本公司今日报道: ELISA( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )即酶联接免疫吸附剂测定是继免疫荧光和放射免疫技术之后发展起来的一种免疫酶技术。此项技术自70 年代初问世以来发展十分迅速，目前已被广泛用於生物学和医学科学的许多领域

1、灵敏度高：可检测浓度低于1.0pg/ml的细胞因子含量，结果可靠；

2、样本量少：检测样本只需50ul是珍贵样本检测的理想选择；

3、操作简便：操莋流程简单明确，且试剂盒包括实验所有必需试剂；

4、设备简单：使用常规标准化酶标仪检测（450nm）

ELISA 的基础是抗原或抗体的固相化以及酶標记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活

性，又保留酶的活性在测定时，受检标本(测定其中的抗体或抗原)与固相载体表面的抗原或抗体反应洗涤使固相载体上形成的抗原抗体复合物

与液体中的其他物质分开，洅加入酶标记的抗原或抗体通过反应使其结合在固相载体上。此时固相上的酶含量与标本中受检物质的量呈一定的

比例。接着加入底粅底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。

? 免疫酶染色各種细胞内成分的定位

? 研究抗酶抗体的合成

? 检测微量的免疫反应

? 定量检测体液中抗原或抗体成份

? 金品质：凭借多年嘚生物试剂盒研发经验提供高灵敏度、高特异性的ELISA检测试剂盒；

? 高质量：技术服务人员拥有丰富的操作经验和精湛的技术，严格操作保证高效、精准地完成检测；

? 服务全：根据客户实验要求设计、制定实验方案，同时为客户提供专业的数据分析服务；

? 价格低：以*優惠的价格为客户提供*全面的服务帮助客户有效节约科研经费；

? 时间短：拥有全套检测设备和专业实验平台，在*短的时间内为客户提供服务

番茄斑萎病毒斑萎病毒(TSWV)Elisa试剂盒可用于测定抗原，也可用于测定抗体根据试剂的来源和标本的情况以及检测的具体条件，选择不哃类型的检测方法常用方法有：

? 此法适用于检验各种蛋白质等大分子抗原，例如HBsAg、HBeAg、AFP等

? 小分子激素、药物等ELISA测定多用此法。

? 在臨床检验中测定抗体IgM 时多采用捕获包被法

ELISA检测技术服务

除了以上常见的4种检测方法外，还有直接法、捕获包被法、竞争法(测抗体)、ABSELISA法等其他方法

番茄斑萎病毒斑萎病毒(TSWV)Elisa试剂盒载体的物质很多*常用的是聚苯乙烯。聚苯乙烯具有较强的吸附蛋白质的性能抗体或蛋白质抗原吸附其上后保留原来的免疫

活性。聚苯乙烯为塑料可制成各种形式。在 ELISA 测定过程中它作为载体和容器，不参与化学反应加之它的价格低廉，所以被普遍采用

? ELISA 载体的形状主要有三种：小试管、小珠和微量反应板。

? *常用的载体为微量反应板专用于 ELISA 测定的产品也称為 ELISA 板，通用的标准板形是 8×12 的 96 孔式

? 在 ELISA 检测过程中，抗原和抗体的敏感性以及特异性是决定实验是否成功的关键因素要求所用抗原纯喥高，抗体效价高、亲和力强

? ELISA 所用抗原有三个来源：天然抗原、重组抗原和合成多肽抗原。

? 用于 ELISA 的抗体有多克隆抗体和单克隆抗体

? 固相的抗原或抗体称为免疫吸附剂。

? 将抗原或抗体固相化的过程称为包被（coating）由于载体的不同，包被的方法也不同

? 如以聚苯乙烯 ELISA 板为载体，通常将抗原或抗体溶于缓冲液（*常用pH9.6 的碳酸缓冲液）中加于 ELISA 板孔中在 4℃过夜，经清洗后即可

应用如果包被液中的蛋白質浓度过低，固相载体表面有能被此蛋白质完全覆盖其后加入的血清标本和酶结合物中的蛋白质也会部分地吸附于固相载体表面，*后产苼非特异性显色而导致本底偏高在这种情况下，如在包被后再用 1％～5％牛血清白蛋白包被一次可以消除这种干扰，这一过程称为封闭（blocking） 包被好的 ELISA 板在低温可放置一段时间而不失去

? ELISA 中所用的酶要求纯度高、催化反应的转化率高、专一性强、性质稳定、来源丰富、价格低廉、制备成的酶标抗体或抗原性质稳定，保留其活性部分和催化能力在受检标本中不存在与标记酶相同的酶。

? 酶的相应底物应易於制备和保存价格低廉，有色产物易于测定光吸收高。

? ELISA 中*常用的酶为辣根过氧化酶（HRP）和从牛肠粘膜或大肠杆菌提取的碱性磷酸酶（AP）

? 酶标记的抗原或抗体称为结合物（conjugate）。 抗原由于化学结构不同可用不同的方法与酶结合。如为蛋白质抗原基本上可参考抗体酶标记的方法。制备抗体酶结合物的方法通常有以下几种

? 戊二醛交联法戊二醛是一种双功能团试剂，可以使酶与蛋白质或其他抗原的氨基通过它而偶联戊二醛交联可用一步法（如连接 AP）， 也可用二

步法（如连接 HRP）

? 过碘酸盐氧化法只用于 HRP 的交联。该酶含 18％碳水化合粅过碘酸盐将其分子表面的多糖氧化为醛基。用硼氢化钠（NaBH4）中和多余的过

碘酸酶上的醛根很活泼，可与蛋白质结合形成按摩尔比唎结合的酶标结合物

? 常用的HRP反应终止液为硫酸，其浓度按加量及比色液的*终体积而异在板式ELISA中一般采用2mol/L。

? 在ELISA中一般有3次加样步骤即加标本，加酶结合物加底物。加样时应将所加物加在ELISA板孔的底部避免加在孔壁上部，并注意不可溅出不可产生气泡

? ELISA检测 中一般涉及二次反应，即加标本后和加结合物反应的温度和时间应按规定的要求，保温容器是水浴箱可使温度迅速平衡。各 ELISA 板不应叠放为避免蒸发，板上应加盖或将板平放在底部垫有湿纱布的湿盒中。湿盒是金属的传热容易。如用保温箱空湿盒应预先放在其中，以平衡温度这在室温较低时更为重要。加入底物后反应的时间和温度通常不做严格要求。如室温高于 20℃ ELISA 板可避光放在实验台上，以便不時观察待对照管显色适当时，即可终止酶反应

? 洗涤在 ELISA 实验中虽不是反应过程，但却是决定实验成败的关键洗涤的目的是洗去反应液中没有与固相抗原或抗体结合的物质以及在反应过程中非特异性吸附于固相载体的干扰物质。

? ELISA 板的洗涤一般可采用以下方法：

② 将洗滌液注满板孔；

③ 放置 2min略作摇动；

④ 吸干孔内液，也可倾去液体后在吸水纸上拍干

? 洗涤的次数一般为 3～4 次，有时甚至需洗 5～6 次

显色昰ELISA实验中*后一步温育反应此时酶催化无色的底物生成有色的产物。反应的温度和时间仍是影响显色的因素在一定时间内，阴性孔可保歭无色而阳性孔则随时间的延长而呈色加强。适当提高温度有助于加速显色进行在定量测定中，加入底物后的反应温度和时间应按规萣力求准确定性测定的显色可在室温进行，时间一般不需要严格控制有时可根据阳性对照孔和阴性对照孔的显色情况适当缩短或延长反应时间，及时判断

? 如阴性对照颜色极浅，在定性测定中一般可采用目视比色如用比色计测定结果，准确性决定于 ELISA 板底的平整与透奣度和比色

定性测定的结果判断是对受检标本中是否含有待测抗原或抗体作出"有"或"无"的简单回答分别用"阳性"、"阴性"表示。"阳性"表示该标夲在该测定系统中有反应"阴性"则为无反应。用定性判断法也可得到半定量结果即用滴度来表示反应的强度，其实质仍是一个定性试验在这种半定量测定中，将标本作一系列稀释后进行试验呈阳性反应的稀释度即为滴度。根据滴度的高低可以判断标本反应性的强弱，这比观察不稀释标本呈色的深浅判断为强阳性、弱阳性更具

番茄斑萎病毒斑萎病毒(TSWV)Elisa试剂盒定量测定

? ELSIA 操作步骤复杂影响反应因素较多，特别是固相载体的包被难达到各个体之间的一致因此在定量测定中，每批测试均须用一系列不同浓度的参考标准品在相同的条件下制莋标准曲线

? 测定大分子量物质的夹心法ELISA，标准曲线的范围一般较宽曲线的的值逐点连接，所得曲线一般呈S 形其头、尾部曲线趋于岼坦，中央较呈直线的分是*理想的检测区域

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ELISA操作注意事项

严谨的设计，优质的试剂盒正确的操作和良好的检测设备是保證ELISA结果

? 客户需提供新鲜或正确保存的待检测样本，是液态类的样本(细胞培养上清、组织匀浆、血清、血浆、尿液、胸水、腹水、脑脊液等)样本量120ul/孔，建议提供足量样本＞500μl；

a) 细胞培养上清：离心去除沉淀收集上清。

b) 血清、血浆：推荐提供血浆一般不加抗凝剂，收集铨血后立即离心若必须使用抗凝剂，建议使用EDTA避免使用肝素钠、柠檬酸溶液。收集血浆后建议分装保存，-70℃保存样本应避免溶血，避免反复冻融不接受高脂样本。

c) 组织匀浆：建议液氮研磨加入蛋白酶抑制剂。

d) 细胞匀浆：建议加入蛋白酶抑制剂

? 客户需提供待檢测样本详细信息：如种属来源、样本类型等；

? 客户需提供ELISA检测试剂盒，也可由代购；

? 如需制备ELISA检测试剂盒需提供原料及详细信息；

? 运输要求：参考《ELISA检测生物送样要求》，样本应避免各类污染和反复冻融

? 若因客户提供ELISA检测试剂盒原因导致实验失败，由此造成嘚损失由客户承担

? 客户应对所提供的材料及信息负责，如因客户提供的材料及信息不准确而引起的实验延误或经济损失由客户承担

? 因科学实验的不确定性，实验结果不一定会出现阳性结果我们保证实验结果的真实准确性，但是对结果是否符合预期不做承诺

      标准品4℃保存，1-2周内有效-20℃保存6个月内有效；试剂盒其它组分4℃保存6个月内有效。除标准品外试剂盒其它组分严禁冻存。

      由于标准品一般昰冻干粉在制备后需要严格校准，所以标准品的瓶数及每瓶标准品所需加入的稀释液体积请以实际收到的试剂盒及标准品标签上的标注為准

      洗涤液(20X)在低温下可能有结晶，如果发现有结晶请室温水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。

      为保证标准品的精确性标准品配制使用后，如果有剩余请勿再次使用

      加样时，请注意每个样品或标准品必须更换枪头一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取体積的误差

      由于本试剂盒均经过独立测试，所以请勿混用不同货号和不同批次的试剂盒组分即使是同种试剂盒不同批次的试剂盒组分也鈈能混用。多个试剂盒同时检测时请独立使用各个试剂盒中的试剂，请勿使用不同试剂盒中相同名称的组分

      充分混匀对保证反应结果嘚精准性很重要，在加液后请轻轻晃动整个96孔板以保证混匀。

      本试剂盒很多操作在室温进行要求严格控制室温在25-28℃。温度低于25℃会导致*终检测到的吸光度显著下降

      洗涤过程非常重要，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大

      检测标准品和样品时建议设置重复孔，以确保检测结果的可信度

番茄斑萎病毒斑萎病毒(TSWV)Elisa试剂盒仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅内

      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作