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PdCl2溶液pH值调节过程沉淀问题
我目前发现PdCl2溶液在pH5左右一直有沉淀发生，无论浓度是在0.2 mM 还是 5 mM。而在高pH值下，比如pH10就没有沉淀发生，除非浓度过大。低pH值也没有发生沉淀，我试过pH值在2.5及小于它的。请问大家发现过类似的现象吗？
另外大家在制备负载金属催化剂时，有没有试过使前驱体溶液的pH值和氧化物载体的PZC(potential of zero charge)值一样？然后负载量如何？
请问楼主是用什么溶解的氯化钯 发生沉淀很正常的，两性化合物
关于PZC有这方便的研究报道的啊 Originally posted by cozee at
请问楼主是用什么溶解的氯化钯 我用的是盐酸。 Originally posted by chinguo at
发生沉淀很正常的，两性化合物
关于PZC有这方便的研究报道的啊 您指的哪种化合物是两性化合物？根据文献报导，pH5时PdCl2中的氯还没完全被OH取代. 而高pH值比如pH10时，PdCl2已完全转化为Pd(OH)2了。为什么前者pH5时溶液有沉淀，而后者pH10时却没沉淀呢？
关于pzc的报道结果是什么呢，负载量如何？我看到的关于金催化剂制备的报道，当溶液(AuCl4-)pH值跟氧化物载体相似时，负载量仍然很高，不解为什么？按道理这时金属离子化合物跟载体表面相互作用力很弱，AuCl4-又没有完全水解，靠什么产生了高负载量的金阿？ 用二氯四氨钯&&用水就能溶请问氯化钠溶液PH值为5.5 需要加多少克氢氧化钠到7 20度_百度知道
请问氯化钠溶液PH值为5.5 需要加多少克氢氧化钠到7 20度
提问者采纳
滴加氢氧化钠溶液（0.1mol/L）要投放固体容易pH调调整候素（溶液体积）办边调边测电极放溶液滴加氢氧化钠溶液（0.1mol/L）并搅溶液观察pH变化
过了后加冰已酸会不会影响实验效果
你是指调pH值调过了？应该用0.1mol/L的盐酸回调，不会影响结果，加入冰乙酸会引入其他物质，不建议采用。如果用冰乙酸回调了，可能会影响结果，建议重新做一次。
网上好多都说用冰乙酸回调啊
那他们根本就不是搞化学分析的，作分析时不应该引入其他物质的。你讲的这个实验，最好不要回调，如果用盐酸回调的话，势必增加NaCl的含量，虽然很少，但还是建议你一次性调整好，回调大多是不可取的。
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其他1条回答
NaCl溶液PH值5.5 !!??没搞错
我用PH测的
我是问加多少调
不知道体积，不知道氢氧化钠浓度，不知道调到多少。若要调中性，滴入少量吧，
氯化钠为5%
不是有试纸吗，边滴边观察，大概就差不多了。问一句，是计算的还是实验用的，是要非常精确吗。
当然是试验啦
我有PH计的
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出门在外也不愁某氮肥厂氨氮废水中的氮元素多以NH4+和NH3oH2O的形式存在，该废水的处理流程如下：（1）过程Ⅰ：加NaOH溶液，调节pH至9后，升温至30℃，通空气将氨赶出并回收．①用离子方程式表示加NaOH_百度作业帮
某氮肥厂氨氮废水中的氮元素多以NH4+和NH3oH2O的形式存在，该废水的处理流程如下：（1）过程Ⅰ：加NaOH溶液，调节pH至9后，升温至30℃，通空气将氨赶出并回收．①用离子方程式表示加NaOH
某氮肥厂氨氮废水中的氮元素多以NH4+和NH3oH2O的形式存在，该废水的处理流程如下：（1）过程Ⅰ：加NaOH溶液，调节pH至9后，升温至30℃，通空气将氨赶出并回收．①用离子方程式表示加NaOH溶液的作用：______．②用化学平衡原理解释通空气的目的：______．（2）过程Ⅱ：在微生物作用的条件下，NH4+经过两步反应被氧化成NO3-．两步反应的能量变化示意图如下：①第一步反应是______反应（选题“放热”或“吸热”），判断依据是______．②1mol&NH4+（aq）全部氧化成NO3-（aq）的热化学方程式是：______．
（1）①铵盐能和强碱反应，实质是：NH4++OH-═NH3oH2O，故答案为：NH4++OH-═NH3oH2O；②氨水电离是可逆反应，将生成的氨气带走，即减少生成物，可以使化学平衡向正反应方向移动，即更多的生成氨气，因而促进了氨水电离，故答案为：空气可以将生成的氨气带走，使化学平衡向正反应方向移动，促进了氨水电离；（2）①焓变小于0，则反应为放热反应，故答案为：放热；因为△H=-273kJ/mol＜0（反应物的总能量大于生成物的总能量）；&& ②第一步的热化学方程式为NH4+（aq）+1.5O2（g）═NO2-（aq）+2H+（aq）+H2O（l），△H=-273KJ/mol，第二步的热化学方程式为：NO2-（aq）+0.5O2（g）═NO3-（aq），△H=-73KJ/mol，根据盖斯定律则NH4+（aq）+2O2（g）═2H+（aq）+H2O（l）+NO3-（aq），△H=-346 kJ/mol，故答案为：NH4+（aq）+2O2（g）═2H+（aq）+H2O（l）+NO3-（aq），△H=-346 kJ/mol．
本题考点：
铵盐；化学反应中能量转化的原因；热化学方程式．
问题解析：
（1）①铵根能和强碱反应生成一水合氨；②减少生成物，可以使化学平衡向正反应方向移动；（2）①当反应物的总能量大于生成物的总能量，反应是放热的；②结合图象根据盖斯定律来计算反应的焓变．公考,家教,作文,写作,答案,中考,高考,语文,英语,培训,教师,律师,秘书,文秘,作业,辅导
&>&&>&大肠杆菌感受态细胞的制备和重组DNA的转化
大肠杆菌感受态细胞的制备和重组DNA的转化_6300字
大肠杆菌感受态细胞的制备和重组DNA的转化
目的基因和载体DNA在体外重组后，必须重新引入活细胞内才能进行增殖。外源DNA引入寄主细胞的过程一般称为转化。在正常生长条件下，大多数细菌并不发生转化作用。Mandel等人发现，细菌细胞经过氯化钙处理之后，可促进λ噬菌体的转染作用。Cohen等人后来证明，Ca2+同样可以介导质粒DNA对细菌细胞的转化。这是由于宿主菌经过CaCl2处理后，使宿主细胞诱导产生了一种短暂的“感受态”，在此期间它们能够摄取各种外源DNA。以后，建立了这一基本技术的很多改进方案，但所有这些方案都旨在最大限度地提高用质粒转化不同的细菌菌株的效率。按Nandel方案处理细菌，每微克超螺旋质粒DNA可得到105～106个转化菌落。若使用经过改进的大肠杆菌菌株，并且用DMSO，还原剂和氯化六氨合高钴处理细菌，转化效率可提高100～1000倍。这些试剂的作用机制尚不清楚。至于转化率的提高，则是经验性实验结果。在大多数情况下，用简单的CaCl2方法制备的感受态细胞可以满足需要，每微克超螺旋质粒DNA可以得到将近107个转化菌落。
一、用氯化钙制备新鲜的大肠杆菌感受态细胞和质粒DNA的转化
(一)试剂和材料
平板培养基
顶琼脂培养基
氯化钙溶液
(二)操作步骤
1.将受体菌种在平板培养基上划线，37℃过夜，进行活化。
2.挑选单菌落，接入5mlLB肉汤，37℃震荡过夜。
3.从上述培养产物中取0.5ml，转入50mlLB肉汤，37℃震荡培养2～4小时，到细菌密度大约为5×107/ml。为得到有效转化，活细胞数不应超过103细胞/ml，可每隔20～30分钟测量OD260值以监测培养物的生长情况。在菌株与菌株之间，OD260值和每毫升中活细
胞数间的关系变化很大，因此有必要通过测量特定大肠杆菌菌株的生长培养物在生长周期的不同时相的OD260值，并将各稀释度的培养物铺于无抗生素的LB琼脂平皿以计算每一时相的活细胞，从而使分光光度读数得到标化。
切记：下述所有步骤均需无菌操作。
4.在水浴将菌液冷却10分钟，然后于4℃下3，500r/min离心15分钟，倾去上清液。
5.用25ml预先冰冷的高压灭菌氯化钙溶液(80mmol/L)重新悬浮细胞。
6.将细胞悬浮液在冰浴中冷15分钟，再于4℃下3，500r/min离心10分钟，倾去上清液。
7.用3ml预先冰冷的高压灭菌氯化钙溶液(80mmol/L)分装在预先冰冷的高压灭菌Eppendorf离心管内，每管0.2ml，4℃放置12～24小时。
8.加入待转化的重组质粒DNA溶液，和0.2ml菌液混匀，在冰中放置30分钟。
实验中一定要包括下面的对照：①加入已知量标准超螺旋质粒DNA制品的感受态细胞;②完全不加质粒DNA的感受态细胞。
9.在冰浴中放置30分钟后，转入42℃水浴中预热1.5分钟。
10.加入1mlLB肉汤，于37℃复壮30分钟到1小时，不用震荡。这个步骤是为了使细胞复壮和抗性基因开始表达(用于四环素筛选一般需1小时)。
11.分别取0.1ml、0.2ml、0.3ml等合适的量，涂布在含抗生素的平板培养基上。涂布时可使用扩散棒，也可加入顶琼脂培养基在43℃左右保温，取合适量的转化细胞加入2～3ml顶琼脂培养基中，混匀后，迅速倒入固体平板培养基上，使之分布均匀。
12.将涂布好的平皿在室温放置20分钟到半小时，使菌液被固体培养吸收或顶琼脂凝固。
13.将平皿放于37℃培养箱中过夜，一般在12～14小时菌落即可出现。
氯化钙法是用质粒DNA转化细菌细胞，尤其是大肠杆菌细胞经常使用的方法。在转化时要注意以下问题：①低温对Ca2+介导DNA的转化是必须的，氯化钙处理时一定要在低温条件下进行;②用于转化的细菌细胞在对数生长期的转化能力最高，静止生长期以后，转化能力逐渐丧失。
二、制备新鲜或冷冻的大肠杆菌感受态细胞
在某些情况下，例如从较难得到的样品中分离极少量的mRNA来合成cDNA并构建cDNA的质粒文库时，需要高的转化率。简单的CaCl2方法不能很好的满足需要，下面介绍的方法所制备的大肠杆菌DH1、DH5和MM294感受态细胞培养物能使每微克超螺旋DNA以≥5×107转化菌落的频率进行转化，但是其他大多数大肠杆菌菌株的最高转化率大约只有以上菌株的1/10～1/5。一些大肠杆菌菌株(如MC1061)不适于此法。
SOB培养基：
酵母提取物
加入950ml水溶解后，加入250mmol/LKCl溶液10ml，用NaOH调节pH值到7.0，补水到1L，高压灭菌20分钟。(该溶液使用前加入5ml灭菌的2mmol/LMgCl2溶液)。
SOC培养基：将SOB培养基高压灭菌后，降低温度到60℃以下时，加入20ml用0.22μm滤膜过滤除菌的1mol/L葡萄糖溶液，即为SOC培养基。
TFB溶液的配制(1升)：
1mol/LMES(pH6.3)
MnCl2·4H2O
CaCl2·2H2O
氯化六氨合高钴
1mol/LMES[2-(N-吗啉代)乙磺酸]的配法是：将19.52gMES溶于80ml纯水中，用5mol/LKOH将溶液的pH值调到6.3，然后加入纯水使终体积为100ml。溶液用滤膜滤器(0.45μm孔径)过滤除菌，分装为10ml小份，于-20℃冻存。
配制TFB时，在800ml纯水中混匀所有成分，用纯水将终体积调至1L。溶液用滤膜滤器过滤除菌，分装成40ml一份，贮存于组织
培养瓶中(Corning25100或与之相当的瓶)，存放于4℃。溶液的pH值应在6.0～6.1之间。
FSB溶液的配制(1升)：
1mol/L乙酸钾(pH7.5)
MnCl2·4H2O
CaCl2·2H2O
氯化六氨合高钴
将9.82g乙酸钾溶于90ml纯水制成1mol/L乙酸钾，然后用2mol/L乙酸调pH值至7.5，加纯水使终体积为100ml，将溶液分装成10ml小份，贮存于-20℃。
FSB的配方：用800ml纯水将所有成份混合，待试剂溶解后，用0.1mol/LHCl调节溶液pH值至6.4，如调过头，不要加碱重调，而应弃去溶液重配。用纯水将体积补至1L。溶液用滤膜滤器(0.45μm孔径)过滤除菌，分装成40ml小份，装入组织培养瓶中贮存于4℃。贮存期间，溶液的pH值可下降至6.1～6.2，此后pH值稳定不变。
DnD溶液的配制：
二硫苏糖醇(DTT)
1mol/L乙酸钾(pH7.5)
DnD溶液用可耐受有机溶剂的MillexSR膜(Millipore)过滤除菌，将DnD溶液分装成160μl小份放入0.5ml的无菌微量离心管中，密封管口，贮存于-20℃。
DMSO的氧化产物，据推测可能是二甲硫醚，是转化的抑制物。为避免这个问题，应购买质量最好的DMSO。应将所购试剂分装成10ml小份，放入无菌试管，密封管口，贮存于-70℃。
(二)操作步骤：
1.用无菌铂丝直接蘸取冻存的大肠杆菌DH1株(或DH5株，
MM294株原种)在SOB琼脂平板表面划线，于37℃培养16小时。(不必将冰冻的细菌融化，铂丝在冻存细菌原种的表面划过时，可带上足量的细菌，因此一管冻存细菌原种可使用多次)。
2.将4～5个单菌落转移到1ml含20mmol/LMgSO4的SOB中，菌落直径为1～2mm。中速振荡使细菌分散，然后在1L三角瓶中用30～100ml含20mmol/LMgSO4的SOB稀释培养物。
3.于37℃将细菌培养0.5～3.0小时，为达到高效转化，活细胞数务必少于108细胞/ml，可每隔20～30分钟测定OD600值。因每毫升中活细胞数间的关系变化很大，因此有必要通过测量特定大肠杆菌菌株的生长培养物在生长周期的不同时相的OD600值，并将各稀释度的培养物铺于无抗生素的LB琼脂平皿以计算每一时相的活细胞数，从而使分光光度读数得到标化。
4.在无菌条件下将细菌转移到一个无菌，一次性使用的，用冰预冷的50ml聚丙烯离心管中，在冰上放置10分钟，使培养物冷却至
切记：下述所有的步骤均需无菌操作。
5.于4℃以4000r/min离心10分钟，回收细胞。
6.倒出培养液，将管倒置1分钟以使最后残留的痕量培养液流尽。
7.用约20ml(每个50ml管)用冰预冷的转化缓冲液轻轻振荡，重悬沉淀(若制备需立即使用的感受态细胞可用TFB;若制备需要贮存于-70℃的感受态细胞则用FSB)，将重悬细胞冰浴10分钟。
8.于4℃用SorvallGS3转头(或与其相当的转头)以4000r/min离心10分钟，回收细胞。
9.倒出培养液，将管倒置1分钟以使最后残留的痕量培养液流尽。
10.用4ml(每个50ml管)用冰预冷的TFB或FSB轻轻振荡重悬沉淀。按步骤11-A给出的操作程序制备立即使用的感受态细胞，而步骤11-B制备贮存于-70℃留待以后使用的感受态细胞。
11.A.新鲜感受态细胞的制备：
1)将140μlDnD溶液加到每一悬液的中心，立即轻轻旋转以混匀悬液，然后在冰上放置15分钟。
2)每管再加140μlDnD溶液，轻轻旋转混匀，将悬液置于冰浴上，再放15分钟。
3)将小份悬液分装到冷却的无菌聚丙烯管(100ml)中，将管置于冰上。就大多数克隆方面的用途来说，50μl感受态细胞悬液已绰绰有余。然而，如需要更大量的转化菌落(如构建cDNA文库)，感受态细胞的量可能需要加大些。
11-B.冻存的感受态细胞的制备：
1)每4ml重悬细胞加140μlDMSO，轻轻旋转混匀，将悬液置冰上15分钟。
2)每份悬液再加140μlDMSO，轻轻旋转混匀，重新放入冰浴中。
3)迅速将悬液分装到冷却的无菌的微量离心管中，封紧管口，没入液氮中快速冰冻感受态细胞。贮存于-70℃备用。就大多数克隆方面的用途来说，50μl感受态细胞悬液已绰绰有余。然而，如需更大量的转化菌落(如构建cDNA文库)，每小份感受细胞的量可能需要加大些。
4)需要时，从-70℃冰箱中取出一管感受态细胞，把管握手中，融化细胞。细胞一经融化，立即把管转移至冰浴中，放置10分钟。
5)用一冷却的无菌吸头把感受态细胞转移到冷却的无菌试管中。放置在冰浴上。
12.将DNA加入到感受态细胞中，轻轻旋转几次以混匀内容物。在冰上放置30分钟。为得到最佳结果，DNA溶液的体积不应超过感受态细胞体积的5%。转化体的数量相对于所加入的DNA量按比例地增加，直到系统达到饱和。尽管感受态细胞然不同批次之间有一些差异，50μl感受态细胞通常可被1ng超螺旋质粒DNA所饱和。虽然再加DNA也不影响转化体的总产量，但使用过多的DNA将降低系统效率(以每微克DNA所获转化体的数量来衡量)。当所转化的DNA很难得时(如用从相对难得的样品中提取mRNA而合成的
cDNA)，这就显得格外重要。为最大限度地提高转化菌落的数目，可
把现有的DNA分置于几份感受态细胞中，以期系统不致饱和。
试验中要包括下面的对照：①加入已知量的标准超螺旋质粒DNA制品的感受态细胞;②完全不加质粒DNA的感受态细菌。
13.将管放入预加温到42℃的循环水浴中放好的试管架上，恰恰放置90秒，不要摇动试管。
14.快速将管转移到冰浴中，使细胞冷却1～2分钟。
15.每管加800μlSOC培养基。用水浴将培养基加温至37℃，然后将管转移到37℃摇床上，温育45分钟使细菌复苏并表达质粒编码的抗生素抗性标记基因。为最大限度地提高转化效率，复苏期中应温和地摇动细胞(转速≤225r/min)。
16.将适当体积(每个90mm平板达200μl)已转化的感受态细胞转移到含20mmolMgSO4和相应抗生素的SOB琼脂培养基上。若培养物体积太小(&10μl)，可再加肉汤培养基用一无菌的玻璃扩散棒轻轻地将转化的细菌涂到琼脂平板表面。
如在一个90mm平板上铺200μl以上的感受态细胞，应离心浓缩细胞(于室温用SorvallSS34转头或与其相当的转头以4000r/min离心10分钟)，然后用适量SOC轻轻重悬细胞。
如用四环素抗性作为选择标记，全部的转化混合物可以铺在一个单独的平皿上(或铺在软琼脂中)。然而如选用氨苄青霉素抗性，则只能将一部分培养物(根据实验决定)铺在单独的平皿上。氨苄青霉素抗性菌落数的增加与平皿上所加细菌数的增加并无线性关系。这可能是因为抗生素杀死的细胞可释放生长抑制物质的缘故。
17.将平板置于室温直至液体被吸收。
18.倒置平皿，于37℃培养，12～16小时后可出现菌落。
如检查氨苄青霉素抗性，用转化细胞铺平板时密度应较低(每个90mm平板不超过104菌落)，于37℃培养平板时不应超过20小时。氨苄青霉素抗性的转化体可将β-内酰胺酶分泌到培养基迅速灭活菌落周围区域中的抗生素。这样，铺平板时密度太高培养时间太长都会导致出现对氨苄青霉素敏感的卫星菌落。在选择培养基中不用氨苄青霉素而改用羧苄青霉素，以及将抗生素浓度从60μg/ml增至100μg/ml，可使情况有所改善，但不能彻底根除。
方案11-A和方案11-B的条件都是针对特定的大肠杆菌菌株进行优化的，采用其他菌株则可能达不到同样的转化效率。下列有几个因素对于获得保持高的转化频率来说是至关重要的：
(1)转化缓冲液中试剂的纯度，务必使用所能得到的最高纯度的试剂，这些试剂应分装成小份，避光保存于冷处。
(2)细胞的生长状态：由于一些不清楚的原因，直接用贮存于-70℃冰冻培养基中的贮存原种接种而进行培养的细菌，所得到的转化效率最高，不应使用在实验室中连续传代，贮存于4℃或贮存于室温的培养物。
(3)玻璃和塑料器皿的清洁度：痕量的去污剂或其他化学物质的存在可能大大地降低细菌的转化效率。所以最好拨出一批玻璃器皿专用于制备感受态细菌，而不作它用。这些玻璃器皿应用手工洗刷，再灌满纯水(Milli-Q级或与其相同的级别)。然后高压灭菌，临用前方把
水倒掉。细心操作的话，几乎总是可以获得转化效率高的感受态细胞，每微克超螺旋DNA可能得到5×107～1×108个转化菌落。然而甚至经验最为丰富的工作者也不可能保证持续得到转化效率更高的感受态细菌培养物。由于存在这样一个不可预测的可变的感受态细胞的转化效率，制备感受态细胞前，先制备一大批稀释的超螺旋质粒
DNA，分装成许多小分贮存于-70℃。这些标准制品可用来检验每一批新的感受态细胞的转化效率，并检查每一个实验的转化效率。设立这样一个阳性对照后，如果某一次实验得不到转化菌落，就可以根据对照的情况查明究竟是感受态细菌方面有纰漏，还是DNA制品间有差异。分装的感受态细菌可在-70℃保存几个月而转化效率无明显下降。
(4)外源DNA的大小和结构也对转化效率有很大影响：一般说来，分子越小，转化效率越高;环形分子的转化效率比线形分子的转化效率要高得多。共价闭环的超盘旋的质粒DNA比同种线形DNA分子的转化效率高上千倍。因此，在转化前要尽量保证重组DNA为完整的环状分子。
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过酸或者过碱都会使酶空间结构改变从而使酶失活,本题中酶已经在过酸环境中失去活性,之后无论PH值为多少都没有酶活性了