Trans-T1和DH5α对大片段的承载能力，哪个承载力强？

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2019-04-18 02:38 标签： T1

个人总结 DH5α感受态的制备和转化

(2)倒入,灭菌冰上预冷的50ml离心管中,盖严;

(3)冰浴20-30分钟,使菌液冷却到0℃(要是有事,此步可暂停,冰浴久一点);

(10)分装(EP在预冷前先做好标记)100 μL或者200μL一管可以-70℃保存备用,也可以放置于冰上后在冰箱4℃保存一两天再用,转化效果不会有大的影响。

注意:加入CaCl2后细胞比较脆弱,操作一定要轻柔,不能弹不能摔整个操作都要在冰上,手不要直接接触管底。

可用新做的感受态进行转化,也可用-70℃保存的进行转化

(6)37℃倒置培养过夜,第二天查看板上菌落苼长情况

注意:要是转化质粒,转0.5μL或者1μL就行了,质粒的转化效率很高。涂板的时候不用离心,直接吸取50μL涂板转化连接产物的时候由于连接效率不一定高,所以要离心之后弃上清剩余100μL再悬浮后全部涂板。

3.阳性克隆的快速鉴定

(1)用灭菌的牙签挑取单克隆到有1ml的培养基(含有相对应忼生素)的2ml灭菌EP管中

个人总结 DH5α感受态的制备和转化

(2)倒入,灭菌冰上预冷的50ml离心管中,盖严;

(3)冰浴20-30分钟,使菌液冷却到0℃(要是有事,此步可暂停,冰浴久一点);

(10)分装(EP在预冷前先做好标记)100 μL或者200μL一管可以-70℃保存备用,也可以放置于冰上后在冰箱4℃保存一两天再用,转化效果不会有大的影响。

注意:加入CaCl2后细胞比较脆弱,操作一定要轻柔,不能弹不能摔整个操作都要在冰上,手不要直接接触管底。

可用新做的感受态进行转化,也可用-70℃保存的进行转化

(6)37℃倒置培养过夜,第二天查看板上菌落苼长情况

注意:要是转化质粒,转0.5μL或者1μL就行了,质粒的转化效率很高。涂板的时候不用离心,直接吸取50μL涂板转化连接产物的时候由于连接效率不一定高,所以要离心之后弃上清剩余100μL再悬浮后全部涂板。

3.阳性克隆的快速鉴定

(1)用灭菌的牙签挑取单克隆到有1ml的培养基(含有相对应忼生素)的2ml灭菌EP管中

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