨苄青霉素、卡那霉素、氯霉素或四环素抗性)的基因。此外，载体可包括曲霉属(Aspergillus)选择标记，例如amdS、argB、niaD和xxsC，产生潮霉素抗性的标记，或者可通过诸如本领域已知的共转化实现选择。参见例如WO91/17243。3.2.变体表达和宿主生物虽然细胞内表达或固态发酵在一些方面可能是有益的，例如当使用某些细菌或真菌作为宿主细胞时，但一般所述变体表达于细胞外且进入培养基。一般，本文述及的芽孢杆菌属α-淀粉酶包括允许所表达的蛋白酶分泌到培养基中的信号序列。如果期望，这种信号序列可由不同的信号序列代替，这可以通过编码相应信号序列的DNA序列的替代而方便地实现。信号序列一般被表征为具有三个结构域，即，N-端结构域、H-结构域和C-端结构域，且长度范围在18-35个残基。成熟蛋白质最初可以是以融合蛋白或前蛋白质的形式产生自另一种芽孢杆菌或产生自与亲本序列相同的种。为了在地衣芽孢杆菌中分泌蛋白质，常使用地衣芽孢杆菌α-淀粉酶的信号序列；但是，也可取代为其他芽孢杆菌α-淀粉酶的信号蛋白质。有益地，将含有DNA构建体或表达载体的分离的细胞用作重组生产α-淀粉酶变体的宿主细胞。可用编码变体的DNA构建体，方便地通过将该DNA构建体(以一个或多个拷贝)整合到宿主染色体中，而转化细胞。通常认为这种整合是有利的，因为DNA序列更可能稳定地维持在细胞中。可以根据常规方法，例如通过同源或异源重组，实现DNA构建体向宿主染色体的整合。备选地，可以用上述有关不同类型宿主细胞的表达载体转化细胞。适宜的细菌宿主生物的实例为革兰氏阳性细菌物种，例如芽孢杆菌科(Bacillaceae)，包含枯草芽孢杆菌(B.subtilis)、地衣芽孢杆菌(B.Iicheniformis)、迟缓芽孢杆菌(B.Ientus)、短芽孢杆菌(B.brevis)、嗜热脂肪芽孢杆菌(B.stearothermophiIus)、嗜碱芽孢杆菌(B.alkalophilus)、解淀粉芽孢杆菌(B.amyloliquefaciens)、凝结芽孢杆菌(B.coagulans)、灿烂芽孢杆菌(B.Iautus)、巨大芽孢杆菌(B.megaterium)和苏云金芽孢杆菌(B.thuringiensis)；链球菌属物种(Str印tomycessp)，如鼠灰链霉菌(S.murinus)；乳酸细菌物种，包含乳球菌属物种(Lactococcussp·)，如乳酸乳球菌(L.Iactis)；乳杆菌属物种(Lactobacillussp.)，包含罗伊氏乳杆菌(L.reuteri)；明串珠菌属物种(Leuconostocsp.)；片球菌属物种(Pediococcussp.)；和链球菌属物种(Sti^ptococcussp.)。备选地，可选择隶属于肠杆菌科(Enterobacteriaceae)(包含大肠杆菌)或假单胞菌科(Pseudomonadaceae)的革兰氏阴性菌菌株作为宿主生物。适宜的酵母宿主生物可选自生物技术相关的酵母物种，例如但不限于毕赤酵母属物种(Pichiasp.)、汉逊酵母属物种(Hansenulasp.)、克鲁维酵母属物种(Kluyveromycessp.)、耶氏酵母属物种(Yarrowiniasp.)、酵母属物种(Saccharomycessp.)(包含酿酒酵母(S.cerevisiae))或隶属于裂殖酵母属(Schizosaccharomyces)的物种(如粟酒裂殖酵母(S.pombe))。甲基营养酵母物种巴斯德毕赤酵母(Pichiapastoris)的菌株可用作宿主生物。备选地，宿主生物可以是汉逊酵母属(Hansenula)的物种。丝状真菌中适宜的宿主生物包含曲霉属(Aspergillus)的种，例如黑曲霉(A.niger)、米曲霉(A.oryzae)、塔宾曲霉(A.tubigensis)、泡盛曲霉(A.awamori)或构巢曲霉(A.nidulans)。备选地，镰孢属物种(Fusariumsp.)(例如尖孢镰(Fusariumoxysporum))或根毛霉属物种(Rhizomucorsp.)(如米黑根毛霉(R.miehei))菌株可用作宿主生物。其他适宜的酵母包含嗜热丝孢菌属物种(Thermomycessp.)和毛霉属物种(Mucorsp.)。真菌细胞可以通过包括原生质体形成、原生质体转化、接着再生细胞壁的方法以其本身已知的方式进行转化。转化曲霉属宿主细胞的适宜操作包括例如EP238023中所述的那些。另一方面，提供了产生α-淀粉酶变体的方法，该方法包括在有利于变体生产的条件下培养上述宿主细胞，并从该细胞和/或培养基中回收变体。用于培养细胞的培养基可以是任何适于生长所讨论宿主细胞和获得α-淀粉酶变体表达的常规培养基。适宜的培养基和培养基组分可获自商品供应商或可根据公开的配方(例如按美国典型培养物保藏中心(AmericanTypeCultureCollection(ATCC))的目录所述)制备。示例培养基包括但不限于在下文提供的实施例中使用的、用于在三千升(3，000L)搅拌釜发酵罐中进行补料分批发酵的那些培养基。所用的培养基可以是最适合于正在使用的宿主细胞的培养基，例如下文所讨论的用于培养地衣芽孢杆菌的培养基。该情况下生长培养基可以包括玉米浆固形物和大豆粉作为有机化合物的来源，连同无机盐作为钠、钾、磷酸、镁和硫酸的来源，以及微量元素。通常，糖类来源如葡萄糖也是起始培养基的部分。一旦培养物自身已经建立并开始生长，则可以如本领域已知的那样向罐中定量供应糖类，以便维持培养物。定期从发酵罐中取样，以便利用例如比色测定法来测量酶滴度。根据测量，当酶生产速率停止增加时，终止发酵过程。可通过公知的方法从培养基中方便地回收分泌自宿主细胞的α-淀粉酶变体，包括通过离心或过滤从培养基中分离细胞，通过诸如硫酸铵的盐沉淀培养基中的蛋白质组分，随后使用诸如离子交换层析、亲和层析等的层析方法。可在允许α_淀粉酶变体蛋白质表达的适宜条件下培养宿主细胞。蛋白质的表达可以是组成型的，从而它们可以连续生产，或可以是诱导型的，从而需要刺激来起始表达。在诱导型表达的情况下，可以在需要时通过例如向培养基中加入诱导物(例如地塞米松或IPTG或S印harose)来起始蛋白质生产。也可以在体外无细胞体系(例如TnT(Promega)兔网织红细胞体系)中重组生产多肽。也可以在有氧条件下，于对宿主适宜的培养基中培养表达α-淀粉酶变体的宿主。可以提供振荡或搅拌及通风的组合，在对于该宿主适宜的温度例如约30°C至约75V进行生产，这取决于宿主的需要以及生产期望α-淀粉酶变体的需要。可以培养约12至约100小时或更长(以及其间的任何时间值)或例如24-72小时。通常，培养基(culturebroth)pH在约5.5至约8.0，这也取决于相对于α-淀粉酶变体的生产，宿主细胞所需的培养条件。4.α-淀粉酶变体的纯化发酵、分离和浓缩技术是本领域公知的并且可以使用常规方法以制备浓缩的含有α-淀粉酶变体的溶液。发酵后，获得发酵液，可以通过常规分离技术除去微生物细胞和各种悬浮的固形物(包括残留的发酵原料)以便获得淀粉酶溶液。通常使用过滤、离心、微量过滤、转鼓真空过滤、随后超滤、提取或层析等。希望浓缩包含α-淀粉酶变体的溶液以优化回收，因为使用未浓缩的溶液需增加孵育时间来收集包含纯化的α-淀粉酶变体的沉淀物。用常规技术浓缩溶液至获得期望的水平。可通过上文讨论的任何技术实现含酶变体溶液的浓缩。在一个实施方案中，使用旋转真空蒸发和/或超滤。备选地，可使用超滤。用于纯化目的的“沉淀剂”是指有效从浓缩的酶变体溶液中以固体形式(不管其性质如何，即晶体、无定形或两者混合物)沉淀α-淀粉酶变体的化合物。可以使用例如金属卤化物沉淀剂进行沉淀。金属卤化物沉淀剂包含碱金属氯化物、碱金属溴化物和这些金属卤化物中两种或更多种的混合物。金属卤化物可以选自氯化钠、氯化钾、溴化钠、溴化钾和这些金属卤化物中两种或更多种的混合物。适宜的金属卤化物包含氯化钠和氯化钾，尤其是氯化钾，其还可用作防腐剂。以有效沉淀α-淀粉酶变体的量使用金属卤化物沉淀剂。在常规试验后，本领域普通技术人员可以显而易见地至少选择出能够有效地造成酶变体沉淀的金属卤化物的有效量和最佳量、以及实现最大回收的沉淀条件，包括孵育时间、ΡΗ、温度和α-淀粉酶变体的浓度。通常，向浓缩的酶变体溶液中加入至少约5%w/v(重量/体积)至约25%w/v的金属卤化物，且通常是至少8%w/v。通常，向浓缩的酶变体溶液中加入不超过约25%w/v的金属卤化物，且通常是不超过20%w/v。金属卤化物沉淀剂的最适浓度将取决于例如具体的α-淀粉酶变体的性质以及其在浓缩的α-淀粉酶变体溶液中的浓度等。另一可选的实现酶沉淀的方法是应用有机化合物，其可以添加到浓缩的酶变体溶液中。有机化合物沉淀剂可以包括4_羟基苯甲酸、4-羟基苯甲酸的碱金属盐、4-羟基苯甲酸的烷基酯、以及这些有机化合物中两种或更多种的混合物。所述有机化合物沉淀剂的添加可以在金属卤化物沉淀剂的添加之前、与其同时或在其后发生，并且两种沉淀剂(有机化合物和金属卤化物)的添加都可顺次进行或同时进行。进一步的描述见如Genencor的美国专利号5，281,526。通常，有机化合物沉淀剂选自4-羟基苯甲酸的碱金属盐(例如钠或钾盐)，以及4-羟基苯甲酸的线性或分支的烷基酯(其中烷基含有1-12个碳原子)，以及这些有机化合物中两种或更多种的混合物。有机化合物沉淀剂可以是例如4-羟基苯甲酸的线性或分支的烷基酯(其中烷基含有1-10个碳原子)，以及这些有机化合物中两种或更多种的混合物。适宜的有机化合物包含4-羟基苯甲酸的线性烷基酯(其中烷基含有1-6个碳原子)，以及这些有机化合物中两种或更多种的混合物。也可以使用4-羟基苯甲酸的甲基酯、4-羟基苯甲酸的丙基酯、4-羟基苯甲酸的丁基酯、4-羟基苯甲酸的乙基酯以及这些有机化合物中两种或更多种的混合物。其他有机化合物还包括但不限于4-羟基苯甲酸甲酯(称为甲基PARABEN)、4_羟基苯甲酸丙酯(称为丙基PARABEN)，它们也是淀粉酶防腐剂。就pH、温度、α-淀粉酶变体浓度、沉淀剂浓度和孵育时间而论，所述有机化合物沉淀剂的添加提供了沉淀条件高度灵活性的优势。可以以有效提高金属卤化物沉淀剂引起的酶变体沉淀的量使用有机化合物沉淀齐U。基于本发明公开，在常规试验后，本领域普通技术人员将可以显而易见地至少选择出有机化合物沉淀剂的有效量和最佳量、以及用于实现最大回收的沉淀条件，包括孵育时间、pH、温度和酶变体浓度。通常，向浓缩的酶变体溶液中加入至少0.01%w/v的有机化合物沉淀剂，且通常至少0.02%w/v。通常向浓缩的酶变体溶液中加入不多于0.3%w/v的有机化合物沉淀剂，且通常不多于0.2%w/v。可以调整含有金属卤化物沉淀剂和，例如，有机化合物沉淀剂的浓缩酶变体溶液的pH，该pH必然地将取决于待纯化的酶变体。通常，将pH调整至淀粉酶等电点附近。通常，将PH调整至位于如下范围内低于等电点(pi)大约2.5个pH单位至高于等电点约2.5个PH单位。为举例说明目的，当酶变体为源自地衣芽孢杆菌的α-淀粉酶变体时，通常将浓缩的酶变体溶液调整至约5.5-9.7的pH或约6.5-9.0的pH。若变体的pi不同于野生型的Pl，则可以相应地调节pH。获得纯化的酶变体沉淀物所需的孵育时间取决于具体酶变体的性质、酶浓度、以及具体的沉淀剂(一种或多种)及其浓度。通常，有效沉淀酶变体的时间为约1至约30小时；通常不超过约25小时。在有机化合物沉淀剂存在下，孵育时间还可以减至小于约10小时，且在大多数情况下甚至是约6小时。通常，孵育期间的温度为约4°C至约50°C。通常，在约10°C至约45°C或约20°C至约40°C的温度进行所述方法。用于诱导沉淀的最佳温度根据溶液条件和酶变体或所用沉淀剂而变化。可以通过搅拌包括酶变体、添加的金属卤化物和添加的有机化合物的溶液，来提高纯化的酶变体沉淀物的总回收率以及该方法的实施效率。可以在添加金属卤化物和有机化合物期间，以及在随后的孵育期均进行搅拌步骤。适宜的搅拌方法包括机械搅拌或振荡、强有力的通风或任何类似的技术。孵育期后，可以通过常规分离技术，例如过滤、离心、微量过滤、旋转真空过滤、超滤、压滤、交叉膜微量过滤(crossmembranemicrofiltration)、交叉流膜微量过滤等，自解离的色素以及其他杂质中分离和收集纯化的酶变体。所用方法可以是交叉膜微量过滤。可以通过用水洗涤沉淀物获得对纯化的酶变体沉淀物的进一步纯化。例如，用包含金属卤化物沉淀剂的水来洗涤纯化的酶变体沉淀物，例如用包含金属卤化物和有机化合物沉淀剂的水。培养期间，热稳定的淀粉酶胞外累积在培养基中。为了分离和纯化期望的α-淀粉酶变体，离心或过滤培养基以除去细胞，并利用所得的无细胞液体进行酶纯化。在一个实施方案中，使用约70%饱和度的硫酸铵对无细胞肉汤进行盐析；然后将该70%饱和度-沉淀级分溶解在缓冲液中并施加到诸如SephadexG-100柱等柱中，并洗脱以回收酶变体活性级分。为了进一步的纯化，可使用诸如离子交换层析等常规方法。纯化的酶变体可用于通常利用酶变体的所有应用中。例如，它们可以用于洗衣洗涤剂和除斑剂，用于食品工业，用于淀粉加工和烘焙，且可作为消化助剂用于药物组合物。可以将它们制成液体(溶液，浆液)或固体(颗粒，粉末)的终产物。可选地，可以回收酶产物，并向培养基中加入絮凝剂，以通过过滤或离心除去细胞和细胞碎片，而无需进一步纯化酶。通过上述方法生产和纯化的α-淀粉酶变体可用在多种有用的工业应用中。变体具有便于织物和家庭护理(F&HC)相关应用的有价值的特性。例如，变变体可以用作洗涤、餐具洗涤和硬表面清洁洗涤剂组合物的组分。变体也可用于由淀粉生产增甜剂和乙醇，和/或用于纺织品脱浆。如在例如WO和美国公开申请号(GenencorInternational,Inc.)中所述，变体α-淀粉酶在淀粉转化过程(包含淀粉液化和/或糖化方法)中尤其有用。下文更详细地描述了α-淀粉酶变体的这些不同用途。5.清洁和洗涤组合物和用途可以将本文讨论的α-淀粉酶变体配制在用于清洁餐具的洗涤剂组合物中或其他清洁组合物中。这些组合物可以是凝胶、粉末或液体。组合物可以包括单独的α-淀粉酶变体、其他淀粉分解酶、其它清洁酶以及清洁组合物常用的其他组分。因此，餐具洗涤洗涤剂组合物可以包括表面活性剂。表面活性剂可以是阴离子型、非离子型、阳离子型、两性离子型或这些类型的混合。洗涤剂可以含有按重量计0%至约90%的非离子表面活性剂，例如低或无泡沫乙氧基化丙氧基化直链醇。在洗涤剂应用中，通常将α-淀粉酶变体用于含有丙二醇的液体组合物中。例如通过在含有10%氯化钙的25%体积/体积丙二醇溶液中循环，使α-淀粉酶变体溶解于丙二醇。洗涤剂组合物可含有无机和/或有机类型的洗涤剂助剂盐。洗涤剂助剂可细分为含磷和不含磷的类型。洗涤剂组合物通常含有约至约90%的洗涤剂助剂。当存在含磷的无机碱性洗涤剂助剂时，其实例包括水溶性盐，尤其是碱金属焦磷酸盐、正磷酸盐和多磷酸盐。当存在含磷的有机碱性洗涤剂助剂时，其实例包括水溶性膦酸盐。当存在不含磷的无机助剂时，其实例包括水溶性碱金属碳酸盐、硼酸盐和硅酸盐以及多种类型的水不溶性晶体或无定形硅铝酸盐，其中沸石是最为公知的代表。适宜的有机助剂的实例包括碱金属；铵和取代的铵；柠檬酸盐；琥珀酸盐；丙二酸盐；脂肪酸磺酸盐；羧基甲氧基琥珀酸盐；聚乙酸铵；羧酸酯；聚羧酸酯；氨基聚羧酸酯’聚乙酰基羧酸酯；和多羟基磺酸酯(polyhydroxsulphonates)。其他适宜的有机助剂包括已知具有助剂性能的较高分子量的聚合物和共聚物，例如适当的聚丙烯酸、聚马来酸和聚丙烯酸/聚马来酸共聚物，及它们的盐。清洁组合物可含有氯/溴类型或氧类型的漂白剂。无机氯/溴类型漂白剂的实例是锂、钠或钙的次氯酸盐和次溴酸盐，以及氯化磷酸三钠。有机氯/溴类型漂白剂的实例是杂环N-溴和N-氯酰亚胺类，如三氯异氰脲酸、三溴异氰脲酸、二溴异氰脲酸、和二氯异氰脲酸，及其与水增溶性阳离子(如钾和钠)的盐。乙内酰脲化合物也是适宜的。清洁组合物可含有氧漂白剂，例如以无机过酸盐的形式，任选与例如漂白前体一起或以过氧酸化合物的形式。适宜的过氧漂白化合物的典型实例是碱金属过硼酸盐(四水合物和一水合物)，碱金属过碳酸盐、碱金属过硅酸盐和碱金属过磷酸盐。合适的活性剂材料包含四乙酰乙二胺(TAED)和三乙酸甘油酯。酶促漂白活化体系也可以存在，例如过硼酸盐或过碳酸盐、三乙酸甘油酯和过水解酶(perhydrolase)，如WO中所公开的那样。可使用常规用于酶的稳定剂来稳定清洁组合物，该稳定剂例如多元醇例如丙二醇、糖或糖醇、乳酸、硼酸或硼酸衍生物(例如芳族硼酸酯)。清洁组合物也可含有其它常规洗涤剂成分，例如反絮凝剂材料、填充剂材料、抑泡剂、防腐蚀剂、悬污剂、螯合剂、防污垢再沉积剂、脱水剂、染料、杀菌剂、荧光剂、增稠剂和香料。最后，α-淀粉酶变体可用于常规餐具洗涤洗涤剂中，例如用于如下专利公开中描述的任何洗涤剂中(可考虑用本文所公开的α-淀粉酶变体替代或加入所列专利和公开的申请中公开任意的α-淀粉酶)CA2006687、GB2200132、GB2234980、GB2228945、DE3741617、DE3727911、DE4212166、DE4137470、DE3833047、DE4205071、WO93/25651、W093/18129,WO93/04153、WO92/06157、WO92/08777、WO93/21299、WO93/17089、WO93/03129、EP481547、EP530870、EP533239、EP554943、EP429124、EP346137、EP561452,EP318204,EP318279、EP271155、EP271156,EP346136,EP518719,EP518720、EP518721、EP516553、EP561446,EP516554,EP516555,EP530635,EP414197和美国专利号5，112，518,5,141，664和5，240，632。6.衣物洗涤剂组合物及用途根据该实施方案，通常一种或多种α-淀粉酶变体可为洗涤剂组合物的组分。如此，其可以以无粉尘颗粒、稳定的液体或受保护的酶的形式包括在洗涤剂组合物中。可以例如，按美国专利No.4，106，991和4，661，452所公开的那样来生产无粉尘颗粒，并且可任选地由本领域已知的方法进行包衣。蜡质包衣材料的实例是平均摩尔质量为1，000至20，000的聚(环氧乙烷)产物(聚乙二醇，PEG)；具有16-50个环氧乙烷单元的乙氧基化壬基酚；乙氧基化脂肪醇，其中醇含有12-20个碳原子，且其中有15-80个环氧乙烷单元；脂肪醇；脂肪酸；以及脂肪酸的甘油单酯和甘油二酯及甘油三酯。例如英国专利No.1483591给出了适于通过流化床技术应用的成膜包衣材料的实例。可例如通过加入多元醇诸如丙二醇、糖或糖醇、乳酸或硼酸，按照已建立的方法来稳定液态酶制品。其他酶稳定剂是本领域公知的。可按照例如US5，879，920(GenencorInt，1，Inc.)或EP238，216公开的方法来制备受保护的酶。长期以来多元醇被公认为蛋白质的稳定剂，和用于提高蛋白质的溶解性，参见例如，Kaushik等人，"Whyistrehaloseanexceptionalproteinstabilizer？Ananalysisofthethermalstabilityofproteinsinthepresenceofthecompatibleosmolytetrehalose”J.Biol.Chem.278:3)和其中引用的参考文献；以及M.Conti等人，”Capillaryisoelectricfocusing:theproblemofproteinsolubility,，，J.Chromatography757:237_245(1997)。洗涤剂组合物可以是任何便利的形式，例如凝胶、粉末、颗粒、糊剂或液体。液体洗涤剂可以是水性的，通常含有高达约70%的水和0%至约30%的有机溶剂，其也可以是只含有约30%水的压缩凝胶(compactgel)类型的形式。洗涤剂组合物可以包括一种或多种表面活性剂，其中每种都可以是阴离子型、非离子型、阳离子型或两性离子型。洗涤剂将通常包含0%至约50%的阴离子表面活性剂，例如线性烷基苯磺酸盐(LAS)；α-烯烃磺酸盐(AOS)；烷基硫酸盐(脂肪醇硫酸盐)(AS)；醇乙氧基硫酸盐(AE0S或AES)；仲烷基磺酸盐(SAS)；α-磺基脂肪酸甲酯；烷基或烯基琥珀酸；或皂。组合物也可包含0%至约40%的非离子表面活性剂，例如醇乙氧基化物(ΑΕ0或AE)、羧化的醇乙氧基化物、壬基酚乙氧基化物、烷基多苷、烷基二甲基胺氧化物、乙氧基化脂肪酸单乙醇酰胺、脂肪酸单乙醇酰胺、或多羟基烷基脂肪酸酰胺(如例如在WO92/06154中所述)。洗涤剂组合物可另外包括一种或多种其他酶，例如脂肪酶、角质酶、蛋白酶、纤维素酶、过氧化物酶、和/或漆酶的任何组合。洗涤剂可含有约到约65%的洗涤剂助剂或络合剂，如沸石、二磷酸盐、三磷酸盐、膦酸盐、柠檬酸盐、次氮基三乙酸(ΝΤΑ)、乙二胺四乙酸(EDTA)、二亚乙基三胺五乙酸(DTMPA)、烷基或烯基琥珀酸、可溶性硅酸盐或层状硅酸盐(例如，来自Hoechst的SKS-6)。洗涤剂也可以是无助剂的，即基本上不含洗涤剂助剂。可以在与酶的稳定性兼容的任何组合物中使用酶。通常可以用已知的包囊化形式(例如通过造粒或隔离在水凝胶中)来保护酶免于遭遇有害组分。具有或不具有淀粉结合结构域的酶(尤其是α-淀粉酶)不局限于洗衣和餐具洗涤应用，而是可以用于表面清洁剂以及用于由淀粉或生物质(biomass)生产乙醇。洗涤剂可包括一种或多种聚合物。实例包括羧甲基纤维素(CMC)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、聚乙二醇(PEG)、聚乙烯醇(PVA)、聚羧酸酯如聚丙烯酸酯、马来酸/丙烯酸共聚物和甲基丙烯酸月桂酯/丙烯酸共聚物。洗涤剂可含有漂白体系，这可包括H2O2来源(例如过硼酸盐或过碳酸盐)，其可以与形成过酸的漂白活性剂，如四乙酰基乙二胺(TAED)或壬酰基氧基苯磺酸盐(NOBS)联用。或者，漂白体系可包括过氧酸(例如酰胺、亚胺或砜类过氧酸)。漂白体系也可以是酶促漂白体系，其中过水解酶活化过氧化物，例如WO中所述的那些。可使用常规稳定剂来稳定洗涤剂组合物中的酶，稳定剂例如多元醇如丙二醇或甘油；糖或糖醇；乳酸；硼酸或硼酸衍生物如硼酸芳香酯；并且可按例如WO92/19709和WO92/19708所述配制组合物。洗涤剂也可含有其它常规洗涤剂成分，例如织物调理剂，包括粘土、增泡剂、抑泡齐U、防腐蚀剂、悬污剂、抗污垢再沉积剂、染料、杀细菌剂、荧光增白剂或香料。PH(在使用浓度下于水性溶液中测量)通常是中性或碱性，例如PH约7.0至约11.0。α-淀粉酶变体可以按常规用于洗涤剂中的浓度掺入。目前认为在洗涤剂组合物中可以按相当于每升洗液0.00001-1.Omg(按纯酶蛋白质计算)α-淀粉酶变体的量加入α-淀粉酶变体。包括α-淀粉酶变体的洗涤剂组合物可以配制成的具体形式包括(1)具有体积密度(bulkdensity)为至少600g/L的颗粒剂形式的洗涤剂组合物，包括约7%至约12%的线性烷基苯磺酸盐(按酸计算)；约至约4%的醇乙氧基硫酸盐(例如C12_18醇，1-2环氧乙烷(EO))或烷基硫酸盐(例如C16_18)；约5%至约9%的醇乙氧基化物(例如C14_15醇，7E0)；约14%至约20%的碳酸钠(例如Na2CO3)；约2%至约6%的可溶性硅酸盐(例如Na20，2Si02)；约15%至约22%的沸石(例如NaAlSiO4)；0%至约6%的硫酸钠(例如Na2SO4)；约0%至约15%的柠檬酸钠/柠檬酸(例如C6H5Na3O7ZiC6H8O7)；约11%至约18%的过硼酸钠(例如NaBO3H2O)；约2%至约6%的TAED至约2%的羧甲基纤维素(CMC)；0-3%的聚合物(例如马来酸/丙烯酸共聚物，PVP，PEG)；0.0001-0.蛋白质的酶(按纯酶计算)；和0-5%次要成分(例如抑泡剂、香料、荧光增白剂、光漂白剂)。(2)具有体积密度为至少600g/L的颗粒剂形式的洗涤剂组合物，包括约6%至约11%的线性烷基苯磺酸盐(按酸计算)；约至约3%的醇乙氧基硫酸盐(例如C12_18醇，1-2E0)或烷基硫酸盐(例如C16_18)；约5%至约9%的醇乙氧基化物(例如C14_15醇，7E0)；约15%至约21%的碳酸钠(例如Na2CO3)；约1%至约4%的可溶性硅酸盐(例如Na2O,2Si02)；约24%至约34%的沸石(例如NaAlSiO4)；约4%至约10%的硫酸钠(例如Na2SO4)；0%M约15%的柠檬酸钠/柠檬酸(例如C6H5Na3(VC6H8O7)；0%至约2%的羧甲基纤维素(CMC)；1-6%的聚合物(例如马来酸/丙烯酸共聚物，PVP，PEG)；0.0001-0.的酶(按纯酶蛋白质计算)；0-5%的次要成分(例如抑泡剂、香料)。(3)具有体积密度为至少600g/L的颗粒剂形式的洗涤剂组合物，包括约5%至约9%的线性烷基苯磺酸盐(按酸计算)；约7%至约14%的醇乙氧基化物(例如C12_15醇，7E0)；约至约3%的皂如脂肪酸(例如C16_22脂肪酸)；约10%至约17%的碳酸钠(如Na2CO3)；约3%至约9%的可溶性硅酸盐(例如Na20，2Si02)；约23%至约33%的沸石(如NaAlSiO4)；0%至约4%的硫酸钠(例如Na2SO4)；约8%至约16%的过硼酸钠(例如NaBO3H2O)；约2%至约8%TAED；0%至约的膦酸盐(例如EDTMPA)；0%至约2%的羧甲基纤维素(CMC)；0-3%的聚合物(例如马来酸/丙烯酸共聚物，PVP，PEG)；0.0001-0.的酶(按纯酶蛋白质计算)；0-5%的次要成分(例如抑泡剂、香料、荧光增白剂)。(4)具有体积密度为至少600g/L的颗粒剂形式的洗涤剂组合物，包括约8%至约12%的线性烷基苯磺酸盐(按酸计算)；约10%至约25%的醇乙氧基化物(例如C12_15醇，7E0)；约14%至约22%的碳酸钠(如Na2CO3)；约1%至约5%的可溶性硅酸盐(例如Na2O,2Si02)；约25%至约35%的沸石(例如NaAlSiO4)；0%至约10%的硫酸钠(例如Na2SO4)；0%至约2%的羧甲基纤维素(CMC)；1-3%的聚合物(例如马来酸/丙烯酸共聚物，PVP,PEG)；0.0001-0.的酶(按纯酶蛋白质计算)；和0-5%的次要成分(例如抑泡剂、香料)。(5)水性液体洗涤剂组合物，包括约15%至约21%的线性烷基苯磺酸盐(按酸计算)；约12%至约18%的醇乙氧基化物(例如C12_15醇，7E0或C12_15醇，5E0)；约3%至约13%的皂如脂肪酸(例如油酸)；0%至约13%的烯基琥珀酸(C12_14)；约8%至约18%的氨基乙醇；约2%至约8%的柠檬酸；0%至约3%的膦酸盐；0%至约3%的聚合物(例如PVP，PEG)；0%至约2%的硼酸盐(例如B4O7)；0%至约3%的乙醇；约8%至约14%的丙二醇；0.0001-0.的酶(按纯酶蛋白质计算)；和0-5%的次要成分(例如分散剂、抑泡剂、香料、荧光增白剂)。(6)水性结构型液体洗涤剂组合物，包括约15%至约21%的线性烷基苯磺酸盐(按酸计算)；3-9%的醇乙氧基化物(例如C12_15醇，7E0或C12_15醇，5E0)；约3%至约10%的皂如脂肪酸(例如油酸)；约14%至约22%的沸石(如NaAlSiO4)；约9%至约18%的柠檬酸钾；0%至约2%的硼酸盐(例如B4O7)；0%至约2%的羧甲基纤维素(CMC)；0%至约3%的聚合物(例如PEG，PVP)；0%至约3%的锚定聚合物(anchoringpolymer)(例如甲基丙烯酸月桂酯/丙烯酸共聚物；摩尔比251,MW3800)；0%至约5%的甘油；0.%的酶(按纯酶蛋白质计算)；和0-5%的次要成分(例如分散剂、抑泡剂、香料、荧光增白剂)。(7)具有体积密度为至少600g/L的颗粒剂形式的洗涤剂组合物，包括约5%至约10%的脂肪醇硫酸盐；约3%至约9%的乙氧基化脂肪酸单乙醇酰胺；0-3%的皂如脂肪酸；约5%至约10%的碳酸钠(例如Na2CO3)；约至约4%的可溶性硅酸盐(例如Na2O,2Si02)；约20%至约40%的沸石(例如NaAlSiO4)；约2%至约8%的硫酸钠(例如Na2SO4)；约12%至约18%的过硼酸钠(例如NaBO3H2O)；约2%至约7%的TAED；约至约5%的聚合物(例如马来酸/丙烯酸共聚物，PEG)；0.0001-0.的酶(按纯酶蛋白质计算)；和0-5%的次要成分(例如荧光增白剂，抑泡剂、香料)。(8)颗粒剂形式的洗涤剂组合物，包括约8%至约14%的线性烷基苯磺酸盐(按酸计算)；约5%至约11%的乙氧基化脂肪酸单乙醇酰胺；0%至约3%的皂如脂肪酸；约4%至约10%的碳酸钠(例如Na2CO3)；约至约4%的可溶性硅酸盐(Na2O,2Si02)；约30%至约50%的沸石(例如NaAlSiO4)；约3%至约11%的硫酸钠(例如Na2SO4)；约5%至约12%的柠檬酸钠(例如C6H5Na3O7)；约1%至约5%的聚合物(例如PVP，马来酸/丙烯酸共聚物，PEG)；0.0001-0.的酶(按纯酶蛋白质计算)；和0-5%的次要成分(例如抑泡剂、香料)。(9)颗粒剂形式的洗涤剂组合物，包括约6%至约12%的线性烷基苯磺酸盐(按酸计算)；约至约4%的非离子表面活性剂；约2%至约6%的皂如脂肪酸；约14%至约22%的碳酸钠(例如Na2CO3)；约18%至约32%的沸石(例如，NaAlSiO4)；约5%至约20%的硫酸钠(例如Na2SO4)；约3%至约8%的柠檬酸钠(例如C6H5Na3O7)；约4%至约9%的过硼酸钠(例如NaBO3H2O)；约至约5%的漂白活性剂(例如NOBS或TAED)；0%至约2%的羧甲基纤维素(CMC)；约至约5%的聚合物(例如聚羧酸酯或PEG)；0.0001-0.的酶(按纯酶蛋白质计算)；和0-5%的次要成分(例如，荧光增白剂、香料)。(10)水性液体洗涤剂组合物，包括约15%至约23%的线性烷基苯磺酸盐(按酸计算)；约8%至约15%的醇乙氧基硫酸盐(例如C12_15醇，2-3E0)；约3%至约9%的醇乙氧基化物(例如C12_15醇，7E0或C12_15醇，5E0)；0%至约3%的皂如脂肪酸(例如月桂酸)；约至约5%的氨基乙醇；约5%至约10%的柠檬酸钠；约2%至约6%的助水溶物(例如甲苯磺酸钠)；0%至约2%的硼酸盐(例如B4O7)；0%至约的羧甲基纤维素；约至约3%的乙醇；约2%至约5%的丙二醇；0.%的酶(按纯酶蛋白质计算)；和0-5%的次要成分(例如聚合物、分散剂、香料、荧光增白剂)。(11)水性液体洗涤剂组合物，包括约20%至约32%的线性烷基苯磺酸盐(按酸计算)；6-12%的醇乙氧基化物(例如C12_15醇，7E0或C12_15醇，5E0)；约2%至约6%的氨基乙醇；约8%至约14%的柠檬酸；约至约3%的硼酸盐(例如B4O7)；0%至约3%的聚合物(例如马来酸/丙烯酸共聚物，锚定聚合物例如甲基丙烯酸月桂酯/丙烯酸共聚物)；约3%至约8%的甘油；0.0001-0.的酶(按纯酶蛋白质计算)；和0-5%的次要成分(例如助水溶物、分散剂、香料、荧光增白剂)。(12)具有体积密度为至少600g/L的颗粒剂形式的洗涤剂组合物，包括约25%至约40%的阴离子表面活性剂(线性烷基苯磺酸盐、烷基硫酸盐、α-烯烃磺酸盐、α-磺基脂肪酸甲酯、烷基磺酸盐、皂)；约至约10%的非离子表面活性剂(例如醇乙氧基化物)；约8%至约25%的碳酸钠(例如Na2CO3)；约5%至约15%的可溶性硅酸盐(例如Na2O,2Si02)；0%至约5%的硫酸钠(例如Na2SO4)；约15%至约28%的沸石(NaAlSiO4)；0%M约20%的过硼酸钠(例如NaBO3·4H20)；约0%至约5%的漂白活性剂(TAED或NOBS)；0.0001-0.的酶(按纯酶蛋白质计算)；0-3%的次要成分(例如香料、荧光增白剂)。(13)如上面组合物1)_12)所述的洗涤剂组合物，其中所有或者部分的线性烷基苯磺酸盐被(C12-C18)烷基硫酸盐代替。(14)具有体积密度为至少600g/L的颗粒剂形式的洗涤剂组合物，包括约9%至约15%的(C12-C18)烷基硫酸盐；约3%至约6%的醇乙氧基化物；约至约5%的多羟基烷基脂肪酸酰胺；约10%至约20%的沸石(例如NaAlSiO4)；约10%至约20%的层状焦硅酸盐(例如来自Hoechst的SK56)；约3%至约12%的碳酸钠(例如Na2CO3)；0%至约6%的可溶性硅酸盐(例如Na20，2Si02)；约4%至约8%的柠檬酸钠；约13%至约22%的过碳酸钠；约3%至约8%的TAED至约5%的聚合物(例如聚羧酸酯和PVP)；0.%的酶(按纯酶蛋白质计算)；和0-5%的次要成分(例如荧光增白剂、光漂白剂、香料、抑泡剂)。(15)具有体积密度为至少600g/L的颗粒剂形式的洗涤剂组合物，包括约4%至约8%的(C12-C18)烷基硫酸盐；约11%至约15%的醇乙氧基化物；约至约4%的皂；约35%至约45%的沸石MAP或沸石A；约2%至约8%的碳酸钠(如Na2CO3)；0%至约4%的可溶性硅酸盐(例如Na20，2Si02)；约13%至约22%的过碳酸钠；的TAED；0%至约3%的羧甲基纤维素(CMC)；0%至约3%的聚合物(例如聚羧酸酯和PVP)；0.0001-0.的酶(按纯酶蛋白质计算)；和0-3%的次要成分(例如荧光增白剂、膦酸盐、香料)。(16)上面1)_15)所述的洗涤剂制剂，其含有被稳定化的或囊化的过酸作为额外组分或者作为已经述及的漂白体系的替代物。(17)上面1)、3)、7)、9)和12)所述的洗涤剂组合物，其中过硼酸盐被过碳酸盐代替。(18)上文1)、3)、7)、9)、12)、14)和15)所述的洗涤剂组合物，还含有锰催化剂。(19)配制成非水性洗涤剂液体的洗涤剂组合物，包括液态非离子表面活性剂，例如，线性烷氧基化伯醇、助洗剂体系(例如磷酸盐)、酶和碱。该洗涤剂也可包括阴离子表面活性剂和/或漂白体系。在另一个实施方案中，可将2，6-β-D-果聚糖水解酶掺入洗涤剂组合物中并用于家居和/或工业纺织品/衣物上存在的生物膜的去除/清洁。例如，可以将洗涤剂组合物配制成手洗或机洗的洗衣洗涤剂组合物，包括适于预处理污染的织物的洗衣添加剂组合物和漂洗添加的织物软化剂组合物，或者配制成用于一般的家居硬表面清洁操作的洗涤剂组合物，或者配制以用于手洗或机洗的餐具洗涤操作。一个具体的方面，洗涤剂组合物可以包括2，6_β-D-果聚糖水解酶，一种或多种α-淀粉酶变体，和一种或多种其它清洁酶，例如蛋白酶、脂肪酶、角质酶、糖酶、纤维素酶、果胶酶、甘露聚糖酶、，拉伯聚糖酶、半乳聚糖酶、木聚糖酶、氧化酶、漆酶和/或过氧化物酶和/或其组合。通常，所选酶的特性应与选择的洗涤剂兼容(例如最适PH、与其他酶和非成分的兼容性等)，且所述酶应以有效量存在。蛋白酶适宜的蛋白酶包括动物、植物或微生物来源的那些。包括经化学修饰或蛋白质改造的突变体。蛋白酶可以是丝氨酸蛋白酶或金属蛋白酶、碱性微生物蛋白酶或胰蛋白酶样蛋白酶。碱性蛋白酶的实例是枯草杆菌蛋白酶(subtilisin)，尤其是源自芽孢杆菌属的那些，例如枯草杆菌蛋白酶Novo、枯草杆菌蛋白酶Carlsberg、枯草杆菌蛋白酶309(见如美国专利号6，287，841)、枯草杆菌蛋白酶147和枯草杆菌蛋白酶168(参见例如，WO89/06279)。胰蛋白酶样蛋白酶的实例是胰蛋白酶(例如源于猪或牛)和镰孢霉属蛋白酶(参见例如，WO89/06270和WO94/25583)。有用的蛋白酶的实例也包括但不限于WO92/19729和WO98Λ0115中所述的变体。合适的市售蛋白酶包括Alcalase、Savinase、Esperase和Kannase(Novozymes，前身为NovoNordiskA/S)；Maxatase、Maxacal、Maxapem、Properase、Purafect、Purafect0xP、FN2和FN3(DaniscoUSInc.,GenencorDivision；之前称为GenencorInternational,Inc.)。脂肪酶适宜的脂肪酶包括细菌或真菌来源的那些。包括经化学修饰或蛋白质改造的突变体。有用的脂肪酶的实例包括但不限于来自腐质霉属(HumicolaM与嗜热丝孢菌属(Thermomyces)同义)的脂肪酶，例如来自疏毛腐质霉(H.lanuginosa)(疏棉状嗜热丝孢菌(T.Ianuginosus))(参见例如，EP258068和EP305216)、来自特异腐质霉(H.insolens)(参见例如，W096/13580)；假单胞菌属(Pseudomonas)脂肪酶(例如来自产碱假单胞菌(P.alcaligenes)或类产碱假单胞菌(P.pseudoalcaligenes)；参见例如EP218272)，洋葱假单胞菌(P.cepacia)(参见例如EP331376)、斯氏假单胞菌(P.stutzeri)(参见例如GB1，372，034)、荧光假单胞菌(P.fluorescens)、假单胞菌属菌株SD705(参见例如，WO95/06720和WO96/27002)、P.wisconsinensis(参见例如WO96/12012)的脂肪酶；芽孢杆菌属脂肪酶(例如来自枯草芽孢杆菌；参见例如Dartois等人，BiochemicaetBiophysicaActa，(1993))，嗜热脂肪芽孢杆菌(参见例如JP64/744992)或短小芽孢杆菌(B.pumilus)(参见例如WO91/16422)的脂肪酶。其他可以考虑在制剂中使用的脂肪酶变体包括例如在WO92/05249、WO94/01541、WO95/35381、W096/00292、WO95/30744、WO94/25578、WO95/14783、WO95/22615、WO97/04079、WO97/07202、EP407225和EP260105中描述的那些。一些市售可得的脂肪酶包括Lipolase和LipolaseUltra(Novozymes，前身NovoNordiskA/S)。聚酯酶适宜的聚酯酶包括但不限于WO01/34899(GenencorInternational，Inc.)和WO01/14629(GenencorInterntional,Inc.)中描述的那些，并且可以与本文描述的其他酶以任意组合包括在组合物中。淀粉酶组合物可与其他α-淀粉酶组合，如非变体α-淀粉酶。这些酶可包含市售的淀粉酶，例如但不限于Duramyl、Termamyl、Fungamyl和BAN(Novozymes,前身是NovoNordiskA/S)，Rapidase和Purastar(DaniscoUSInc.,GenencorDivision；前身是GenencorInternational,Inc.)。纤维素酶可以向组合物中加入纤维素酶。适宜的纤维素酶包括细菌或真菌来源的那些。包括经化学修饰的或蛋白质改造的突变体。适宜的纤维素酶包括来自芽孢杆菌属、假单胞菌属、腐质霉属、镰孢霉属、梭孢壳属(Thielavia)、枝顶孢属(Acremonium)的纤维素酶，例如如美国专利No.4，435，307；5,648，263；5,691，178；5,776，757和WO89/09259公开的自特异腐质霉、嗜热毁丝霉(Myceliophthorathermophila)和尖镰孢产生的真菌纤维素酶。可以考虑使用的示例性纤维素酶为对于纺织品具有颜色护理益处的那些。此类纤维素酶的实例是描述于例如EP0495257、EP531372、W099/25846(GenencorInternational,Inc.),WO96/34108(Genencorlnternational,Inc.),WO96/11262、WO96/29397和WO98/08940中的纤维素酶。其他实例是纤维素酶变体，例如描述于WO94/07998、W098/12307、WO95/24471、PCT/DK98/00299、EP531315(NovoNordisk)、美国专利No.5，457，046,5,686，593和5，763，254中的纤维素酶变体。市售纤维素酶包含Celhizyme和Carezyme(Novozymes，前身是NovoNordiskA/S)、Clazinase禾ΠPliradaxHA(DaniscoUSInc.,GenencorDivision；之前禾尔为GenencorInternational,Inc.)、KAC-500(B)(KaoCorporation)。过氧化物酶/氧化酶考虑用于组合物中的适宜的过氧化物酶/氧化酶包含植物、细菌或真菌来源的过氧化物酶/氧化酶。其包含化学修饰或蛋白质工程突变体。有用的过氧化物酶的实例包含描述于WO93/24618、W095/10602和WO98/15257中的来自鬼伞属(Coprinus)(例如灰盖鬼伞(C.cinereus))的过氧化物酶及其变体。可通过添加含有一种或多种酶的分开的添加剂，或通过添加包括所有这些酶的组合的添加剂而在洗涤剂组合物中包括洗涤剂酶。可以将洗涤剂添加剂，即分开的添加剂或组合的添加剂配成例如颗粒、液体、浆液等。适宜的颗粒洗涤剂添加剂制剂包含无粉尘颗粒。可例如按照美国专利No.4，106，991和4，661，452所公开来生产无粉尘颗粒，并且可任选地用本领域已知的方法进行包衣。蜡质包衣材料的实例是平均分子量为1，000至20，000的聚环氧乙烷(聚乙二醇，PEG)；具有16-50个环氧乙烷单元的乙氧基化壬基酚’乙氧基化脂肪醇，其中醇含有12-20个碳原子且其中有15-80个环氧乙烷单元；脂肪醇；脂肪酸；以及脂肪酸的甘油单酯和甘油二酯及甘油三酯。例如GB1483591给出了适于通过流化床技术应用的成膜包衣材料的实例。可例如通过加入多元醇诸如丙二醇、糖或糖醇、乳酸或硼酸，按照已建立的方法来稳定液态酶制品。可按照如EP238，216公开的方法来制备受保护的酶。洗涤剂组合物可以是任何便利的形式，例如棒、片、凝胶、粉末、颗粒、糊或液体。液体洗涤剂可以是水性的，通常含有高达约70%的水，和O%至约30%的有机溶剂。也可以考虑含有约30%或更少水的压缩(compact)洗涤剂凝胶。洗涤剂组合物可以包括一种或多种表面活性剂，该表面活性剂可以是非离子型，包括半极性、阴离子型、阳离子型或两性离子型，或其组合。表面活性剂一般按以重量计约0.1%-60%的水平存在。当包括在洗涤剂中时，洗涤剂典型地将含有约至约40%的阴离子表面活性齐IJ，例如线性烷基苯磺酸盐、α-烯烃磺酸盐、烷基硫酸盐(脂肪醇硫酸盐)、醇乙氧基硫酸盐、仲烷基磺酸盐、α-磺基脂肪酸甲酯、烷基或烯基琥珀酸、或皂。当包括在洗涤剂中时，洗涤剂通常将含有约0.2%至约40%的非离子表面活性齐U，如醇乙氧基化物、壬基酚乙氧基化物、烷基多苷、烷基二甲基胺氧化物、乙氧基化脂肪酸单乙醇酰胺、脂肪酸单乙醇酰胺、多羟基烷基脂肪酸酰胺、或葡糖胺的N-酰基-N-烷基衍生物(“葡糖酰胺”)。洗涤剂可含有0%至约65%的洗涤剂助剂或络合剂(complexingagent)，例如沸石、二磷酸盐、三磷酸盐、膦酸酯、碳酸盐、柠檬酸盐、次氮基三乙酸、乙二胺四乙酸(EDTA)、二亚乙基三胺五乙酸、烷基或烯基琥珀酸、可溶性硅酸盐或层状硅酸盐(例如来自Hoechst的SKS-6)。洗涤剂可包括一种或多种聚合物。实例有羧甲基纤维素(CMC)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、聚乙二醇(PEG)、聚乙烯醇(PVA)、聚(乙烯基吡啶-N-氧化物)、聚乙烯基咪唑、聚羧酸酯(如聚丙烯酸酯、马来酸/丙烯酸共聚物)和甲基丙烯酸月桂酯/丙烯酸共聚物。洗涤剂可含有漂白体系，这可包括H2O2来源(例如过硼酸盐或过碳酸盐)，其可以与形成过酸的漂白活性剂(如四乙酰基乙二胺或壬酰基氧基苯磺酸盐)联用。或者，漂白体系可包括过氧酸(例如酰胺、酰亚胺或砜类过氧酸)。漂白体系也可以是酶促漂白体系。可使用常规的稳定剂来稳定洗涤剂组合物中的酶，稳定剂例如多元醇(如丙二醇或甘油)、糖或糖醇、乳酸、硼酸或硼酸衍生物(例如，硼酸芳族酯)、或苯基硼酸衍生物(例如4-甲酰基苯基硼酸)。可按照WO92/19709和WO92/19708所述配制所述组合物。洗涤剂也可含有其他常规洗涤剂成分，例如织物调理剂，包括粘土、增泡剂、抑泡齐U、防腐蚀剂、悬污剂、抗污垢再沉积剂、染料、杀细菌剂、荧光增白剂、助水溶物、晦暗抑制剂或香料。认为在洗涤剂组合物中，尤其是酶变体可以按相当于每升洗液约0.01至约IOOmg酶蛋白质(尤其是每升洗液约0.05至约5.Omg酶蛋白质，特别是每升洗液约0.1至约1.Omg酶蛋白质)的量加入。6.1.评估洗涤剂组合物的方法存在众多α-淀粉酶清洁测定法。检测清洁的示例性描述包括如下内容。“样片”(swatch)是一块材料，诸如其上施有污渍的织物。该材料可以是例如由棉、聚酯或天然和合成纤维的混合物制成的织物。备选的，该材料还可以是纸，例如滤纸或硝化纤维素，或者是一块硬材料，例如陶瓷、金属或玻璃。对于α-淀粉酶，污渍是基于淀粉的，但是也可以包括血液、乳、墨水、草、茶、酒、菠菜、肉汁、巧克力豆、奶酪、粘土、色素、油或这些化合物的混合物。“小样片”是自样片上用单孔穿孔装置切下的部分，或者用定制的96孔穿孔装置(该多孔穿孔模式与标准96孔微滴定板匹配)切下的部分，或者是以其它方式自样片上取下的部分。样片可以是纺织品、纸、金属或其他适宜的材料。小样片可以在放入24孔、48孔或96孔微滴定板孔之前或之后被污物固着。“小样片”也可以通过向小块材料施加污物而制成。例如，小样片可以是直径为5/8”或0.25”的污染的织物片。定制的穿孔机经设计可以同时将96个样片递送至96孔板的所有孔中。该装置可以通过简单地向同一96孔板多次上样，而向每孔递送一个以上的样片。可以想到将多孔穿孔装置用于向任何格式的板(包括但不限于24孔、48孔和96孔板)同时递送多个样片。另一可想到的方法中，污染的测试平台可以是由金属、塑料、玻璃、陶瓷，或其他适宜材料形成的、被污物载污体包覆的珠。然后将一个或多个污物包覆的珠放入含有适宜缓冲液和酶的96孔、48孔或24孔板的孔中或更大形式的板的孔中。这种情况下，可以通过直接吸光度测量或在二级生色反应后在上清液中检测释放的污物。也可以通过质谱分析来进行释放的污染物的分析。在一个实施方案中，处理方案提供对控制污渍固着(fixation)程度。结果是，可以产生例如当在不存在被检测的酶的情况下进行洗涤时能释放出不等量的污渍的样片。固着的样片的使用导致在洗涤试验中信噪比的显著提高。此外，通过改变固着程度，可以产生在不同清洁条件下给出最佳结果的污渍。在多种材料类型上具有已知“强度”的污渍的样片是市售可得的(EMPA，St.Gallen,Switzerland；wfk-TestgewebeGmbH,KrefeldGermany；或CenterforTestMaterials,Vlaardingen,TheNetherlands)和/或可以由从业者制得(Morris和Prato，TextileResearchJournal52(4)=2))样片包含含棉织物，其含有血液/乳/墨水(BMI)污渍、菠菜污渍、草或巧克力/乳/烟灰。可以用0.0003%至0.3%的过氧化氢将BMI污渍固着在棉上。其他组合包括用0.001%-1%戊二醛固着的草或菠菜、用0.001%-1%戊二醛固着的明胶和考马斯染料、或用0.001%-1%戊二醛固着的巧克力、乳和烟灰。也可以在用酶和/或洗涤剂制剂孵育期间搅拌样片。洗涤性能数据取决于孔中，尤其是在96孔板中的样片的取向(水平对垂直)。这表明在孵育期间混合是不充分的。尽管存在许多方式来保证孵育期间充分的搅拌，但可以构建将微滴定板夹在两个铝板之间的板夹。这可以简单地例如在孔上方放置粘性板密封物，然后用任何类型的适宜的、市售可得的夹子将两个铝板与96孔板夹紧而实现。然后可以将它放到商品化的孵育摇床中。将摇床设定为约400转/分钟可以导致非常有效的混合，而板夹有效地阻止了泄漏或交叉污染。可以使用三硝基苯磺酸(TNBS)来量化洗液中的氨基基团浓度。这可以用作从样片中去除的蛋白质量的量度(参见例如Cayot和Tainturier,Anal.Biochem.(1997))。然而，如果洗涤剂或酶样品导致异乎寻常小的肽片段的形成(例如，因样品中存在肽酶所致)，那么人们将获得较大的TNBS信号，即更多“噪音”。另一用于测量对血液/乳/墨水的洗涤性能的手段是基于墨水的释放，这可以通过测量洗液的吸光度而量化。可以在350和SOOnm之间的任何波长测量吸光度。另一方面，可以在410nm或620nm处测量波长。也可以检查洗液以确定对于含有草、菠菜、明胶或考马斯染料的污渍的洗涤性能。对于这些污渍，示例性的波长包括对于菠菜或草的670nm和对于明胶或考马斯染料的620nm。例如，移出等份试样的洗液(例如，通常来自96孔微板的100-150μL)并放到小杯或微孔微板中。然后将它放到分光光度计中并在适当的波长读取吸光度。也可以使用该体系，例如通过使用在诸如布、塑料或陶瓷的适宜载污体上的血液/乳/墨水污渍，来测定用于餐具洗涤的酶和/或洗涤剂组合物。一方面，可以通过在25°C将0.3%过氧化氢施加到BMI/棉样片上30分钟或通过在60°C将0.03%过氧化氢施加到BMI/棉样片上30分钟，在棉上固着BMI污渍。从BMI/棉样片上切下约0.25"的小样片并放入96孔微滴定板的孔中。向各孔中放入已知的洗涤剂组合物和酶如变体蛋白质的混合物。向微滴定板顶部放置粘性板密封物后，将微滴定板与铝板夹在一起，并在定轨摇床上以约250转/分钟搅拌约10-60分钟。这个时间结束后，将上清液转移到新的微滴定板的孔中并测量620nm的墨水吸光度。这可以类似地用通过在250C向菠菜/棉样片或草/棉样片施加0.01%戊二醛30分钟而固着在棉上的菠菜污渍或草污渍来进行检测。这也可以用巧克力、乳和/或烟灰污渍完成。7.生物膜去除组合物和用途组合物可以包括一种α-淀粉酶变体作为主要的酶组分，例如单组分组合物，用于去除生物膜。或者，组合物可以包括多种酶活性，例如多种淀粉酶，或酶混合物，包括氨肽酶、淀粉酶(β_或α-或葡糖-淀粉酶)、糖酶、羧肽酶、过氧化氢酶、纤维素酶、几丁质酶、角质酶、环糊精糖基转移酶、脱氧核糖核酸酶、酯酶、α-半乳糖苷酶、β-半乳糖苷酶、葡糖淀粉酶、α-葡糖苷酶、β-葡糖苷酶、卤代过氧化物酶(haloperoxidase)、转化酶、漆酶、脂肪酶、甘露糖苷酶、氧化酶、果胶裂解酶、肽谷氨酰胺酶(ρ印tidoglutaminase)、过氧化物酶、肌醇六磷酸酶、多酚氧化酶、蛋白水解酶、核糖核酸酶、转谷氨酰胺酶和/或木聚糖酶，或其任意组合，用于去除生物膜。其他酶可通过属于如下属或种的微生物生产曲霉属，例如棘孢曲霉(A.aculeatus)、泡盛曲霉、黑曲霉或米曲霉；或木霉属；腐质霉属，例如特异腐质霉(H.insolens)；或镰孢霉属，例如杆孢状镰孢(F.bactridioides)、F.cerealis、F.crookwellense、大刀键抱(F.culmorum)、禾本禾斗键抱(F.graminearum)、禾赤镰孢(F.graminum)、异孢镰孢(F.heterosporum)、合欢木镰孢(F.negundi)、尖镰孢、多枝镰孢(F.reticulatum)、粉红镰孢(F.roseum)、接骨木镰孢(F.sambucinum)、肤色镰孢(F.sarcochroum)、硫色镰孢(F.sulphureum)、F.toruloseum、拟丝孢镰孢(F.trichothecioides)或Fusariumvenenatum。包括α-淀粉酶变体的组合物可以按照本领域已知的方法制备，并且可以是液体或干组合物的形式。例如，含α-淀粉酶变体的组合物可以是颗粒或微颗粒的形式。欲包括在组合物中的多肽可以按照本领域已知的方法稳定化。下文给出了多肽组合物用途的实例。含α-淀粉酶变体组合物的用量及组合物使用的其他条件可以基于本领域已知的方法来确定。还考虑α-淀粉酶变体与2，6-β-D-果聚糖水解酶或其变体一起用在组合物中。一种方法是瓦解和/或去除生物膜。如本文所用的术语“瓦解”应理解为水解生物膜基质中的多糖，该多糖在生物膜中将个体微生物细胞连接并结合在一起，由此所述微生物细胞能够从生物膜中释放并除去。生物膜存在于表面，故生物膜的瓦解可以通过用含有α-淀粉酶变体或一种或多种其他负责降解生物膜的酶(例如但不限于2，6-β-D-果聚糖水解酶)的水性介质接触表面(例如通过浸没、覆盖或喷洒表面)而实现。组合物可用于水解例如纸浆业和纸业白水中的腐浆(slime)。α-淀粉酶变体的存在量可以是0.0001-10，000mg/L，或0.OOl-lOOOmg/L，或0.01-100mg/L，或甚至是0.l-10mg/L。其他酶及酶变体可以以相似或更低的量存在。该方法可以适宜地在室温至约70°C的温度进行。适宜的温度范围为约30°C至约60°C，例如约40°C至约50°C。用于水解生物膜的适宜pH处在约3.5至约8.5的范围内。尤其适宜的范围包括PH约5.5至约8，例如约6.5至约7.5。用于酶变体有效去除生物膜的接触时间或反应时间可以变化相当大，这取决于生物膜的特性以及表面用酶变体单独或组合其他酶如2，6-β-D-果聚糖水解酶处理的频率。例如，适宜的反应时间为约0.25至约25小时，例如约1至约10小时，例如约2小时。可与α-淀粉酶变体和2，6-β_D_果聚糖水解酶组合的其他酶包括但不限于纤维素酶，半纤维素酶，木聚糖酶，其他淀粉酶，包括其他α"淀粉酶，脂肪酶，蛋白酶和/或果胶酶。所述酶还可以与抗微生物剂组合，例如酶的或非酶的生物杀灭剂。酶生物杀灭剂可以是例如包括氧化还原酶，例如漆酶或过氧化物酶，特别是卤代过氧化物酶，和任选的增强齐U，例如丁香酸烷基酯的组合物，例如WO97/42825和DK97/1273中所描述的那样。待去除和/或清除生物膜的表面可以是硬表面，其定义涉及基本上微生物不能透过的任何表面。实例是由金属例如不锈钢合金、塑料/合成聚合物、橡胶、板材、玻璃、木材、纸、纺织品、混凝土、岩石、大理石、石膏及陶瓷材料制成的表面，其任选地以例如油漆、珐琅、聚合物等包覆。从而，表面可以是支持、运输、处理或接触水性溶液的系统(如供水系统、食品处理系统、冷却系统、化学处理系统、药物处理系统或木材加工系统(如见于制浆和/或造纸工业))的构件。因此，酶变体和含有酶变体的组合物可用于常规的就地清洗(C-I-P)系统。表面可以是系统单元(如管道、罐、泵、膜、滤器、热交换器、离心机、蒸发器、混合器、喷雾塔、阀门和反应器)的一部分。表面也可以是医学科学和工业所用的器具(如污染的内窥镜、假体装置或医学内植物)或其部分。用于生物膜去除的组合物也可以考虑用于防止当金属表面例如管道受微生物生物膜攻击时发生的所谓生物腐蚀，即通过瓦解生物膜，由此防止生物膜中的微生物细胞建立起腐蚀其所附着的金属表面的生物膜环境。7.1.口腔护理组合物抗生物膜组合物的其他应用包含口腔护理。因此表面包含具有牙菌斑的牙齿。因此，变体酶可用在组合物(例如牙膏)和方法中用于制备瓦解人或动物牙齿上的菌斑的含酶变体药物。另一用途是自粘膜瓦解生物膜，例如患有囊性纤维化的患者肺中的生物膜。表面还可以是具有生物来源的其他表面(例如皮肤、牙齿、头发、指甲)或可以是受污染的隐形镜片。在口腔护理组合物中有用的其他酶包含但不限于2，6_β-D-果聚糖水解酶；葡聚糖酶；齿斑葡聚糖酶(mutanase)；氧化酶，例如葡糖氧化酶，L-氨基酸氧化酶，过氧化物酶，例如WO95/10602中所述的鬼伞属过氧化物酶或乳过氧化物酶，卤代过氧化物酶，特别是衍生自弯孢霉属物种(Curvulariasp.)、特别是糙壁弯孢(C.verruculosa)和不等弯孢(C.inaequalis)的卤代过氧化物酶；漆酶；蛋白酶例如木瓜蛋白酶，酸性蛋白酶(例如TO95/02044中所述的酸性蛋白酶)，内切糖苷酶，脂肪酶，淀粉酶，包括淀粉葡糖苷酶，如AMG(来自NovoNordiskA/Ss，前身是NovoNordiskA/S)；抗微生物酶，以及它们的混合物。口腔护理产品任选可以包含如美国专利号6，207，149中公开的淀粉结合结构域。口腔护理组合物可以具有任何适宜的物理形式(即，粉末、糊、凝胶、液体、膏、片等)。“口腔护理组合物”包括可用于维持或改善人和动物口中口腔卫生的组合物，预防龋齿、预防牙菌斑和牙垢形成、去除牙菌斑和牙垢、预防和/或治疗牙科疾病等。口腔护理组合物也包括用于清洁假牙、人工牙齿等的产品。口腔护理组合物的实例包括牙膏、牙霜、凝胶或牙粉、漱牙漱口水、刷牙前后的嗽洗制剂、口香糖、锭剂和糖果。牙膏和牙凝胶一般包括磨擦抛光材料、发泡剂、矫味剂、保湿剂、粘合剂、增稠剂、甜味剂、增白