错误将加iptg分子量的菌株拿来保种了怎么办

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2015-01-23 15:08 标签： iptg价格
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你可能喜欢使用T7启动子，BL21（DE3)菌株，加入的IPTG的终浓度要到多大才能起到诱导的作用_百度知道
使用T7启动子，BL21（DE3)菌株，加入的IPTG的终浓度要到多大才能起到诱导的作用
提问者采纳
佳浓度1mM非容易形包涵体包涵体用比做抗体蛋白越越数候我需要蛋白溶性表达所浓度需要摸索蛋白必须溶性表达建议用较低浓度IPTG我用低浓度0.1mM效错需要延诱导间问题请加QQ<img class="word-replace" src="/api/getdecpic?picenc=0ad4181542.希望帮
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另外叫做本底表达导入目蛋白未诱导情况表达能肠杆菌产类似IPTG物质原核表达见本底
这个本底表达可以抑制吗
在细菌OD600值为1时加终浓度100ug/ml的IPTG.
减低本底表达一是别用LB，换没有乳糖残存的培养基。二是换个更严谨的启动子……
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IPTG能直接加入LB肉汤培养基中灭菌的吗？灭菌时会不会破坏IPTG的诱导作用呢
IPTG能直接加入LB肉汤培养基中灭菌的吗？灭菌时会不会破坏IPTG的诱导作用呢
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这个帖子发布于8年零211天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
IPTG能直接加入LB肉汤培养基中灭菌的吗？灭菌时会不会破坏IPTG的诱导作用呢
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IPTG好像不能高温灭菌，配好的IPTG还要-20度避光保存，可见它对温度还是很敏感的
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IPTG要过滤除菌吧
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IPTG和抗生素都是在培养基灭菌后,冷却到50度左右才加入的
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IPTG不能高温灭菌，而且楼主加入的时间也不对，应该在OD0.6 左右，菌体生长到对数生长末期的时候加入IPTG开始诱导的，此时菌体生长状态最好，而且菌体总数也有了保证，可以保证最后目的蛋白的总量。IPTG有毒性，过早加入会严重影响菌体生长，如果在开始摇菌时就加入IPTG，会打乱整个菌体的生长，得不到所要的表达蛋白。
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【求助】IPTG和X-gal在表达重组菌时究竟起什么作用？为什么有的要都加，有的却可以不加IPTG？
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这个帖子发布于8年零360天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
IPTG和X-gal在表达重组菌时究竟起什么作用？为什么有的要都加，有的却可以不加IPTG？转化TOP10后涂板进行蓝白斑筛选是不是可以不涂IPTG？
jiahangyouxiang edited on
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在T-A克隆时，IPTG是T7启动子的诱导剂，在IPTG的诱导下，T7启动了下游的lac-Z基因的表达，则lac-Z与X-gal反应生成蓝色的物质，是一种非常容易的筛选标记，如果PCR片段连接进去，则破坏lac-Z，lac-Z不表达，没有蓝色出现。在BL21 菌种中，IPTG还是T7启动子的诱导剂，表达时不需要加X-gal。
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请教yanjiangang一个问题：“BL21 菌种中，IPTG还是T7启动子的诱导剂，表达时不需要加X-gal”，为什么在BL21中不需要加X-gal?X-gal原本就应该是一种兰白斑显色底物，没有了底物怎么显色，只是说有些lacZ前的启动子不是诱导型，所以可能不需要加IPTG，但在BL21中不要加X-gal我没有找到相关的资料，希望yanjiangang能稍微解释一下，谢谢！
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T7启动子不用诱导!ITPG是lac-Z启动子的诱导物,诱导表达lac-Z启动子后面的连接的T7启动子专一识别的T7-RNA聚合酶,从而使T7启动子能够转录后面的外源orf导致原核表达能够实现.蓝白斑筛选是重组子筛选的一种方法： 是根据载体的遗传特征筛选重组子，如α-互补、抗生素基因等。现在使用的许多载体都带有一个大肠杆菌的DNA的短区段，其中有β-半乳糖苷酶基因（lacZ）的调控序列和前146个氨基酸的编码信息。在这个编码区中插入了一个多克隆位点（MCS），它并不破坏读框，但可使少数几个氨基酸插入到β-半乳糖苷酶的氨基端而不影响功能，这种载体适用于可编码β-半乳糖苷酶C端部分序列的宿主细胞。因此，宿主和质粒编码的片段虽都没有酶活性，但它们同时存在时，可形成具有酶学活性的蛋白质。这样，lacZ基因在缺少近操纵基因区段的宿主细胞与带有完整近操纵基因区段的质粒之间实现了互补，称为α-互补。由α-互补而产生的LacZ+细菌在诱导剂IPTG的作用下，在生色底物X-Gal存在时产生蓝色菌落，因而易于识别。然而，当外源DNA插入到质粒的多克隆位点后，几乎不可避免地导致无α-互补能力的氨基端片段，使得带有重组质粒的细菌形成白色菌落。这种重组子的筛选，又称为蓝白斑筛选。有重组质粒的细菌形成白色菌落。
sxd5266 edited on
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对于上面的几位个人有不同的看法。在AT克隆时，我们用的宿主细胞是克隆宿主（DH5A，JM109等），IPTG的加入是起诱导物的作用，但是诱导的启动子不是T7，而是lac启动子（T7启动子的诱导需要T7RNA聚合酶，而大肠杆菌本身是不能产生这种聚合酶的，如果要用T7启动子表达，则必须要用到ED3溶源型细菌，在BL21里面，IPTG加入诱导的其实不是T7启动子，而是诱导DE3产生T7RNA聚合酶，由T7RNA聚合酶诱导T7启动子表达下游基因）。我们在做蓝白斑筛选时用的宿主都是A肽缺失型的，在没有插入片段以前，lac启动子可以产生A肽，具有β-半乳糖苷酶的活性，可以和X－gal作用，出现蓝色。反之，如果片段成功插入，则破坏了lacZ的读码框，A肽不可以表达，出现白色。 至于搂住所说的，如果不加IPTG的情况只能出现在lacZ的表达是组成型启动子的时候！ 另外“。yanjiangang 兄说“在BL21 菌种中，IPTG还是T7启动子的诱导剂，表达时不需要加X-gal。” 不是很明白。BL21菌株很少用来克隆用的，但是如果在BL21菌株中进行蓝白斑筛选，也得加Xgal吧！希望yanjiangang 能够解释一二！
taocheng82 edited on
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