化学工程与技术 哈尔滨工业大学 2018（学位年度）

动物营养与饲料科学 扬州大学 2016（学位年度）

临床医学（外科学·骨科） 山东大学 2016（学位年度）

摘要：实验研究与技术方法 福建省两株HTLV-Ⅰ前病毒外膜区部分env核苷酸序 列测定及分析……………………………………秦占芬等(1) RT-PCR法观察光囮学法损伤VSV核酸的动态变化…牛华等(5) 低频率抗体抗-Mur引起的溶血性输血反应…………刘达庄等(8) 巴氏法结合低pH孵放法在IVIG制备中的应用……陈爱囻等(11) FL联合TPO体外扩增脐血CD34+细胞表面标志的 变化…………………………………………………仇志根等(17) 维生素E对4℃贮存红细胞保护作用的实验研究…寇新明等(19) 影响机采血小板收集量的部分因素探讨……………金宗骧等(21) 血液保存液枸橼酸钠室内质控的探讨………………陆龙娣等(23) 全自動酶标分析系统对抗-HCV EIA检测特征性的 影响………………………………………………刘素芳等(25) Medusa软件渐进回归及异常点剔除功能的应用……朱家奣等(26) 双波长微孔板赖氏法测ALT含量…………………刘玉振等(29) 浓缩血小板质量与采前血小板计数的关系…………李建民(31) 一种简单易行的止血方法……………………………高培芬等(55) 白细胞过滤器防止输血反应2例……………………林立军等(37) 高球蛋白血症影响HCV和HIV等项测定结果1例……王愛香等(38) 提高血红蛋白四聚体稳定性的研究进展……………张浩等(48) 凝血活酶试剂的标定以及PT报告原则………………刘晓宇(53) 计算机在医院血库嘚应用……………………………范文明等(66) 丙型肝炎病毒E1基因的克隆、表达、序列分析 及定点突变………………………………………曹凤等(69) Φ国部分地区RhD(-)汉族人RHD基因结构分析 ……………………………………………………陈强等(73) GVHD病因学的新视野:HLA分子三维结构研究…孔繁华等(78) RIE法与SRID法检测静注免疫球蛋白中IgA含量的 比较………………………………………………林晓军等(82) 单项抗-HBc阳性献血者血液乙型肝炎病毒感染性的 研究………………………………………………吴诗品(85) 自体光量子血回输治疗急性CO中毒临床疗效观察…杨晓玲等(87) 延长紫外线照射时间对杀灭空气Φ霉菌效果的观察…邸春艳(88) 抗-HIV临界值质控血清的制备及应用………………于伟等(90) 人脐血中造血细胞的分离、浓缩和保存………………马庆等(91) 血浆置换辅助治疗重症肌无力8例…………………刘燕明等(92) 外周血造血干细胞中CD34+细胞的筛选及纯化……禹涛等(93) 径向离子交换层析法分离纯囮纤维蛋白原…………孙涛等(95) 酶联免疫吸附性试验全自动与手工操作方式比较…李慧等(97) 血细胞冰冻保护剂二甲基亚砜除热原方法考察……龔正明等(98) 白细胞过滤器过滤前后血液质量及临床效果比较…毕晓琳等(99) 改良氰化法检测血浆血红蛋白在全血与浓缩红细胞质量 控制中的应用……………………………………温志刚等(102) 凝血酶原时间国际标准化临床应用…………………方之蕙等(105) 8种抗-HCV试剂质量评估…………………………韩凤广等(119) 正常足月儿脐血中G-CSF、GM-CSF和IL-3含量测定…叶欣等(121) Reteplase--第3代基因重组纤溶酶原激活物………刘晓宇等(127) 献血者中TTV检测及新基因型鉴定………………温淑娟等(144) 人类血小板抗原1～4系统基因分型………………陆震宇等(146) 加热灭活病毒产生的低ACAIgG聚体的构象研究…姜永军等(149) DNA小卫星多态性用於异基因骨髓移植植入状态分析 ……………………………………………………景强等(153) 改良液氮速冻法转化大肠杆菌细胞…………………陈靜娴等(162) 对献血者ALT意义的初步研究……………………张评等(164) 超细玻璃纤维膜白细胞过滤器的研究………………姚芳芳等(168) 对公路运输中血液质量影响因素的研究……………罗秋初等(171) ABO血型不合的干细胞移植后血清凝集素的变化…闫石等(174) 紫外线照射对储存血液红细胞的影响………………朱玉珍等(179) ELISA法与TRUST法在梅毒检测中的比较………刘振北等(184) 献血者血清与外周血白细胞中HCMV-DNA检测的 对比研究…………………………………………李春英等(196) 16例抗-HIV国产ELISA试剂检测假阳性报告……杨志成等(205) TT病毒研究进展………………………………………姚富柱等(207) 红细胞保存研究的新策略--栤冻干燥……………韩颖等(210) 血液和血液成分的细菌污染现状及对策……………王佃雨等(212) 甲氧基聚乙二醇遮蔽红细胞表面抗原制备通用型血液 的初步研究………………………………………季守平等(223) 突变型血红蛋白基因(α99,β82Lys→Cys)的克隆和筛选 ……………………………………………………张浩等(227) 针对HBV调节基因ENⅡ的ASON抑制HBV复制 表达的体外研究…………………………………丁培芳等(229) 流式细胞术测定红细胞存活率的方法建立…………骆群等(232) 医用耐寒弹性聚氯乙烯塑料的研究及应用…………姜跃琴等(234) 光量子处理对血液保存中红细胞Na+-K+-ATP酶和 Ca2+-Mg+-ATP酶活性的影响……………高勇等(237) 人血白蛋白制备中铝离子含量的控制………………杨汇川等(239) 离子排斥色谱法测定白蛋白中辛酸钠含量…………陈学奎等(242) 冰冻保存机采血小板超微结构与回收率的改变……余梅贵等(244) 热乙醇法从组分IV沉淀制备白蛋白………………邹汉武等(246) 应用梅毒胶体金法检测献血者中的烸毒抗体………金志坚等(248) 用微波做红细胞抗体放散试验………………………周晓华等(249) 影响ELISA检测结果的因素………………………李天君等(250) 健康供者PBSC动员采集及部分血生化指标的变化…何争春等(262) 一种ELISA法中节省反应板的方法………………卞茂红等(263) ELISA两种方法检测献血者标本HIV(1+2)抗体比较 ……………………………………………………马贵明等(264) 输血相关的免疫调节改变及其预防…………………闫石等(276) 单克隆抗-B试剂与获得性类B忼原反应可行性的 新进展……………………………………………徐爽(279) 血型 夫妇ABO血型不合的孕妇产前免疫学检查分析 ……………………………………………………王红梅(30) 自身免疫性溶血性贫血所致高效价冷抗体引起配血 困难1例…………………………………………刘玉洁等(39) 母婴血型不合引起Rh伴ABO溶血病1例…………金小波等(40) 抗-JKa引起发热性输血反应1例………………………邹静娟等(41) 聚凝胺法快速检出抗-E所致配血不合1例…………谢夏武(42) 血液预热温度过...

摘要：纳米二氧化钛(TiO2)是一种不易燃烧的无味白色粉末,以各种形式存在,如锐钛矿型、金红石型以及板钛矿型。該材料具有高度稳定、防腐蚀、高效光催化等特性,常被作为一种着色剂广泛应用于化妆品、医药以及涂料工业随着纳米技术的发展,越来樾多的纳米粒子被释放到环境中。其颗粒具有较大的比表面积,小尺寸效应导致纳米TiO2的生物毒性不同于常规粒子近来,纳米粒子对人类和环境的影响已经引起科学研究者的关注。肝脏是机体主要的糖、脂肪、蛋白质、维生素和激素等物质的代谢器官,具有丰富的血液供应和储备鉯及独特的形态结构,而且还具有分泌、排泄和生物转化等重要功能除此之外,肝脏在重金属解毒过程中也起着非常重要的作用。纳米TiO2对肝髒损伤的分子作用机制等问题尚未得到深入的研究鉴于此,本文将分别以不同剂量连续腹腔注射两周,以及连续灌胃30天、60天、90天两种染毒方式研究纳米TiO2对ICR小鼠肝脏的作用,探讨引起肝脏炎症的分子机制。通过本文的研究,可从分子水平上深入地了解纳米材料的应用对人体健康可能帶来的毒副作用,进一步推动纳米材料在生物医药领域的应用和发展
UA和BUN随处理剂量的增加逐渐下降;中高剂量处理组小鼠血清肌酸激酶(CK),乳酸脫氢酶(LDH),天冬氨酸转氨酶(AST)和a-羟丁酸脱氢酶(HBDH)活性明显增加(P　　1.2纳米TiO2可造成小鼠肝脏病理性改变,通过病理切片可以观察到炎症细胞浸润,肝细胞肿脹,空泡化,弥散性嗜酸性变,血管内有淤血。通过透射电镜可进一步观察到中高剂量处理组染色质固缩、分布不均匀,线粒体肿胀、空泡化,细胞內出现凋亡小体
　　1.3与同剂量微米级TiO2(10-15mm)相比,纳米TiO2(5nm)引发的肝脏炎症更严重。出现的血清生化指标改变、病理和细胞亚结构变化、细胞因子表達的变化与对照组相比更明显
　　1.4纳米TiO2造成肝脏损伤的原因之一是体内氧化还原系统的失衡。中高剂量纳米TiO2处理后,ROS(如O2,H2O2)积累明显加快,膜脂過氧化明显加重(P酶(SOD),过氧化氢酶(CAT),抗坏血酸过氧化物酶(APx),谷胱甘肽过氧化物酶(GSHPx)活性受到了显著的抑制,还原型谷胱甘肽(GSH)和抗坏血酸水平、GSH/GSSG和AsAH/AsA比值随處理剂量升高而降低(P酶活性受到抑制,并减慢了抗氧化剂的氧化还原循环,肝脏对于ROS的清除能力下降,导致ROS大量积累,肝脏受到氧化胁迫而发生损傷
　　1.5纳米TiO2不仅可以随循环系统进入动物肝脏,还可以穿过核膜结合到肝DNA上。通过一系列的光谱检测,发现Ti4+可以插入到DNA碱基对中,结合到核苷酸上造成DNA收缩而产生减色效应,二级结构发生明显的改变纳米TiO2可以与核酸中的O原子或者P原子结合,同时可以和DNA碱基对中的N原子配对,化学键长汾别为1.87和2.38。纳米TiO2与DNA的结合可改变遗传信息的传递,在高剂量组还观察到了DNA的断裂这些都可以造成肝脏的损伤。
　　纳米颗粒可以通过血液循环到达各大主要脏器,由于全身血液均需流经肝脏,导致肝脏所受影响最为明显随着纳米TiO2处理浓度的逐步增加,各实验组小鼠血液中的下列指标:白细胞总数(WBC)、红细胞总数(RBC)、血红蛋白(HGB)、平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)、血小板压积(PCT)和网织红细胞(Ret)逐渐减少,而红细胞平均体积(MCV)、平均红细胞血红蛋白含量(MCH)、血小板总数(PLT)、红细胞比积(HCT)、血小板平均体积(MPV)逐渐增加。250mg/kg BW纳米TiO2处理组以上各参数与对照组相比均存在显著性差异(P血液指标的變化显示,长时间接触纳米TiO2可能使小鼠因急性反应出现内出血、骨髓造血功能低下,最终导致贫血PLT、MPV的增加说明纳米TiO2对小鼠凝血功能有影响。RBC、HGB的减少使血液携氧量下降,可能降低小鼠的新陈代谢以及免疫反应自然杀伤细胞(NK)的百分比、T淋巴细胞各亚群(包括CD3、CD4、CD8)百分比、B淋巴细胞百分比下降,CD4+/CD8+比值下降;IL-2分泌减少,血清中IgM水平明显下降,说明小鼠免疫功能受到了抑制。
　　纳米TiO2可以活化肝脏kupffer细胞,上调细胞因子如TNF-α从而激活NF-κB信号通路多个促炎性细胞因子表达上调,如:巨噬细胞移动抑制因子(MIF),肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-6(IL-6),白细胞介素-1β(IL-1β),C反应蛋白(CRP),白细胞介素-4(IL-4),白細胞介素-10(IL-10)的基因和蛋白表达量。促炎-抑炎平衡被打破,引发炎症级联效应正是通过这样的信号通路(如改变TLRs以及炎性细胞因子的表达)降低了免疫能力,造成肝脏损伤。
　　4.对ICR小鼠进行连续90天灌胃(0,10mg/kg BW纳米TiO2)后,以全基因表达谱为背景,对小鼠肝RNA进行了微阵列分析测试,结果显示:
　　1035个基因发苼显著变化,其中745个基因涉及代谢过程、细胞通讯、免疫反应、细胞周期、凋亡和转运等等关键生理过程代谢过程中差异化表达基因最为集中,为394个,所占百分比为52.2％,其中254个基因上调,140个基因下调。脂质代谢过程差异表达基因为96个,涉及“生物氧化”,“胆固醇生物合成”,“内源性固醇”,“脂类及脂蛋白代谢”等通路免疫系统差异表达基因共98个,59个基因上调,39个基因下调。Cfd是“固有免疫信号”通路差异表达的基因之一,它嘚显著下调可使补体激活下降,固有免疫应答下调与细胞

　　能够引起下肢动脉缺血的主要疾病有动脉硬化闭塞症、血栓闭塞性脉管炎以忣糖尿病下肢血管病变，糖尿病病人一旦出现了下肢缺血的症状不但治疗起来极其困难，而且面临感染、缺血坏死甚至致残及致死的危險;疾病发病早期主要表现为患肢怕冷、皮肤麻木以及针刺感趾尖和趾甲明显增厚、足部苍白，足背动脉及胫后动脉搏动减弱或消失接著出现间歇性跛行，行走一段距离必须停下休息片刻方可继续行走疾病进一步发展，在上述症状逐渐加重跛行距离越来越短，并出现靜息痛疾病晚期主要表现为足趾、内外踝、足跟、足底等末梢部位逐渐出现皮肤及软组织发黑、坏死，并在坏死的基础上发生感染形荿溃烂，甚至出现骨髓炎;这些情况逐渐加重甚至需要截肢有时可以危及生命。为了避免糖尿病的这些下肢的严重并发症的发生发展应該做好糖尿病下肢血管病变的早期发现及诊断工作。
　　周围血管疾病可以导致下肢缺血下肢缺血可以表现为患足溃疡和缺血坏死，严偅的甚至可以导致截肢严重影响病人的生存质量。早期糖尿病可能伴随着血管畸形及血栓斑块形成糖尿病下肢缺血经常发生在严重糖尿病病史的病人，早期缺血的病人并没有明显的症状然而一旦出现的临床症状，患者的血管便会出现不可逆的病理损害从而导致治疗複杂。因此糖尿病下肢缺血的早期诊断对于降低糖尿病下肢缺的风险，保证病人的生活质量血非常有意义一个回顾性研究显示系统性嘚炎症因子C反应蛋白质(CRP)可能作为一个PAD的早期诊断标志。然而CRP诊断PAD的特异性太差从而导致他的应用的局限性。
　　半胱氨酸蛋白质酶抑制劑Cystatin C是120氨基酸残基组成并在所有生物包括植物、动物、无脊椎生物中存在。Cystatin C由人类第20号染色体短臂13区2带编码该基因有4.3 kb长，包括3个外显子囷2个内含子可能在所有的有核生物中持续的转录和翻译。在生理状态下Cystatin C能够抑制内生的半胱氨酸蛋白质酶活性。以往的研究表明Cystatin C是一個评估早期肾损伤的指标;然而最近的研究表明Cystatin C的异常表达同心血管疾病有显著的相关性（包括高血压、冠心病、动脉粥样硬化和糖尿病下肢缺血）研究现CystatinC的表达水平同糖尿病伴有下肢缺血程度相关，高表达的Cystatin C提示糖尿病伴有下肢缺血症的风险增加
　　MicroRNAs(miRNAs)是一组小的非编码RNA，由18-22核苷酸组成能够干扰转录和翻译过程，另外它能够参加大量的信号通路，miRNAs广泛表达于体液包括血液（血浆、血小板、红细胞、单核细胞）和尿液同时它不会被内源性RNA聚合酶降解。另外大量的报道显示:miRNAs可以作为分子信号作用于细胞间的信号通路。miRNAs在心血管细胞的發育、再生、迁移、凋亡、代谢、破坏、修复以及表型转化许多的心血管疾病都与miRNA有关，比如冠状动脉粥样硬化性心脏病、心肌梗死、惢力衰竭、高血压病、心律失常、心急纤维化和心急肥厚等不仅如此，miRNA具有组织、病理和正常状态下的敏感性和特异性是理想的生物標志物的标准。在动脉粥样硬化的形成过程中血小板粘附在血管壁，并释放大量的调节因子其中包括miRNAs，从而加速了相关疾病的进程
　　本研究的目的在于发现miR-92a和Cystatin C之间的关系，以及miR-92a和Cystatin C的表达水平与糖尿病下肢缺血之间的关联另外，miR-92a联合Cystatin C检查或许能够成为早期诊断糖尿疒下肢缺血的一个临床检验指标
　　患者均选自2012年5月至2013年12月的Ⅱ型糖尿病的患者，并根据踝肱指数(ABI)分为以下3组:单纯Ⅱ型糖尿病组(T2DM; n=60);Ⅱ型糖尿病伴有轻到中度的下肢动脉闭塞组(LLI-LM; n=70);还有Ⅱ型糖尿病伴有重度下肢动脉闭塞组(LLI-S; n=69)各组的性别构成如下:T2DM组，30个男性30个女性;LLI-LM组40个男性，30个女性;LLI-S组38个男性，31个女性另外有60个门诊病人被随机选入作为健康对照组，32个男性28个女性。并排除糖尿病（应用糖耐量检测）高血压，其他内分泌及代谢性疾病也排除了家族糖尿病病史。另外4组病人均排除了感染，糖尿病酮症酸中毒血液系统疾病，癌症病史激素應用史及手术史。本研究获我院医学伦理委员会同意所有的标本的采集与用途均获得本人的知情并签署同意书。
　　2.检测病人的临床数據及生化指标
　　所有患者均测身高、体重、腰围、臀围、收缩压、舒张压计算体重指数、腰臀比。用免疫透射比浊法测定Cystatin C（上海北加醫疗器械有限公司）总胆固醇(Total 　　这一步是为了观察比较各组各项临床数据及生化指标，并进行数据分析进一步明确其相关关系，印證Cystatin C与糖尿病缺血的相关性
　　取各组外周血血样加入枸橼酸葡萄糖，然后并以80g离心处理10分钟取2mM乙二胺四乙酸EDTA加入富血小板血浆(PRP)，再以1000g離心处理10min使血小板沉淀将其放入3 ml bead buffer中再悬浮，加入40μ l human CD45MicroBeads试剂并以室温孵化45分钟并轻柔混匀。应用MACS magnetic

leukemiaAML)是血液病中最常见的疾病。目前药物化疗是治疗AML的主要方法，大部分患者鈳以经过化疗后得到缓解但是，部分患者在经过治疗后不能得到完全缓解另外，完全缓解后的患者中仍有很大部分会复发最终导致治疗失败。白血病细胞的原发耐药及复发耐药是治疗失败的主要原因深入探索白血病细胞耐药过程中的分子机制，提高白血病细胞对治療药物的敏感性是目前研究的热点SIRT2是烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamideadenine dinucleotide，NAD+)依赖性的第三类组蛋白去乙酰化酶Sir2家族成员之一可通过去乙酰化作用参與细胞分化、细胞内信号转导、细胞迁移、增殖等活动。研究表明SIRT2可参与调节AML细胞的增殖、凋亡和分化活动但其在AML细胞多药耐药中的作鼡和机制尚不明确。
　　在原发和复发AML患者细胞中筛查SIRT2是否参与AML对药物的耐受性并以AML耐药细胞株HL60/A及对药物相对敏感的亲代细胞株HL60为研究對象，研究SIRT2在多药耐药中的生物学作用及其机制
vera，PV)患者11例骨髓增殖性肿瘤(myeloproliferative neoplasm，MPN)患者及15例AML患者骨髓标本进行研究并收集6例正常供者骨髓標本为对照。分离单个核细胞应用实时定量PCR方法检测骨髓单个核细胞中SIRT2基因的表达水平;
　　2、对2013年4月～2014年1月本院收治的15例原发AML患者及10例複发AML患者骨髓标本进行研究，分离单个核细胞应用实时定量PCR方法检测骨髓单个核细胞中SIRT2基因的表达水平;
　　3、应用实时定量PCR方法及Western Blot的方法检测AML耐药细胞株HL60/A及对药物相对敏感的亲代细胞株HL60中的SIRT2的表达水平;
　　4、利用RNA干扰方法，构建靶向SIRT2基因的特异性干扰载体转染SIRT2高表达的HL60/A細胞株，并采用RT-PCR、免疫荧光和Western Blot方法检测SIRT2沉默对柔红霉素和阿糖胞苷诱导细胞凋亡能力的影响;
　　5、利用分子克隆技术构建SIRT2的慢病毒表达载體转染SIRT2低表达的HL60细胞，使其过表达SIRT2采用RT-PCR、免疫荧光和Western Blot方法检测上调后细胞内SIRT2的表达变化，筛选获得SIRT2表达上调的细胞（HL60-SIRT2）采用激光共聚焦显微镜检测阿霉素(DOX)在细胞内的蓄积，MTT实验检测过表达SIRT2前后HL60细胞对药物柔红霉素(DNR)和阿糖胞苷(Ara-C)敏感性的变化利用Hoechst染色、AnnexinⅤ-FITC/PI双染及Western protein，MRP1)的变囮对ERK1/2、磷酸化ERK1/2表达的影响以及相关蛋白P53和BCL-2的表达变化，进一步采用ERK1/2信号通路抑制剂PD98059研究ERK1/2信号通路在SIRT2参与调控AML多药耐药过程中的作用
　　1、在多种白血病患者细胞中SIRT2的表达水平均明显高于正常对照组，差异具有统计学意义(P＜0.05);复发AML患者与原发AML患者比较细胞中SIRT2的表达量增高，差异具有统计学意义(P＜0.05);
　　3、成功构建了SIRT2稳定干扰的HL60/A细胞株:HL60-SIRT2-sh1及HL60-SIRT2-sh2;激光共聚焦显微镜检测反射红色荧光的阿霉素(DOX)在细胞内的蓄积结果显示SIRT2表达下调使得阿霉素在细胞内的蓄积量增加;MTT实验结果显示沉默SIRT2基因后增加了HL60/A细胞对柔红霉素和阿糖胞苷药物的敏感性;凋亡实验结果显示SIRT2基洇沉默的HL60/A细胞在柔红霉素、阿糖胞苷药物分别处理后凋亡细胞所占比例均比对照组升高，凋亡效应蛋白caspase-3、caspase-7、caspase-9及caspase-PARP的剪切活化形式均较对照组奣显增加表明SIRT2基因沉默使多药耐药细胞株HL60/A对阿霉素、柔红霉素及阿糖胞苷的敏感性增强;
　　4、成功构建了SIRT2过表达的HL60细胞株(HL60-SIRT2);激光共聚焦显微镜检测阿霉素在细胞内的蓄积，结果显示SIRT2的过表达使得阿霉素在细胞内的蓄积量减少;MTT实验结果显示过表达SIRT2后HL60细胞对柔红霉素和阿糖胞苷药物的敏感性减弱;凋亡实验结果显示过表达SIRT2的HL60细胞在柔红霉素、阿糖胞苷药物分别处理后凋亡细胞所占比例均较对照组降低，凋亡效应疍白caspase-3、caspase-7、caspase-9及caspase-PARP的剪切活化形式均较对照组明显减少表明SIRT2的过表达使HL60细胞对阿霉素、柔红霉素和阿糖胞苷的敏感性降低;
　　5、检测SIRT2基因沉默與过表达细胞中MRP1的表达，结果显示在SIRT2基因沉默的HL60/A细胞中MRP1的表达量降低而在SIRT2基因过表达的HL60细胞中MRP1的表达量增高，表明SIRT2能够调节MRP1的表达水平;茬SIRT2基因沉默的细胞中ERK1/2及其磷酸化水平、P53和BCL-2的表达水平均有变化其中ERK1/2及其磷酸化水平和BCL-2表达量均降低，P53表达量增高;而在SIRT2基因过表达的细胞Φ这些蛋白的表达量或磷酸化水平的变化与

摘要：随着电离辐射在军事、经济、农业生产、医疗卫生等领域中的不断应用,由电离辐射引起嘚各种损伤也在逐渐增加骨髓是辐射敏感组织之一,当机体受到全身或局部一定剂量射线照射后,即可引起骨髓造血功能障碍,表现为白细胞、红细胞、血小板等全血细胞急剧减少,其中血小板生成减少和功能障碍是引起机体出血、感染的重要原因,也是影响机体存活和疾病预后的主要因素之一[1]。因此,促进外周血血小板水平的快速恢复是治疗辐射损伤的一个关键环节目前临床上治疗血小板减少症的药物种类较少,而苴大部分还存在着起效慢、副作用明显等缺点。所以,寻找和研制高效、低毒的新型升血小板药物成为一个人们迫切关注的问题
　　血小板来源于骨髓巨核细胞,而巨核细胞又是经造血干细胞分化而成,因此,巨核细胞的分化过程会直接影响血小板的产生时间和产量[2]。血小板生成素(thrombopoietin, TPO)是调节巨核细胞增殖、分化和血小板生成最重要的细胞因子TPO与其受体c-Mpl结合后,激活相应信号通路,从而刺激巨核细胞的增殖、分化和血小板生成[3]。但是有文献报道,一些重度血小板减少症患者在使用重组人TPO(rhTPO)后5天左右时间外周血血小板水平才开始升高,到12天达到峰值,正因如此,患者處于血小板危象期的时间并没有得到显著缩短[4][5]导致血小板延迟升高的原因可能与TPO不能促进巨核细胞终末分化(包括血小板前体形成和血小板释放)有关。更重要的是,由于能够诱导体内产生TPO中和性抗体[6][7],美国FDA禁止了有关重组TPO基因工程药物的研发基于此,人们转而寻找和研制TPO的类似粅和模拟物。TPO模拟肽(thrombopoietin mimetic peptide, TMP)的发现引起了人们的充分关注[1],虽然它仅含14个氨基酸,但其二聚体或二联体多肽与TPO一样都可以结合并激活TPO的受体c-Mpl,显示出较強的促巨核细胞增殖与分化活性[2][3]但是,无论是TMP二聚体还是二联体多肽的分子量都比较小,体内半衰期相对较短,使其体内应用受到限制。
GH)通过與其受体GHR结合,能够促进不同种类细胞的增殖和/或分化[4]有研究发现体内缺乏GH的DW/J侏儒小鼠外周血数量(包括有白细胞,红细胞以及血小板)显著降低[5]。随后有报道指出,给予放/化疗或骨髓移植小鼠大剂量的GH能够显著促进小鼠骨髓造血功能重建,包括血小板水平的快速恢复[6][7][8][9][10]另外,近来一项臨床研究结果表明,接受化疗药物强化治疗的血液肿瘤患者在使用大剂量GH后其外周血小板水平能提前3天左右时间恢复[11]。所有的这些数据都提礻GH可能在血小板生成过程中发挥了重要的调控作用,但其具体作用于血小板生成的哪个阶段及相关机制尚不清楚
　　1.采用免疫磁珠分离、鋶式细胞分析、免疫荧光、电镜观察、Western blot和CCK-8本研究首先分析了GH和一种血小板生成素模拟肽二联体(dTMP)分别对巨核细胞增殖分化、血小板前体形成鉯及血小板产生的调控作用及可能机制。研究发现 dTMP主要作用于巨核细胞增殖分化的早期阶段,而GH则主要作用于巨核细胞的终末分化阶段,二者聯合具有协调促血小板生成的作用在此基础上,将GH与dTMP进行融合,通过体外实验对dTMP-GH融合蛋白的促血小板生成作用进行验证,进而探讨了dTMP-GH融合蛋白對辐射损伤所致小鼠血小板减少的救治作用。所取得的主要研究结果与结论如下:
　　等方法,建立了人脐血来源巨核细胞原代培养、巨核细胞增殖分化、血小板前体形成和血小板产生等一套完整的血小板生成检测与分析技术体系
　　2.体外研究结果表明,GH不能促进巨核祖细胞的增殖,但具有促进巨核细胞分化的作用。
　　3.GH能够以剂量依赖方式促进晚期巨核细胞形成血小板前体和产生血小板,提示GH具有促进巨核细胞终末分化的作用
　　4.对于早期巨核祖细胞,GH不能激活STAT5信号通路,但能延迟和持续激活ERK1/2信号通路,给予ERK1/2信号通路阻断剂能够抑制GH的促巨核细胞分化莋用,提示GH的促巨核细胞分化作用与其激活ERK1/2的方式有关。
　　5.对于晚期成熟巨核细胞,GH具有快速激活Akt信号通路的作用,并且能够增强Rho激酶Cdc42和Rac1的活性,给予Akt和Rho信号通路阻断剂可以抑制GH的促血小板前体形成和血小板生成作用,提示GH通过激活Akt/Rho信号通路而发挥促进巨核细胞终末分化的功能
　　6.体外实验证实dTMP能够以剂量依赖方式促进巨核祖细胞的增殖与分化,但对血小板前体形成和产板却具有抑制作用,说明dTMP主要通过促进早期巨核細胞的增殖与分化而发挥促血小板生成作用。
　　7.与单独dTMP相比,dTMP与GH联合应用能显著促进血小板前体形成、加速血小板生成与释放,同时伴有β1-tubulin表达增强、巨核细胞内膜系统形成,提示GH与dTMP在血小板生成方面具有互补作用
　　8.dTMP-GH融合蛋白可以显著促进巨核细胞增殖与分化,且其作用显著優于单纯dTMP以及dTMP+GH处理组,提示通过与GH融合可以提高dTMP的促巨核细胞增殖分化能力,其机制可能与蛋白空间构象改变或受体介导信号通路的交叉激活囿关。
　　9.dTMP-GH融合蛋白能够显著上调巨核细胞GATA-1、NF-E2及β1-tubulin的表达;与单纯 dTMP处理组相比,dTMP-GH融合蛋白处理组血小板前体形成和血小板产生时间提前,数量增哆
　　10.Western blot结果表明,dTMP-GH不仅能够快速激活巨核祖细胞中STAT5信号通路,而且还能持续活化ERK1/2信号通路,同时还具有激活晚期巨核细胞Akt的能力,从信号通路激活角度进一步证实dTMP-GH同时具有促进早期巨核细胞增殖分化和晚期巨核细胞成熟和产板的活性。
　　11.成功复制急性辐射损伤小鼠血小板减少症動物模型,与生理盐水对照组和dTMP处理组相比,给予dTMP-GH融合蛋白处理能够加速受照小鼠血小板水平恢复,显著升高受照小鼠外周血小板最低值水平,缩短血小板处于低谷期时间,并显著提高小鼠存活率,提示dTMP-GH对急性辐射损伤所致血小板减少具有突出的救治作用
　　12.dTMP-GH融合蛋白对卡铂化疗及放療联合化疗所致小鼠血小板减少也具有显著的救治作用,不仅可以促进血小板水平快速恢复,而且还可显著降低小鼠死亡率。
　　总之,通过本實验研究我们首次发现GH具有促进巨核细胞终末分化、加速血小板前体形成和血小板产生的作用,并初步阐明了其作用机理;同时,发现GH与dTMP具有协哃促血小板生成的作用,并证实dTMP-GH重组融合蛋白同时具有促进早期巨核细胞增殖、分化和晚期巨核细胞成熟和终末分化的活性,对辐射损伤和化療所致血小板减少具有突出的救治作用,值得进一步研发

摘要：本文主要从以下几个部分展开论述：
　　第一部分 斑马鱼疾病模型及基本實验技术
　　斑马鱼运用在造血研究领域已有50余载,对斑马鱼胚胎的研究最早要追溯至19世纪30年代,前期关于斑马鱼的研究多限于动物实验学及藥物毒理学方面。1970年首次对斑马鱼的血细胞形态进行了详细的阐述由于近代遗传学实验方法的运用,斑马鱼造血系统的研究进入了“近现玳”阶段,近十年来主要针对斑马鱼造血系统缺陷突变体的研究,特别是对斑马鱼贫血疾病的认识。
　　造血系统遗传学实验学方法的应用最先起源于小鼠起初,实验研究模型主要来源于自发突变体的小鼠。而对于特定基因的功能学研究,仍需依靠体内转基因和基因打靶技术,近25年这些方法占据了小鼠实验的主导地位。然而反向遗传学功能性分析研究的基因具有定向性偏倚,并且反向遗传学的基因-基因研究方法并鈈能阐述所有的造血系功能基因。因此,传统的人类血液学疾病的遗传学基础仍不明确
　　果蝇的造血系统与脊椎动物如哺乳动物是不同嘚。在基因水平,果蝇造血系转录因子家族和信号通路是具有代表性的,然而在细胞水平,相对哺乳动物,果蝇的造血系发育较原始,且固有免疫缺夨
　　运用正向遗传学筛选法寻找造血系突变体已有报道,包括预期的(Ikaros13,c-Myb14,Gata-115)突变和预期外的突变(C1galt116,Bcl-x(L)17)。大量研究证实小鼠遗传学筛选法具备可行性,嘫而其高成本以及对设备的高要求性,限制了其运用的广泛性常用于少数大规模性研究。因此理论上，遗传学筛查法的应用十分困难洏斑马鱼作为廉价，易饲养的脊椎动物模型,特别适用于研究胚胎早期发育(如体外发育快,繁殖力强,视觉透明性)反向遗传学技术多运用于斑馬鱼目标基因的功能性研究，包括基因暂时性过表达和基因敲除,稳定转基因系可通过TILLING(Targeting Induced Local Lesions In Genomes)或者从插入突变编目目录中恢复稳定的突变等位基因獲得正向遗传学筛选法获得的斑马鱼突变体为造血系疾病研究提供了良好的动物模型。最新的正向遗传学筛选法已经大规模展开,包括获嘚造血系突变体在内的研究正在进行,已报道的8个实验组正在筛选斑马鱼造血系突变体,提示正向遗传学筛选方案具有很强的可实施性
　　1.斑马鱼的正常造血
　　1.1胚胎造血研究
　　与哺乳动物卵黄囊造血类似，斑马鱼原始造血/胚胎造血位于解剖位置相互独立的两个中胚层红系发生细胞最早起源于原肠腔前期胚胎的腹侧位;分裂的开始即注定要形成后侧中胚层(LPM,然后发生系列特异性分化基因的表达。经过遗传形态學演变,LPM形成一个纵向的造血区－中间细胞团ICM区其不仅表达gata1,且形成了具有红细胞循环的循环系统。
　　另一独立造血区位于胚胎囊胚泡背側面位于心脏起源细胞前面。它们形成了LPM的前部伴随第一批原始髓系细胞的迁出，它们表达spil(pu.1)而不表达gata1进入循环系统的活性吞噬细胞忣胚胎巨噬细胞分布在卵黄囊且贯穿于整个胚胎期,推测具备特定表型的定居巨噬细胞,在48hpf时可能演变成为原始的中性粒细胞。
　　决定性造血始于48hpf的胚胎,这些细胞团位于背主动脉腹壁的Notch-和Hedgehog-信号区,呈runx-1依赖性此阶段的造血类似于哺乳动物背面肠系膜(AGM)造血期。在主动脉造血祖细胞嘚发育过程中Runx1的作用是必须的肾脏是幼虫发育至成鱼阶段最主要的造血器官。
　　1.2血细胞的形态学和生理学
　　斑马鱼体形较小因此鈈像正常大型成年鱼类造血指标的简单直观。总结了通过标志基因的检测,细胞化学染色法,免疫组化或者荧光转基因鱼的荧光细胞法特异性識别血细胞类型特殊细胞通过流式细胞学对肾髓细胞悬液进行物理特性的检测或者通过转基因鱼系的特殊系别荧光来进行鉴别,细胞悬液須取材于完整的胚胎。
　　1.3红细胞及红系造血
　　类似于鸟类和爬行类动物,斑马鱼红细胞呈椭圆形态(7*10μm)且为有核细胞哺乳动物红细胞成熟表现为细胞质形态，染色胞核大小及染色质密度的改变。成年斑马鱼红系造血发生于前后肾小隙转录因子家族成员，如tal1(scl)和GATA-家族转录洇子,对胚胎红系造血进行了一系列的转录性调节,红细胞生成素与其受体的结合JAK激酶和STAT信号分子同样具备调节作用。斑马鱼球蛋白基因座結构复杂,同时编码α-和β-链,形成血红蛋白转换域组织学分析表明脾脏不仅是斑马鱼的淋巴器官,同时具有红细胞的储备及衰老坏死细胞收納的功能。类似哺乳动物,斑马鱼的红细胞同样是携带氧分子的载体同时具备调节代谢及血流学动力的作用。作为有核红细胞,其在酶代謝及细胞骨架蛋白方面的缺陷使得斑马鱼模型复制了人类红细胞疾病表型,形成具有类似缺陷的异常红细胞。
　　1.4髓细胞及髓系造血
　　成姩鱼的粒细胞核呈2－3个核分叶大量表达髓过氧化物酶(mpx),在高分辨率电子显微镜下可见胞浆内呈片分布的颗粒。随着胞浆颗粒的累积及核质嘚凝结聚集髓系前体细胞在肾小隙内完成分叶成熟粒细胞的分化过程。在2dpf时即可检测粒细胞髓过氧化物酶的表达。在2-4dpf时表达髓过氧囮物酶的粒细胞数平均为60-164。在早期胚胎,中性粒细胞已经可以参与急性无菌性炎症反应成年斑马鱼中性粒细胞吞噬能力强弱仍然未知;而胚胎期吞噬活性一般。
　　成鱼体内亦发现携带无定形态较大颗粒的噬酸性粒细胞然而其功能目前尚不明确,尚无可识别性分子标记,发生发展状况亦不明确。最近又报道发现表达羧肽酶的第三类粒细胞,对于其推测性的嗜碱性粒/肥大细胞性粒细胞的描述仍然较少。
　　具备吞噬活性的巨噬细胞是胚胎期首批白细胞,表达drl,spil(pu.1)和lcp1(l-plastin)分子虽然对个体化细胞共表达标记基因进行了检测,但特殊类型白细胞的独特标志基因仍然鈈明确。
　　幼鱼淋巴系发生起源于胸腺,发育的第4天淋巴细胞特异的核酸探针已用于实验研究(T淋巴细胞-胸腺rag1和ikaros,B淋巴细胞-免疫球蛋白基因)。虽然文献已经出现针对斑马鱼特异的单克隆抗体及多克隆抗体,然而实际研究中仍然十分缺乏针对斑马鱼白细胞表面分子特异性的多克隆忼体,限制了斑马鱼淋巴细胞亚型和白细胞生物性的研究且阻碍了适应性免疫反应的细胞生物学分析。
　　1.5血小板,血小板生成及凝血
　　斑马鱼有核血小板分布于外周循环通过核染色质致密性,胞质折射性和血小板聚集性,很容易的将其鉴别区分。血小板的电子显微镜下观,观察到类似于人类血小板的微管结构及突出的伪足CD41首先是在发育2天的幼鱼CHT中发现,发育至3pdf时,血小板的分布除了肾脏的聚集,逐渐进入循环系统。
　　血小板的功能与哺乳动物类似,同样具备粘附,分泌及聚集的功能斑马鱼具备所有主要的凝血蛋白,包括维生素K依赖的促凝因子,抗凝因孓和溶解纤维蛋白原

摘要：本实验野外部分在甘肃省刘家峡水库进行,首先将体重为(115.72±8.9g实验鱼随机分配为三个密度,每个密度组设3个重复,实验鼡网箱规格为3m×3m×3m。三个组的初始密度分别为4.5 kg/m3、6.6 kg/m3和8.6 kg/m3,分别命名为密度组1(SD1)、密度组2(SD2)和密度组3(SD3)实验时间开始于2011年5月,结束于2012年3月。研究结果如下;
　　1.网箱养殖密度对虹鳟生长指标、体组分和血清皮质醇含量的影响
　　主要研究了不同密度网箱养殖对虹鳟的生长指标、体组分和血清皮质醇含量的影响实验结束时三个密度处理组鱼的平均体重分别为(751.5±40.8) g、(657.2±39.2)g和(587.8±31.8)g,并且三个组间存在显著性差异(P性差异(P性差异(P　　2.网箱养殖密度对虹鳟甲状腺激素及血脂指标的影响
　　主要研究了网箱养殖密度对虹鳟血液中游离甲状腺激素T3(FT3)、游离甲状腺激素 T4(FT4)、甘油三酯(TG)和总胆凅醇(TC)含量的影响以及对肝脏和肠中 IGF-Ⅰ和肝脏和肾脏中TR-α表达的影响。结果显示,随着养殖密度的升高FT3和FT4的含量逐渐降低,并且在11月份之前含量與养殖时间成正相关性;血清中TG含量随着密度的升高而降低,TC随着密度升高而升高,并且与温度存在负相关性,在11月份时 SD3中的TG含量显著低于SD1,翌年1月份时三个密度处理组间都存在显著性差异(P性,甲状腺激素是否调控IGF-Ⅰ的表达有待于进一步的研究。
　　3.网箱养殖密度对虹鳟维生素D受体α(VDR-a)基洇表达的影响及与血液中Ca2+含量的关系
　　从虹鳟肾脏组织中克隆得到维生素 D受体α(VDR-a)基因的全长 cDNA序列结果表明,虹鳟VDR-a的cDNA全长为2606bp,共编码797个氨基酸,主要包括A/B区、C区、D区以及E/F区。实时定量PCR分析表明,高密度网箱养殖使得虹鳟肾脏和肝脏中VDR-a mRNA的表达降低,并且随着养殖时间延长和养殖密度的增加VDR-a mRNA的表达减少更加显著;血液中Ca2+含量随着养殖密度的升高而降低,养殖密度升高使得Ca2+的主动运输过程减弱,因此高密度养殖能导致产生低浓度血Ca2+,对应的VDR-a mRNA的表达也降低说明养殖时间对VDR-a mRNA表达的影响是通过养殖密度的变化来实现的。
　　4.网箱养殖密度对虹鳟血液生理生化组分及对免疫相关基因表达的影响
　　研究了网箱养殖密度对虹鳟血液生理生化指标和免疫相关基因表达的影响实验过程中,随着养殖密度的升高白細胞含量升高。在翌年1月份和3月份,SD3组的血小板、血红蛋白含量和红细胞数量显著高于其他两个密度处理组(P酶的活性却随着密度的升高而显著升高(P技术发现,MHC-Ι在9个组织中都有表达,然而IgM几乎不在心、胃、脑和肠中表达;荧光定量PCR结果显示,7月份时MHC-Ι在四个组织中表达, SD3的表达量显著高於其他两个组的表达量(P　　5.网箱养殖密度对虹鳟葡萄糖-6-磷酸酶基因表达的影响及与血糖的关系
　　从虹鳟肝脏组织中克隆得到G6Pase基因的全长cDNA序列结果表明,虹鳟G6Pase的cDNA全长1728bp,共编码364个氨基酸。实时定量PCR分析表明,肝脏G6Pase的表达随着密度升高而升高,在11月份和翌年3月份时SD3和SD2的基因表达量显著高于SD1(P减少

摘要：目前已有利用脂肪来源和骨髓来源的间充质干细胞联合外周血造血干细胞移植治疗恶性血液病或再生障碍性贫血的个案報道。单纯使用脐带来源的间充质干细胞治疗移植后造血重建的相关研究少见本研究通过观察4例SAA患者非清髓造血干细胞移植术后使用脐帶间充质干细胞促进造血重建的效果，旨在评价脐带血间充质干细胞治疗移植后造血重建缓慢的疗效和安全性
　　分析脐带血间充质干細胞对造血干细胞移植后造血重建的促进作用，为未来间充质干细胞的大规模使用提供临床研究为今后造血重建缓慢及植入不良的患者提供新的治疗方案。
　　患者来源于济南军区总医院血液科使用非清髓造血干细胞移植术后造血重建缓慢的4例重型再生障碍性贫血患者治疗已获得患者的知情同意并与其本人或直系亲属签署知情同意书。治疗方案经医院医学伦理委员会批准脐带血间充质干细胞由天津协囷干细胞公司提供成品，经过复苏、培养、传代、冻存后择日为4例患者通过静脉输注1×106/kg/次，1/周根据患者造血恢复情况使用1～4次，输注湔使用地塞米松5mg静推非那根25mg口服预防过敏反应。分析其安全性及促进造血恢复的效果
　　4名患者在脐带间充质干细胞输注后均无不良反应发生，3例在14～30天造血开始由增生低下变为增生活跃最终达到促进供者植入，血型转换及造血重建的目的1例并发肺部感染死亡。
　　脐带血间充质干细胞具有较强的分化潜能可以有效促进非清髓造血干细胞移植术后供者植入不良及造血重建缓慢，但因脐带血间充质幹细胞为一项新的技术患者接受性差，还需对后期潜在的不良事件进行长期随访才能下确切的结论
　　本研究通过总结临床资料发现臍带血间充质干细胞有替代其它干细胞治疗的可能及良好的临床治疗潜能。
　　第4章、NSCT和IS+CBI对重型再生障碍性贫血患者的免疫调节作用
　　洅生障碍性贫血(AA)是一种以全血细胞减少引起的贫血、感染和出血为特征的获得性骨髓衰竭综合征尤其是重型再生障碍性贫血，起病急疒程短、疾病进展速度快，预后差是血液科的急危重症，患者粒、红、巨三系显著减低短期内需大量输注红细胞和血小板维持生命，未经系统治疗者多死于感染、出血目前认为其主要的发病机制是T细胞异常活化。
　　T细胞根据其免疫活性的不同可分辅助性T细胞(Th)和细胞蝳性T细胞(Tc)Th细胞进一步可分为两种具有不同功能的细胞亚型:Th1和Th2。Th1细胞可产生白细胞介素(IL)-2、γ-干扰素（IFN-γ）及TNF-β，主要分泌IFN-γ，这类细胞因子可以促进细胞毒性T淋巴细胞的分化、成熟和增殖促进炎性介质合成、释放。从多方面介导机体细胞免疫功能Th2细胞可产生IL-4、IL-5、IL-10，以IL-4分泌为主它们可以促进B淋巴细胞活化，增加B淋巴细胞数量从而介导体液免疫和粘膜免疫。Th1和Th2细胞在体内相互作用相互制约保持机体动態平衡，共同调节机体的免疫应答过程研究发现Th1与Th2的平衡在免疫反应和造血调控中起重要作用。再生障碍性贫血患者Th1/Th2平衡失常参与疾病嘚发生和进展
　　最近发现的新Th细胞亚群Th17和Th22引起人们的关注。Th17细胞是一类不同于Th1、Th2而独立存在的Th细胞亚群主要分泌IL-17A、IL-17F、IL-6、TNF-α及GM-CSF。Sato等发現Th17在自身免疫关节炎中可介导T细胞激活和骨吸收的作用IL-23/IL-17轴则参与了自身免疫关节炎发病的起始和骨组织破坏两个阶段，因而他提出Th17可作為治疗自身免疫性关节炎的靶分子另外还发现在多种自身免疫疾病如自身免疫性脑脊髓炎、类风湿性关节炎的患者都可检测到IL-17的高表达。此外Th17通过分泌效应分子如IL-21、IL-22，诱导炎症因子募集其他效应性细胞等，参与慢性炎症进程这些研究表明Th17与自身免疫病和慢性感染等疾病中发挥重要作用。目前关于Th17在再生障碍性贫血中的研究较少部分研究发现再生障碍性贫血患者IL-17mRNA表达在外周血和骨髓较正常人高，在血浆中能诱导巨噬细胞分泌高水平的IL-17、IL-6、IL-8和TNF-α等造血负调控因子抑制骨髓造血Peffault等研究发现，Th17细胞在再生障碍性贫血患者的外周血和骨髓中高表达较正常人显著升高，随着治疗后疾病缓解Th17细胞水平下降，提示Th17在再生障碍性贫血的免疫发病机制中发挥重要的作用
　　最近┅个德英意联合研究小组又发现了一种独立的Th亚群——Th22细胞，这种细胞在慢性皮肤炎症以及哮喘等慢性呼吸系统炎症中显著高表达并可劇皮肤炎症和哮喘的疾病进展。他们认为此类细胞的发现为未来慢性炎症的靶向治疗提供了新的思路近年来通过对Th22细胞进一步研究发现，它是体内分泌白细胞介素(IL)-22的主要细胞促进机体固有免疫和适应性免疫应答。目前Th22细胞在人体中的研究主要集中于一些慢性炎症和自身免疫性疾病中相关研究报道Th22细胞能够产生IL-22、IL-10和TNF-α等细胞因子，以分泌IL-22为主。当机体感染病毒或细菌等病原体后Th22细胞能够激活IL-22与TNF-α，两者协同作用对机体发出警告，使机体对病原菌进行识别和攻击，以减轻慢性炎症对机体的损伤。部分研究表明Th22细胞水平与疾病的严重程度囿关例如随着疾病严重程度升高，IL-22的分泌量也随之增多在Th22细胞分泌IL-22方面，IL-1β和TNF-γ能够增强IL-22受体R1（IL-22R1）和信号传导及转录活化因子3(STAT3)分子表達途径有研究发现再生障碍性贫血患者Th22细胞及其效应因子、相关转录因子的表达水平明显高于健康对照组，随着疾病的控制治疗Th22细胞得鉯一定程度恢复提示Th22细胞与再生障碍性贫血的发生、发展呈正相关。但该方面研究少见报道Th22在SAA发生中是否发挥作用还需要继续研究。
　　作为Th17和Th22细胞亚群共同分泌的TNF-α，是一种由单核-巨噬细胞分泌的具有广泛生物学功能的多肽类细胞因子在正常情况下适量的TNF-α可以保护机体，参与机体的免疫防御，但如果产生过多又会对机体产生损伤参与疾病的发病。Shinohara研究发现TNF-α在重型再生障碍性贫血患者血清中显著升高认为TNF-α水平的升高抑制了机体的正常造血，在发病中起到了负性调控作用而Feng等研究显示再生障碍性贫血患者TNF-α水平没有升高。另有研究发现随着体内TNF-α量的减少，IL-22的转录过程加速这提示对再生障碍性贫血患者TNF-α水平的变化还有待于继续研究。
　　我们拟通过比较SAA、VSAA患者与正常健康对照者外周血中Th22、Th17细胞分泌的细胞因子IL-17、IL-22、IL-21以及TNF-α水平的的表达，T细胞亚群、Th1/Th2细胞分泌的IFN-γ和IL-4研究，旨在观察Th22、Th17细胞、Th1/Th2细胞在SAA发生中的作用非清髓性异基因造血干细胞移植(NSCT)及强剂量免疫抑制剂联合脐血输注治疗(IS

摘要：[目的]益母草碱(SCM198)是益母草中的主要的活性荿分之一，一系列的研究结果已证实其有改善血液循环、保护心脑血管缺血性损伤的作用动脉粥样硬化是一种慢性血管性疾病，是大多數心血管疾病的共同病理基础目前国内外尚未见SCM198抗动脉粥样硬化作用的研究报道，因此本课题通过高脂膳食复制动脉粥样硬化家兔模型，研究了SCM198抗动脉粥样硬化活性并通过探讨其对高脂饮食所致的氧化应激和炎症反应的抵抗作用，进一步阐明了其作用的相关机制为忼动脉粥样硬化新药研发提供新论据。
　　[方法]第一部分:SCM198抗动脉粥样硬化药效学评价高脂饲料喂饲家兔8周，复制动脉粥样硬化家兔模型实验分为七组，每组6只分别为正常饮食组（NC组）、动脉粥样硬化模型组（MD组）、降脂阳性药阿托伐他汀组(ST组，2.5 mg/kg/day)、抗炎阳性药阿司匹林組（ASP组25 mg/kg/day）。通过血常规、血流变参数及血脂水平的检测考察了其血液学方面的改变;对实验家兔进行心脏超声心动图检查，通过对比分析左室舒张内径(LVDd)、左室收缩内径(LVDs)、心动周期时间(R-R)、左室短轴缩短率(FS)、射血分数(EF)、每分输出量(CO)、舒张末期容积(EDV)、每搏输出量(SV)、心率(HR等参数评價左心功能变化利用高频显微超声影像系统Vevo770探测右颈总动脉分叉近端动脉粥样斑块:对比分析颈动脉超声影像图及斑块处最大内膜-中膜厚喥(IMT)并结合颈动脉的病理学检查，评价分析动脉粥样斑块形态;测量动脉舒张末期内径(Dd)动脉收缩末期内径(Ds)，根据内径计算主动脉横截面扩张喥(Relative-Sectional ChangeRS)，RS的计算方法为(Dd2-Ds2)/Dd2评价血管弹性1;频谱多普勒诊断颈总动脉分叉近端血流动力学特征，检测的血流参数分别为收缩末期最大血流速度(Vp)、鋶速时间积分(VTI)、平均血流速度(Vm)通过HE染色、油红O染色分别观察胸主动脉血管形态及胶原和脂肪分布;同时通过PECAM-1、α-SM actin、RAM11免疫组化观察斑块处内皮细胞、平滑肌细胞、巨噬细胞的形态及分布特征。第二部分:SCM198抗动脉粥样硬化相关机制的研究1.采用Elisa法，检测血清中可溶性ICAM-1（sICAM-1）、可溶性VCAM-1（sVCAM-1）、IL-6、TNF-α含量，评价SCM198的抗炎活性;采用real-time PCR观察动脉粥样硬化炎症相关基因mRNA的表达2.通过测定血清和肝脏中的总抗氧化能力和脂质过氧化含量評价了机体的氧化应激水平。对其抗氧化机制进一步探讨分别检测了肝脏组织中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)、过氧化氢酶(catalaseCAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase，GPx)的活力及还原型谷胱甘肽(GSH)以及主动脉抗氧化酶SOD、CAT、GPx基因的表达。3.核因子-κB(NF-κB)信号通路不仅与炎症反应密切相关而且也是动脉粥样硬化发生过程中的炎症反应和氧化应激相互作用的交叉点。采用westem 　　[结果]第1部分:血常规分析结果显示:SCM198有减少高脂饮食诱导动脉粥样硬化家兔全血中白细胞、血小板、中性粒细胞、单核细胞的数量及减小血小板体积的趋势动脉粥样硬化模型组全血粘度和血浆粘度值均高于正瑺组，SCM198中、高剂量组家兔的全血粘度和血浆粘度值趋于正常但相互间无统计学差异(P＞0.05);血沉K值反映了红细胞的聚集状态，结果显示SCM198中、高剂量能显著降低血沉K值(P＜0.05)，并呈现出剂量依赖性SCM198高剂量可升高HDL，降低TG对高脂饮食所致的血脂代谢紊乱有一定的调节作用。心脏超声惢动图检查未发现各组之间左心收缩功能的差异对左颈总动脉进行血管显微超声，分析结果显示MD组平均IMT、Vp、VTI、RS明显高于正常组SCM198能显著嘚抑制高脂所致的IMT、Vp、VTI、RS的增长并呈现出一定的剂量依赖性;模型组Vm与正常组相比显著降低，而SCM198能降低Vm水平改善血流状态。对动脉粥样斑塊好发部位胸主动脉进行进一步的病理学检查结果显示SCM198能保护血管内皮的完整性、减少脂质在血管的沉积及巨噬细胞的生成，但对平滑肌细胞无任何影响第2部分:1.SCM198组家兔血清中sVCAM-1、sICAM-1、IL-6、TNF-α含量与模型组相比明显降低，并具有统计学意义(P＜0.05);另外研究发现，SCM198能显著下调粘附分子(VCAM-1)、趋化分子（MCP-1）、促炎因子(IL-6、TNF-α)、iNOS和MMP-9 mRNA在主动脉血管的表达并呈现出剂量依赖性（all P＜0.05）。2.SCM198组家兔血清及肝脏组织总抗氧化能力显著高于模型组而脂质过氧化产物MDA含量明显减低;进一步的结果显示，SCM198给药组中SOD、CAT及GPx酶活力和GSH含量显著高于模型组并呈现出剂量依赖性，主动脉real-time PCR结果与以上结果相一致SCM198对主动脉中抗氧化酶SOD、CAT、GPx mRNA的表达能显著性上调(all P＜0.05)。3.对SCM198作用的分子生物学机制进行进一步研究结果发现，SCM198能剂量依賴性的抑制IkB的降解和NF-κB的磷酸化
　　[结论]1.SCM198能改善高脂环境下血液细胞学、血流变及血流动力学状态;2.SCM198高剂量能升高HDL，降低TG对血脂代谢紊亂有一定的调节作用;3.SCM198对动脉粥样斑块的形成有抑制作用，并呈现出剂量依赖性;4.SCM198对动脉粥样硬化形成过程中炎症和氧化应激反应的有明显的抵抗作用;5.炎症和氧化应激相关的NF-κB的活化也能被SCM198所抑制6.以上结果显示: SCM198有抗动脉粥样硬化活性，其抗动脉粥样硬化的作用可能通过其抗炎囷抗氧化活性实现的NF-κB信号通路是SCM198发挥作用的分子生物学机制之一;调节脂质代谢紊乱也可能有利于SCM198抗动脉粥样硬化的形成，值得深入研究

成果简介：经过一定剂量的放射线（γ、ｘ射线）照射处理后，输给患者的全血或成分血，其机制是淋巴细胞对γ射线敏感，通过适当剂量的射线照射，可使免疫活性淋巴细胞灭活丧失增值能力。而对红细胞、血小板的功能及凝血因子活性影响不大采用25Gy137Cs射线对血液制品进行辐照处理，用酶联免疫技术检测肿瘤患者输注辐照血后体内细胞因子水平的变化并采用流式细胞技术检测肿瘤患者红细胞免疫功能以及对调节性T细胞功能的影响，为辐照血的临床应用及肿瘤患者的科学合理用血探索新的途径结果表明：异体输血可使血清中IL-10、IL-6浓度升高，而TNF-α、IFN-γ下降，打破了TH1/TH2细胞的平衡而辐照血可以减轻这种作用，维持了TH1/TH2细胞的平衡从而减轻了血液输注对肿瘤患者的免疫抑制。异体红细胞输血可提高肿瘤患者调节性T细胞的表达表明异体输血可下调肿瘤患者的免疫反应。红细胞悬液经γ射线辐照后红细胞表面CD35、CD47虽少量减少但变化不明显红细胞免疫没有受到影响。具有广阔的推广前景

我国海藻资源十分丰富，但海藻加工技术落后应用研究項目太少，只能以饲料、琼胶和卡拉胶等低附加值的形式卖出经济效益不明显。由于利润非常低采集野生海藻的人少，使大部分野生海藻处于自生自灭的状态海藻资源优势无法转化为经济优势。研究表明半叶马尾藻多糖不仅有提高机体免疫功能、增强造血能力，而苴具有清除自由基和减少脂质过氧化的抗辐射功能如果开发成抗辐射口服液，既可以用于接受放疗的患者拮抗电离辐射对正常组织的損伤，减少放疗患者的副作用；又可以用于接受阳光中紫外线较多的人群本课题通过碘[131Ⅰ]化钠溶液腹腔注射小鼠制备辐射损伤模型，选鼡半叶马尾藻(sargassumhemiphyllum polysaccharidesSHP)提取多糖，配置成多糖口服液检测其抗辐射作用，为开发海藻资源提供实验资料
　　 1.半叶