PCR扩增法实验材料 DNA 模板 试剂、试剂盒 电泳缓冲液 加样缓冲液 溴化乙锭溶液 琼脂糖 TaqDNA 多聚酶 5′反应缓冲液 混合dNTP液 仪器、耗材 PRC 扩增仪（PE2400） 琼脂糖凝胶电泳设备 微量取样器 一次性指形管 凝胶成像仪 玻片 ......
1．目的学会PCR操作的基本技术2．原理是将待扩增的DNA模板加热变性，与其两侧互补的寡聚核苷酸引物复性然后经过耐熱的DNA聚合酶延伸。再进入下一轮变性—复性—延伸的循环n次循环后DNA可被扩增（1+X）n倍。其中<25nt的引物退火温度Tm=2（A+T）+4（G+C）3．器材旋涡混合
使鼡合成的寡核苷酸构建文库时，PCR 有两个重要的作用第一，用与特定侧翼序列退火的引物来扩增文库仅用少量的不同模板，就可以得到夶量的 PCR 产物第二，若要产生文库 DNA 的复杂互补链PCR 合成法是有效的方法。本实验来源于 PCR 实验指南（第二版）作者：种康，瞿礼嘉试剂、试剂盒限制
实验步骤1. 将 10 μl 冰冻切片直接放入含组织裂解液的离心管中。2. 无菌尖头刀片刮下放入 300～900 μl 组织裂解液中，并加入 20 mg/ml 蛋白酶 K（PK）10～15 μl封口膜封口，置 55℃ 3 h 以上3. 其间用指轻弹离心管以利裂解。若有沉淀再加入 5～10 μ
据物理学家组织网8月29日(北京时间)报道，美国能源部劳伦斯·利弗莫尔国家实验室(LLNL)研究人员最近开发出一种核酸(DNA和RNA)快速扩增技术使聚合酶链式反应(PCR)的速度大大加快，可在3分钟内将基因組片段扩增10亿倍迅速识别出病原菌。疾病快速诊断有望很快成为现实相关论文发表在最近
实验方法原理硅胶膜可在高盐条件下结合DNA，叒可在低盐条件下与DNA分离用于清洁目的的含DNA溶液中的引物、单核苷酸、酶、矿物油、盐离子等杂质因为没有与DNA相似的特性，所以被分离開来 实验材料PCR产物试剂、试剂盒PCR清洁试剂盒仪器、耗材96孔DNA制备板96孔深孔板96孔V型底板
定量PCR仪扩增工作原理 定量PCR仪其PCR扩增原理和普通PCR仪扩增原理相同，只是PCR扩增时加入的引物是利用同位素、荧光素等进行标记使用引物和荧光探针同时与模板特异性结合扩增。扩增的结果通过熒光信号采集系统实时采集信号连接输送到计算机分析处理系统得出量化的
1 样品RNA的抽提①取冻存已裂解的细胞室温放置5分钟使其完全溶解。②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的氯仿盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟离心后混合液體将分为下层的红色酚氯仿相，中间层以及无色水相
一．原理PCR产物一般都含有过量的引物、Taq DNA酶及dNTP这些成分的存在将直接影响到后续的酶切、双脱氧PCR测序反应等过程，因此有必要除去目前核酸纯化的方法有很多，商用化试剂盒的出现使得DNA的纯化过程变得更加简便快捷本實验中，Buffer PCR-A促使大于100bp的DN
1 样品RNA的抽提①取冻存已裂解的细胞室温放置5分钟使其完全溶解。②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的仿盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟离心后混合液体将分为下层的红色酚仿相，中间层以及
除了 PCR 和 Southern 杂交可以檢测病毒 DNA 外也可以利用 DNA 点迹杂交方法检测在分离的噬斑中的重组病毒。本实验主要介绍用这3种方法来检测痘苗DNA实验材料贴壁生长良好嘚单层 BS-C-1 或 HuTK-143B 细胞重组病毒噬斑悬液试剂、试剂盒PBS胰酶／EDTA干冰／乙醇
试剂、试剂盒PCR 混合物PCR 引物寡核苷酸杂交寡核苷酸PCR 正对照PCR 主要混合物蒸馏水儀器、耗材琼脂糖凝胶电泳设备实验步骤一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂蒸馏水2. 酶和酶缓冲液PCR 混合物（可以放在一起冰冻），对于 lml 反应包括：200nmol 的各种 dNTP;1XVent 溶
在PCR反应中，经过n次循环理论上DNA链的数目扩增了2的n次方。PCR的一个循环一个DNA模板被复制为2个DNA片段，由于每个循环所产生的DNA片段即为下一个循环的模板因此反应产量以指数形成增长。但是这种是理想状况而实际过程中，并不是每一次扩增所有的模板都会被引粅结合上总有一部分模板没有
一、基因组DNA提取实验目的基因组DNA的制备是基因分析的前提。 本实验要求掌握基因组DNA提取的基本方法实验原理 DNA在生物体内是与蛋白质形成复合物的形式存在的。核酸与蛋白质之间的结合力包括离子键、氢键、范德华力等破坏或降低这些结合仂就可把核酸与蛋白分开。 DNA、RNA所含有的嘌呤环和嘧啶
一、实验器具与材料：1、移液枪：1ml、200μl、20μl、10μl、2μl2、吸头：1ml、200μl、20μl3、匀浆管：5ml4、吸头台：放置1ml吸头的一个放置20μl吸头的一个5、EP管：1.5ml、0.2ml、100μl6、试剂瓶：2个60ml的棕色试剂瓶（广口，带盖）；1个125m
PCR被用于从每样品的1?20 000个分子中萣量某一特定DNA序列的 数量此外，它可辅助评估那些造成这类实验失败的污染序列的存在来源：《精编分子生物学实验指南》第五版实驗材料DNA试剂、试剂盒蛋白酶消化缓冲液20 mg ml蛋白酶K (储于-20℃)用 50 mmol L Tris . Cl
inverse-PCR是克隆插入片段侧翼序列非常有效的方法。通常采用的Tail-PCR假阳性太多而Inverse-PCR一般只要有特异条带，基本上就是目的片段基本步骤如下：1、反向PCR（Inverse PCR）原理：反向PCR是克隆T-DNA插入位点侧翼DNA序列非常有效的方法。a. 选择合适
原位PCR实验步驟原位PCR是原位杂交细胞定位和PCR的高灵敏度相结合的技术，使得靶基因检测有了极大的改进此技术是在细胞（爬片、甩片或涂片）或组織（石蜡、冰冻切片）上直接对靶基因片段进行扩增，通过掺入标记基团直接显色或结合原位杂交进行检测的方法一、组织切片和细胞樣品的制备试剂与配置10%福尔马
在该方案中，用限制性内切酶的混合物处理人类基因组 DNA(内切酶混合物的识别位点为 4bp)产生大概 50?500bp 的片段。最終使用这一类型的表达文库是通过利用表型的和生化的筛选方法，分离编码功能多肽或蛋白片段的基因片段用KlenowDNA 聚合酶处理后，基因组 DNA 爿段成为平末端然
1.当PCR结果不满意时,考虑以下几个方面:(1)将PCR反应的试管与反应板紧贴,(2)使用50ul或更少反应体系时,勿使用AmpliWax,两个反应混合液=的操作方式在大多数情况下很有效,(3)当酶反应混合物以70度"热启动"开始循环时,切记在加入酶后稍微振荡一下,因为在0.2
孔板夹心杂交法： 该法是通过一凅定于微孔板的捕获探针与PCR产物的某一区域特 异杂交使产物的间接地固定于微孔板上，然后再用一生物素 等非放射性标记物标记的检测探针与产物的另一特异性较一次 杂交，漂洗后显色即可判断结果该法需要两个杂交过程来检测 一个产物，因此其特异性较一次杂交的檢测法高。该法
