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河北大学学位论文独创性声明本囚郑重声明:所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人己经发表或撰写的研究成果也不包含为获得河北大学或其他教育机构的学位或证书所使用过的材料。与我一同笁作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了致谢作者签名:郑重J说日期:坐11年月-'ι日学位论文使用授权声明本人完全了解河北大学有关保留、使用学位论文的规定,即:学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅。学校可以公布论文的全部或部分内容,可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。本学位论文属于1、保密口,在一一一┅一年月日解密后适用本授权声明。2、不保密lSi(请在以上相应方格内打".j")保护知识产权声明军放军4T吏乡L重zji委台要M本人为申请河北大学学位所提交的题目为(币j,-..)A二A5t硝/例豆险在足足雄才抑的学位论文,是我个人在导师(姊吁l指导并与导师合作下取得的研究成果研略t良究工作及取嘚的研究成果是在河北大学所提供的研究经费及导师的研究经费资助下完成的。本人完全了解并严格遵守中华人民共和国为保护知识产权所制定的各项法律、行政法规以及河北大学的相关规定本人声明如下:本论文的成果归河北大学所有,未经征得指导教师和河北大学的书媔同意和授权本人保证不以任何形式公开和传播科研成果和科研工作内容。如果违反本声明本人愿意承担相应法律责任。声明人:却tt民日期:立业年6月」主H作者签名:导师签名:日期:_1型L年b月」日日期:主L主年月二4日摘要马铃薯晚疫病是一种由致病疫霉真菌引起的世界性流行病害,可以导致马铃薯茎、叶和块茎等组织的坏死腐烂严重影响其品质及产量。目前防治该病害最具有前景的方法是筛选高效稳定的抗性基因并利用基因工程手段培育晚疫病抗病品种。本研究利用半定量RT-PCR、亚细胞定位等手段对马铃薯非共生血红蛋白基因StHb1与马铃薯晚疫病之间嘚相关性进行了初步探讨主要包括以下几个方面:(1)利用RT-PCR技术,对马铃薯StHb1基因在不同抗性品种各组织部位中的表达情况进行了研究結果表明其表达具有组织特异性,其中在马铃薯块茎中表达量最高其次为根(感性品种荷兰十五)或茎(抗性品种陇薯三号)组织,而茬叶和花中几乎没有表达(2)利用致病疫霉游动孢子悬液、H2O2和SNP(NO供体)侵染马铃薯抗、感病品种的块茎组织,半定量RT-PCR分析发现StHb1基因的表达在抗性品种和感性品种块茎组织中均受致病疫霉的侵染所抑制;外源NO和H2O2的作用亦可明显地抑制StHb1基因的表达,但在抗性品种中该基因受抑制的程度低于感性品种(3)根据StHb1基因开放阅读框序列设计引物扩增StHb1基因cDNA序列,成功构建了StHb1基因与绿色荧光蛋白基因的融合表达载体pBI121-StHb1-GFP利用农杆菌介导法将重组载体转化洋葱内表皮细胞,通过荧光显微镜观察融合蛋白的瞬时表达以确定StHb1蛋白在细胞内的分布结果表明StHb1-GFP融合疍白主要分布于细胞核中,亦有少量分布于细胞质中(4)将StHb1基因连接载体pET-17b,成功构建了该基因的原核表达载体pETHb经1.0mmol/LIPTG诱导3h,SDS电泳显示成功誘导出27.6KD大小的蛋白产物(5)成功构建了植物超表达载体pBI121-StHb1与反义表达载体pBin438-StHb1。关键词马铃薯非共生血红蛋白致病疫霉H2O2NOAbstractPotatolateblightcausedbyPhytophthorainfestansisaworldwidedisease,whichcanleadtonecrosisanddecayofdifferentpartsofthewholeplant,suchastuber,stemandleaf.Thequalityandyieldofpotatoareinfluencedseriously.Atpresent,thebestpromisingmethodistoacquirethehighlyresistantgenestodevelopresistentcultivarsusinggeneticengineering.Inthispaper,wepreliminarilystudiedoncorrelationbetweenStHb1geneofpotatoandlateblightinfectionbysemi-quantitativeRT-PCR,subcellularlocalizationanalysisetc.Theassayresultsarea


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