冰冻免疫荧K沉积是什么意思

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2021-01-26 07:00 标签： 7k7k

控制好抗原孵育的温度尤其注意血清封闭时的浓度。

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ＴＰＡ涂抹小鼠皮肤后　做冰冻切片　染炎性细胞　非常郁闷中

　ＴＰＡ涂抹后２４h取材立即用ＯＣＴ包埋，冰冻切片刀头零下４０度，机箱零下２０度切４微米－８微米都试过，

切完晾１５分钟或不晾冷丙酮固定１０分钟，室温或３７度晾4小时至过夜都试过

　　Ｈ２Ｏ２　３％　１０分钟

　　二抗血清　１：５０　半小时

　　一抗　ＣＤ１１Ｂ（染巨噬细胞）；ＧＲ１（染中性粒细胞）１：５０；１：１００；１：１５０都試过

　　二抗(兔抗大鼠ＩgG)　１：２００

　　三抗（avidin）　１：２００

结果：在十一之前做过，片子形态尚好很清晰，只是有些非特异．

节後用了各种条件片子脱的很厉害，形态差阳性也似乎没有或

很弱，不知是不是温度影响很大．物理特性所致从３７度到室温

的影响，还是什么原因请高手指点，不胜感激．

　　荧光的也做了效果不好．  

我做冰冻切片的免疫荧光周围沒有人做过。

1. 都说组织的免疫荧光应该用冰冻切片做石蜡切片不行的原因是什么呢？

2. 看过一些资料都说组织冻存后决不能解冻，但怎麼可能冷冻时切，常温下做后续步骤怎么都会有解冻过程。

3. 关于冰冻切片做免疫荧光的固定方法：


1）好象有用4%多聚甲醛、冷丙酮或冷甲醇的除此之外，还有什么好的方法
2）这些方法都固定多久？它们之间有什么区别
3）如果用4%多聚甲醛固定，是不是要现用现配啊莋石蜡切片时多聚甲醛固定是要做抗原修复的，冰冻切片做免疫荧光需要抗原修复吗
4）冷丙酮或冷甲醇是-20度吗？是干脆就在-20度固定还是鼡-20的液体滴加在常温下的组织片上即可

4. 整个操作过程中，切片都不能干吗多数人这样说，但2000年的免疫荧光基础一书中还提到过空气干燥切片20分钟为了减少孵育或水洗过程中脱片。

4. 封片的方法有那些有什么好的办法能让荧光消失得慢一些？封片前能将切片晾干吗

5. 最後的片子如何储存？常规方法荧光能维持多久

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