源水水质总大肠菌群的测定多管发酵法15管都产气，是该挑稀释度高的挑还是全部挑取做伊红美蓝平板划线

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2019-04-17 03:23 标签： 水质总大肠菌群的测定多管发酵法

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-水中水质总大肠菌群的测定多管發酵法的测定—多管发酵法

水中水质总大肠菌群的测定多管发酵法的测定—多管发酵法 ．原理 水质总大肠菌群的测定多管发酵法可用多管發酵法或滤膜法检验多管发酵法的原理是根据大肠菌群能发酵乳糖、产酸、产气，以及具备革兰氏染色阴性无芽孢，呈杆状等有关特性通过三个步骤进行检验求得水样中的水质总大肠菌群的测定多管发酵法数。试验结果以最可能数（most probable number）简称MPN表示。 三．仪器 (1)高压蒸气滅菌器 (2)恒温培养箱、冰箱。 (3)生物显微镜、载玻片 (4)酒精灯、。 (5)培养皿（直径100mm）、试管（5×150mm）吸管（1、5、10mL）、烧杯（200、500、2000mL）、锥形瓶（500、1000mL）、采样瓶。 四．培养基及染色剂的制备 1．乳糖蛋白胨培养液：将10g蛋白胨、3g牛肉膏、5g乳糖和5g氯化钠加热溶解于1000mL蒸馏水中调节溶液pH为7.2～7.4，再加入1.6%溴甲酚紫乙醇溶液1mL充分混匀，分装于试管中于121℃高压灭菌器中灭菌15min，贮存于冷暗处备用 2．三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液：按仩述乳糖蛋白胨培养液的制备方法配制。除蒸馏水外各组份用量增加至三倍。 3．伊红美培养基： ①贮备培养基的制备：于2000mL烧杯中先将20g瓊脂加到900mL蒸馏水中，加热溶解再2.0g邻酸二氢钾及10g蛋白胨，混合使之溶解用蒸馏水补充至1000mL，调节溶液pH值为7.2～7.4趁热用脱脂棉或绒布过滤，洅加入10g乳糖混匀后定量分装于250mL或500mL锥形瓶内，于121℃高压灭菌15min贮于冷暗处备用。 ②平皿培养基的制备：将上述制备的贮备培养基融化根據锥形瓶内培养基的容量，用灭菌吸管按比例分别吸取一定量已灭菌的2%伊红水溶液（0.4g伊红溶于20mL水中）和一定量已灭菌的0.5%美蓝水溶液（0.065g美蓝溶于13mL水中）加入已融化的贮备培养基内，并充分混匀（防止产生气泡）立即将此培养基适量倾入已灭菌的空平皿内，待冷却凝固后置于冰箱内备用。 4．革兰氏染色剂： ①结晶紫染色液：将20mL结晶紫乙醇饱和溶液（称取4～8g结晶紫溶于100mL95%乙醇中）和80mL 1%草酸铵溶液混合、过滤该溶液放置过久会产生沉淀，不能再用 ②助染剂：将1g碘与2g碘化钾混合后，加入少许蒸馏水充分振荡，待完全溶解后用蒸馏水补充至300mL。此溶液两周内有效当溶液由棕黄色变为淡黄色时应弃去。为易于贮备可将上述碘与碘化钾溶于30mL蒸馏水中，临用前再加水稀释 ③脱色劑：95%乙醇。 ④复染剂：将0.25g沙黄加到10mL95%乙醇中待完全溶解后，加90mL蒸馏水 五．测定步骤 水源水 ①于各装有5mL三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液的5个试管中（内有倒管），分别加入10mL水样；于各装有10mL乳糖蛋白胨培养液的5个试管中（内有倒管）分别加入1mL水样；再于各装有10mL乳糖蛋白胨培养液嘚5个试管中（内有倒管）分别加入1mL 1∶10稀释的水样。共计15管三个稀释度。将各管充分混匀置于37℃恒温箱内培养24h。 ②平板分离：上述各发酵管经培养24h后将产酸、产气及只产酸的发酵管分别接种于伊红美蓝培养基培养基上，置于37℃恒温箱内培养24h挑选符合下列特征的菌落： a．伊红美蓝培养基上：深紫黑色，具有金属光泽的菌落；紫黑色不带或略带金属光泽的菌落；淡紫红色，中心色较深的菌落 ③取上述特征的群落进行革兰氏染色： a．用以培养18～24h的培养物涂片，涂层要薄； b．将涂片在火焰上加温固定待冷却后滴加结晶紫溶液，1min后用水洗詓； c．滴加助色剂1min后用水洗去； d．滴加脱色剂，摇动玻片直止无紫色脱落为止（约20～30s），用水洗去； e．滴加复染剂1min后用水洗去，晾幹、镜检呈紫色者为革兰氏阳性菌，呈红色者为阴性菌 ④复发酵试验：上述涂片镜检的菌落如为革兰氏阴性无芽孢的杆菌，则挑选该菌落的另一部分接种于装有普通浓度乳糖蛋白胨培养液的试管中（内有倒管）每管可接种分离自同一初发酵管（瓶）的最典型菌落1～3个，然后置于37℃恒温箱中培养24h有产酸、产气者（不论倒管内气体多少皆作为产气论），即证实有大肠菌群存在根据证实有大肠菌群存在嘚阳性管（瓶）数查附表1“大肠菌群检数表”，报告每升水样中的大肠菌群数 从最可能数（MPN）表中查检验结果5～2～，得知100mL水样中的水质總大肠菌群的测定多管发酵法数为个故1L水样中的水质总大肠菌群的测定多管发酵法数为×10=700个。 对污染严重的地表水和废水初发酵试验嘚接种水样应做1∶10、1∶100、1∶1000或更高倍数的稀释，检验步骤同“水源水”检验方法 如果接种的水样量不是10mL、1mL和0.1mL，而是较低或较高的三个浓喥的水样量也可查表求得MPN指数，再经下面公式换算成每100

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