、掌握碱裂解法提取质粒的原理囷步骤
、掌握琼脂糖凝胶电泳检测
碱裂解法提取质粒是根据共价闭合环状质粒
这个狭窄的范围内线性的
而被变性,尽管在这样的条件下共价闭环质粒
的氢键会被断裂,但两条互补链彼此
相互盘绕仍会紧密地结合在一起。当加入
的乙酸钾高盐缓冲液恢复
的两条互补链仍保持在一起因此复性迅速而准确,而线性的染
的两条互补链彼此已完全分开复性就不会那么迅速而准确,它们缠绕形成网状
结构通過离心,染色体
液体培养基加入到试管中
培养物倒入微量离心管中,
吸去培养液使细胞沉淀尽可能干燥。
中充分混匀,室温放置
蓋紧管皿,混匀内容物将离心管放冰上
,盖紧管口颠倒数次使混匀。冰上放置
将上清转至另一离心管中。
向上清中加入等体积酚:氯仿(
将上清转移到另一离心管中
倍体积无水乙醇,混匀后室温放置
倒去上清液,把离心管倒扣在吸水纸上吸干液体。
沉淀振荡並离心,倒去上清液真空抽干或空气中干
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