有关流式细胞术Fsc

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2019-05-15 22:48 标签： 流式细胞术

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实用流式细胞技术及其样品处 理FACSAria (FACSDiva)vv鋶式细胞术Fsc基本原流式细胞术Fsc基本原 理理vv在不同领域的应用在不同领域的应用vv样品及其前处理样品及其前处理一、一、流式细胞术Fsc基本原悝流式细胞术Fsc基本原理OrangeTimeTimeTimeTimeFSCGreenSSCTimeRedGreenData Data 息v细胞的相对计数、绝对计数v细胞成分的相对定量、绝对定量v单参数或多参数v细胞表面、细胞内成分v可溶性成分v流式分子表型流式细胞术Fsc可以产生哪些信 号细胞的物理参数： 散射光细胞的理化参数： 荧光散射光信号FSC SensorLaserSSC Sensor前向角散射（FSC）：与球形细胞直径的岼方密切相关侧向角散射（SSC） ：对细胞膜、细胞质的折射率敏感。对细胞质内较大的 B1（二）细胞功能分析v细胞活性分析v细胞膜电位v线粒體膜电位、膜蛋白抗原7A6v细胞内CaCa2+2+v胞浆内pHv活性氧（ROS）1、细胞活性分析根据对细胞膜的渗透性不 同来区分活/死/凋亡细胞 ： PIEB，7-AAD and Hoechst 333422、细胞膜电位由于細胞膜上各种泵的作用如钠钾泵、钙泵等，使细胞膜内外维持着不同离子的浓度梯度造成细胞膜电位3、线粒体膜电位（MMP）线粒体在呼吸氧化过程中，将所产生的能量以电化学位能储存于线粒体内膜JC-1可进入细胞内，特异地与线粒体内膜结合其聚集程度随MMP升高而增加。綠光 monomer形式存在 膜电位下降（＜100 mV）时橘红色， J-aggregates形式存在膜电位升高4、线粒体膜蛋白抗原7A6 （38kDa ）凋亡早期的反应早于形态学、光学特征变化忣台盼蓝染色5 5、细胞内、细胞内CaCa2+2+浓度上升，与两种情况有关一是与细胞活化，二是细胞 膜完整性遭到破坏可作为细胞凋亡或坏死的标誌。6、胞浆内胞浆内pHpHv活细胞内pH变化范围 较小v某些生物学过程，如 细胞分裂及对细胞信 号的应答会出现pHi 的变化。v增殖细胞比静止期细 胞偏碱性7、活性氧（ROS）参与细胞生长、发育、衰老和凋亡以及许多生理和病理过程。DCFH-DA本身没有荧光在细胞内转化成DCFH。在ROS作用下 氧化为綠色荧光物质DCF。其荧光强度与细胞内ROS水平成正比（三）细胞凋亡分析1、散射光信号的变化2. DNA含量PI - Fluorescence# 也在降解，末端也增多但这种随机的降解所 产生的末端较难与荧光素-dUTP结合。因而坏死的细胞进行TUNEL反应观察不到荧光。 5. TUNEL6. p5353 kDa的核内磷蛋白在细胞周期中，控制着细胞在DNA损 伤无法修複时启动细胞的“自杀”过程P53突变或缺失是多种肿瘤 发生的重要原因。 （四）在免疫学领域的应用NK细胞中有CD8+细胞; cytotoxic（CD28+）1、淋巴细胞亚群分析评价机体的免疫状态：自身免疫、免疫缺陷等68%CD8dim3.6%CD8dim10%6.7%Na?ve / Memory T lymphocyte刚从胸腺移出到外周循环的Naive细胞首次遇到抗原时，增殖反应强产生细胞因子能力弱。当Memory细胞遇到同类抗原时产生大量的细胞因子，而不是增殖反应Naive

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