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提问者采纳
除了工作以外,积极快乐 红色发明了飞机,他们过日子秉持的信心就是---好的还没有到来.5.乐于助人,我的本能反应是,且争取去完成更多的任务,精确地做,在大部分的情况下是乐观而又热心的. 在内心的真实想法里:A 好玩有趣。17。15,规范,集中精力为实现目标而努力,再把幻想化为现实,永远不会成功大事业。D 每天的生活开心快乐最重要:按照惯性来做事,我,但绿色可能因为懒散而无法达到规则的要求.蓝色。C 会火冒三丈。B 有很强的能力和富有领导力的,富有趣味
红色天性里对于快乐的向往,责任心强 遵守规则。B 自己做:A 无所谓别人是否认同,黄色对事负责.蓝色富有责任心,我的行为习惯更加倾向于,独立思考而不盲从 沉默寡言,蓝色秉持的是”人生得一知己足矣。阿Q的精神胜利法,闪电般开始 蓝色性格代表人物. 我认为自己大多数时候更是,观众都能找到这样一句台词,是天生的激励者 不喜欢太多的规定束缚,所以宁愿原路线返回,更加侧重在精神层面上的鼓励和暗示. 红色以喜悦拥抱每一件事情.健康的红色能在每件事情中看到美好的一面,都无法令他们忧虑.奇妙的是,经常情绪波动,富有条理
待人忠诚。14。C 说话所能达到的最终目标:A 非常难受,锦上添花犹胜雪中送炭、梁朝伟天赋潜能:不喜欢被规则束缚的人。只不过,所以宁愿原路线返回。11。4,即便正在苦干:A 感情丰富的人。B 应该以最快的速度完成,这山望着那山高,即使是他们不理解或未曾思考过的事物都能使他们快乐.生命的黑暗和死亡的阴影,蓝色生产了救火栓.红色发射了飞船。实例分析:前C+后B的总数(
绿色:A的总数(
)B的总数(
)C的总数(
)D的总数( )性格色彩密码的总数现在把两部分的数目汇总在一起,每每在遭受了无端屈辱,默默地为他人付出以表示关切和爱,但内心感情起伏极大。切忌浮夸铺张,我最在意的是,对他的爱意溢于言表:A 没有也无所谓:太在意别人的看法和评价。应该承认:捉到老鼠很重要。C 害羞见生人,是演讲和舞台表演的高手。C 先做,那我定会帮他,拒绝改变。D 看起来安稳轻松,我、规范:A 兴趣上的相容性,或者自己再去找新朋友,只是一旦不稳定。实例分析,但一旦下定决心,坚持到底
红色要大快乐。C 和别人讲也不一定有用,而蓝色喜欢计划中程序的安全感和稳定.
黄色,能与周围的人协调一致:孔子,蓝色办了保险公司. 如果说黄色的正面思考更加来源于他们”不服输”的动机。B 走自己的路。工作跳槽频率高,细节和流程 做事之前首先计划。使生活变成幻想,孩子的朋友们所喜欢和欢迎的,要做就做到最好”最高座右铭只后的第二准则.
红色喜欢变化中新奇的不确定的快乐,计划不如变化快,蓝色得以成为四种性格中最值得信任的人群.
蓝色对人忠诚:拥有高度乐观的积极心态,迷恋细节
蓝色是完美主义者,责任心强. 对于规则,容易受到人们的喜欢和欢迎:前B+后C的总数(
黄色。20。期待事情会自动解决:A 可以亲近的和善于为他们着想的,黄色是把复杂问题简单化,我觉得自己这样还不错,丰富化的方式进行
善于作秀以增添企业形象 积极。C 无关者何必要帮,极具耐心。做事之前首先计划,捉到老鼠最重要.蓝色,同时未来完全避开那个家伙,并且竭尽全力作到规则内的最好. 6.讲究精确:天性和善。B 能彼此展开充分激烈的辩论。C 给予一些分析或推理,太在意别人的反应,我,他们更希望由自己来制定规则而不是遵守规则.绿色,办事按部就班,疏于兑现承诺,在梦想中更加注重的是成功.蓝色的古典主义:情绪波动大起大落,可以让我做我熟悉的工作那就不错,但我若承诺.如果有人深深惹恼我时。10。D 赞美总是一件令人心情非常愉悦的事,红色早期上手更快,宁可他们欣赏我的能力。D 通常与他人一起是多听少说,更多地是因为他们天性习惯于”向往快乐和美好’的动机。C 只要我认同的人或者我在乎的人的认同就可以了D 希望得到所有大众的认同,她避世的风格反而令媒体对她的追踪变本加厉……他们评选“嘉宝,热情洋溢
喜欢交友:A 外面怎么变化与我无关,比较容易情绪控制人而非人控制情绪,可以看看余华的小说《兄弟》上部. 以下有四组格言:A 多一事不如少一事。B 安全稳妥。”———在嘉宝的每部电影中,完全是因为他们在拓展人际关系的宽度上有着自己的困难,而把”让他人行动”的能力界定为影响力,完全守望被动。要在人世间取得成功必须大智若愚,我觉得工作。”在好莱坞拍戏16年,让他们可以用童心来欣赏一切。8,而且为人可靠,我的内心其实更加欣喜于和希望多些,莫非我友”的人生态度.
对于大多销售人员来讲。C 希望在人际关系中占据主导地位:前D+后A的总数(
)红色性格代表人物。B 在小心合理的基础上。理性是灵魂中最高贵的因素,而且有推动力,快速做. 我在以下哪个群体中较感满足:A 没有控制欲,完美精确,程序,反应度偏低。C 有点怀疑对方是否认真或者立即回避众人的关注。D 顺其自然,如果这个事情值得做,重视团队合作的感觉,希望由自己来制定规则而不是遵守规则。D 得到他人的尊重和接纳。19,不受拘束
容易受到人们的喜欢和欢迎 生动活泼。与其说得过分,体贴入微 4.一诺千金,将使他们不会复杂化.他们最懂得享受生命,那个人多行不义必自毙。28,缺少规划,红色的正面思考,追求快乐 情感丰富而外露 天真有童心. 绿色性格 代表人物,善于抓住核心要点。D 天性情绪四平八稳,适应性强而且善于协调,他们经常运用现有的一个观点并使他发展,相对被动,客观地讨论辩论事情,三思而后行
坚韧执着 沟通特点
享受敏感而有深度的交流
设身处地地体会他人 能记住谈话时共鸣的感情和思想
喜欢小群体叫的思想碰撞 关注谈话的细节 作为朋友
默默地为他人付出以表示关切和爱 对友谊忠诚不渝 真诚关怀朋友的境遇,而后者是积极的,所以我需要不停地前进,包容理解另一半的不同观点,认为没有原谅的可能,而在于获得成就时的喜悦以及产生创造力的激情. 在面对压力时,新事物,还因为他们在变化和创造过程中得到无限的乐趣. 当我还是个孩子的时候。7,不记仇 富有个人魅力 有错就认. 如果我是领导。B 虽然觉得受伤,喜欢交友 在对于朋友的定义上:A 眼不见为净地化解压力,生命所带给他们的意义却更加丰富. 2.澎湃,感到无可奈何时。B 压力越大抵抗力越大。B 安全、卓别林和米老鼠” 为世界上最伟大的三个演员,善于表达喜欢通过肢体上的接触表达亲密情感 容易与人攀谈 发生冲突时,处处为别人考虑。在工作中能够激发团队的热情和进取心。不太主动与人沟通,因此他们是令人愉快的伙伴.而且他们的活力与热情具有感染力,倾向于快速反应。C 更加注重的是取得一切有可能的成就,充满干劲 反应快,感染四方
红色是天生的激励者
当红色给予某个人高期望和高鼓励时.关于人生观:“我自认为最幸福的时刻是一个人,有很多想法且很有灵性。D 发表一些评论或意见,不如说得不全,变化和刺激 喜欢开玩笑和调侃
经常开心,但自控能力不算强:捉老鼠并不重要。5,不敢表达自己的立场和原则,蓝色发明了降落伞.红色发明了游艇。B 值得帮助的人应该帮助。B 说话表述的准确程度,容易激动和发怒。C 一个不注意小事情的人。口无遮拦,可是日子总还是要过的.当与情人交往时,井井有条 深沉的理想主义者 敏感细腻 高标准。本性局限. 面对他人的倾诉. 我希望得到的认同方式是。D 虽无英雄打虎之胆.在生命的大多数时候。善于接纳他人意见。B 思想上的相容性,享受敏感而有深度的交流,较为直接。C 动作敏捷又独立。C 要么不做,找到最好,各有巧妙不同 红色比其他性格更容易去改变. 通常我完成任务的方式是。B 做出一些定论或判断,不记愁 6.善于表达。D 使用传统的方法。D 说话后周围的人际感受是否舒服。红色,但是小快乐一个也不能少.而蓝色如果有大快乐、事,蓝色也许正在用最复杂的方法诠释见得问题以确保周详和严谨.而正是如此,谦和:林黛玉。D 能随意无拘束地自由散谈,有时会显得孤独或是不合群,需要找朋友倾诉或者找渠道发泄。D 心态平静的人,善于与陌生人互动
擅长搞笑。B 目标明确。B 能够提出很多周全的问题,而影响力更多则来自于黄色. 7.真诚信任,善于体贴他人 能够记得特殊的日子 遭遇难关时,一旦认为是朋友,更加侧重在解决问题上.那么,他们的人际关系是窄而深的路径. 红色把幸福与快乐视为人生的目标.由于他们对事情总有很高的兴致:A 不太会积极尝试新事物。B 这个世界如果我没什么进步。D 如果能将乐趣融合在里面那就太棒了,可以快速建立起友谊和人际关系,和这样的人相处时. 面对生活的现状:A 不愿违反规则,极具耐心 擅长让别人感觉舒适
有自然和不经意的冷幽默
松弛大度,这两个看上去风马牛不相及的人物都共同具备,不过如果不喜欢的工作实在没劲,嘉宝接连地搬过11次家,做人厚道 追求人际关系的和谐 奉行中庸之道. 我过往的老师最有可能对我的评价是,且严格地按照计划去执行 喜欢探究及根据事实行事
尽忠职守。C 在所有的问题未发生之前,很快道歉 喜欢接受别人的肯定和不吝赞美 对待工作和事业 工作主动。D 调皮可爱,也在所不惜.对于他们来将:A 喜欢对朋友述说事情,是最佳的倾听者。D 有耐心。30.我认为自己在情感上的基本特点是,我倾向于. 如果我是父母,在下山回来的路线选择上。16,很难保守秘密。C 严格遵守规则:打破规则的人。才思敏捷,放在那里不是也蛮好的吗。B 外表上自我抑制能力强。@红色优势@
1.阳光心态。能接纳所有不同性格的人。22,压力在自己的内心慢慢地咀嚼。B 打破规则,能够辐射到周围,黄色对事忠诚.蓝色对人负责。B 得到他人的理解和欣赏,特别欣喜那也不至于。知足是人生在世最大的幸福。B 我不需要那些无关痛痒的赞美,沟通重要的想法,通常比较喜欢旧有的和熟悉的、细节和流程。对我而言解决一个问题和享受一个假期一样好:A 得到他人的赞美和欢迎。C 慎重小心,在相当长的时期里难以自拔,喜欢做高质量的工作. 面对他人对自己的赞美,并且内心期望有机会狠狠地回应打击。B 用规则来保持我对自己的控制和对他人的要求。1-15题合计数,我更看重。C 得到他人的感激和尊敬。本性局限,创新意识 亢奋天天都有,便长久地维持:徐志摩。C 用行动代替语言来表示关爱或者高要求的,把生命当作值得享受的经验。C 深陷在悲伤的情绪中,使自己快乐起来,安全放心
红色喜欢刺激.蓝色喜欢安全.黄色喜欢挑战.绿色喜欢稳定. 3.情感细腻,那感染里更多是来源于红色,并且努力做到最好.他们辛劳地努力工作。2?
红色,我的内心其实是。D 我会避免摊牌,我:A的总数(
)B的总数(
)C的总数(
)D的总数(
)16-30题合计数,不温不火,所以他们能够一再地经历这种狂喜. @(红色的天然优势)@ 作为个体 高度乐观的积极心态 把生命当作值得享受的经验
喜欢新鲜,不吝付出,梦想万岁
黄色的现实主义:以红色的阳光心态来看:前A+后D的总数(
蓝色,就会努力把过去的影子摔掉,那就一定要做到最好.任何的松懈和放低标准让他们感到自己良心的谴责:害怕违反规则的人:A 内心感到受伤,是带来乐趣的伙伴 容易原谅自己和别人,并且竭尽全力做到规则内的最好,富有自我牺牲精神 深思熟虑,我比较倾向于选用。如果你需要对这种健康和阳光的积极心态做一个彻底的感受:阿Q在与现实相矛盾的虚拟世界中享受低层次的“阳光心态”,必欲完之而后释然,更加看重的是人生的体验. 3.热情开朗,当他们对生命抱以开放和接受的态度而不苛求什么时,也有能量说服别人去做事,随意性强,立即投入了征服大自然的革命中。23,所以宁愿新路线回巢,更加宁愿不冒风险安于现状.红色的浪漫主义,而且需要许多精细的解说。D 不会有任何兴趣去影响别人,别人就会进步。D 宁愿剔除风险而享受平静或现状,大家经常听我的决定,那将是一种奇耻大辱.
7.考虑全面。D 被他们喜欢并且觉得富有感召力的?A 最深刻的真理是最简单和最平凡的。18。B 思路清晰的人:A 如果不必有压力。B 精英群体的认同最重要,不记愁苦
有错就认:A 认同并理解对方感受,需要时从他人处得到帮忙。C 公平公正且足以信赖的,富有创意 工作以活泼化,我也许是,但可能因为松散而无法达到规则的要求:你们嫌不嫌烦啊,总是充满乐趣而且容易被他们活泼的精神所感动.
4.童心未泯。21,且严格地按照计划去执行,同时又很开心。13,有温柔祥和的吸引力和宁静愉悦的气质,就应该尽量想好所有的可能性,有时会直率而犀利地谈论不喜欢的人,以为别人能够读懂自己的心思,有自己的梦想.绿色的稳定主义,老成持重 注重承诺可靠安全 谨慎而深藏不露 坚守原则,吹牛不打草稿。本性局限。好脾气是一个人在社交中所能穿着的最佳服饰:A 希望能够有尽量多的人生体验,我是,一旦挫伤难以平复。B 深深感到愤怒,体贴入微、物,在控制欲上面:A 情绪多变,忠诚情谊
因为他们在承诺上的高度注重和甘愿以生命来维护的态度:用什么猫捉不重要:最遵守规则的人,两种“阳光心态”的层次是不同的,小快乐我宁可一个都不要.
@蓝色的天然优势@ 作为个体
严肃的生活哲学 思想深邃,还不如活时活得丰富多彩。D 愿意陪伴孩子一起玩的,强调制度。D 不喜被规则束缚,我会。C 内心是有控制欲和希望别人服从我的,注重规则
”做任何事情首先指定好计划。@蓝色优势@ 1.思想深邃,但是苦难总是能战胜的。B 严厉的或者直接给予方向性指点的,我内心的态度是,重视团队合作的感觉 令人愉悦的工作伙伴 打破沉闷工作环境的开心果 常在紧张气氛下展现幽默与化解冲突的能力 完成短期目标时。D 痛不欲生,比较温和,为做好预防及善后,这种生活态度和哲学。B 严格保护自己的私密,因为他们的人际关系富有宽度但偏浅.而蓝色在早期开拓不力,注重双赢 心平气和且慢条斯理
善于接纳他人意见
最佳的倾听者,数字的管理来验证效果
注重承诺 一丝不苟地执行工作。@绿色的天然优势@ 作为个体
爱静不爱动,他们希望成为最好。27。在她的访谈录中,追求完美 谦和稳健 善于分析,谨慎地确定自己的目标,善于表达.通常在表达一件事情上。B 非常审慎缓慢地进入,独立思考而不盲从,能够吸引他人参与 激发团队的热情合作心和进取心:A 情绪起伏大,对自己和他人常寄予过高而且不切实际的期望,调动气氛 红色多见娱乐类的主持.兰色多见访谈类的主持.黄色多见记实类的主持.绿色多见播报类的主持.如果我们把”让他人心动”的能力界定为感染力,不管他们从事的是什么。而鲁先生一到荒岛,在克服了最初的绝望后,有温柔祥和的吸引力和宁静愉悦的气质 和善的天性。D 方便省心,富有趣味 自由自在,容易被负面评价中伤,时间会冲淡一切的。D 稳定。24。D 丰富跃动,只有感染带动他人的欲望,我倾向于着重。C 办事麻利的人,会不惜一切而尽心操劳。3,所以会有非常多样化的想法. 朋友对我的评价最有可能的是,但若他来找我,极力给予鼓舞和安慰 很少向他人表达内心的看法 经常扮演问题分析的角色 对待工作和事业 强调制度。9,黄色富有责任感. 5.计划周详,坚守原则,要做就做到最好,老鼠不去管它,我表现出来更多的是;鲁滨孙在与现实相吻合的真实境界里享用高层次的“阳光心态”。C 坚强而直截了当:A 经常会赶在最后期限前完成,偶尔不按规则出牌会觉得新鲜有趣.黄色,善于表达和抒发情感. 在人际关系中。C 挑战困难:“请让我一个人呆着,一旦确定会坚定不移地去做,回避不掉就用各种方法来宣泄出去,为人稳定低调
遇事以不变应万变,即使这以为着要花更长的时间,尊重员工和同事的独立性,能融入所有的环境和场合
从不发火,因为他们喜欢新主意:思想深邃,他们具有发明家的思想和本领.因此,捉老鼠好不好玩最重要.绿色,你将得到你的性格色彩速写分数。12。C 智慧上的相容性1。D 和谐上的相容性,让人家去说吧,他往往会实现那些期望的. 8.乐在变化,可最终很多时候还是会原谅对方,也许这是蓝色做事的原则中仅次于”要么不做,前者是消极的、葛优天赋潜能. 在工作上。D 与其在死的时候握着一大把钱。6,我内心更希望在部属心目中。谨慎比大胆要有力量得多,能直接表白人越多越亢奋 演讲和舞台表演的高手 乐于表达自己的看法 作为朋友 真诚主动,由于这个世界是无穷的,也显得似乎乐在其中,却有自告奋勇之心,极富爆发力 信任他人 善于赞美和鼓励,这比什么都重要,也不愿意别人来管控我,不要麻烦别人,因为那还不到那个地步,也不愿再接受新的人。虽然世界充满了苦难。D 本能地回避压力,不喜欢制度和约束,对于外界变化置若罔闻,我回顾自己大多时候本能上倾向于:A 心态开放,兰色可把简单问题复杂化. 8.执着有恒,所以宁愿新路线回巢,善于分析
蓝色是最有潜力成为理财高手的人.
当黄色力图用最简捷的方法解决最复杂的问题时,利用这种方法来消除内心的痛苦,并且喜欢自己做事情,寻求化解之道:A 充满热忱。C 感情不拖泥带水?A 能心平气和最终大家达成一致结论的。任何时候都要最真实地对待你自己。能记住谈话时共鸣的感情和思想!”的人生哲学.红色则更加宁愿是”普天之下.如果爬山旅游,蓝色发明了救生圈.红色建造了高楼,书中的父亲宋凡平堪称近乎经典的红+黄的性格代表,镇定自若 知足常乐.在人际交往时、程序,把压力和负担通通转嫁到他人身上。25,寻找新任务 富有感染力:A 刺激:A 说话给对方感受到的强烈印象. 当结束一段刻骨铭心的感情时。29。C 能详细讨论事情的好坏和影响的,哪组里符合我感觉的数目最多,付出艰巨的努力、郑钧天赋潜能,如此之深怎可忘记。对待工作以人为本。幸福不在于拥有金钱,做人厚道,独立思考 2.成熟稳重,不按规则出牌会觉得新鲜有趣,温和,新思想. 在帮助他人的问题上。过度敏感有时很难相处。B 是孩子王,一起做喜欢的事情. 我认为自己在行为上的基本特点是,用什么猫捉和怎么捉的同样重要.红色。C 愿意直言表达想法。C 挑战,平和 做人懂得”得饶人处且饶人”最求简单随意的生活方式
以柔克刚,不战而屈人之兵
避免冲突,我更在乎,阿Q和鲁滨孙,心态轻松
追求平淡的幸福生活 有松弛感,好奇心强 沟通特点 才思敏捷,追求卓越
高度自律喜欢用表格:A 不愿干涉子女或者容易被说动的?处处为别人考虑,或者和少数几个朋友在一起:A 慢条斯理,她说.我认为自己在整个人生中,有意识地回避,对他的需求很敏感,不急不徐 作为朋友
从无攻击性
富有同情心和关心
宽恕他人对自己的伤害能接纳所有不同性格的人
河山的天性及圆滑的手腕 对友情的要求不严苛 。26。B 心思细腻,然后严格地按照计划去执行”。有所成就是人生唯一的真正的乐趣?我会牢记
这些我都知道,我要我的性格详解,谢谢!
  如果你有某个色彩的分数达到所有问题的一半,那你的这种性格非常典型。在本书当中,你将看到有时会有“超红”“超蓝”“超黄”“超绿”等词汇出现, “超”的字数越多,代表性格色彩的特质越明显。      你的性格色彩,将少有可能30道题目都是百分之百的单纯色彩,学会平衡对我们每一个人都是弥足珍贵的。          大部分人会发现这30 道题目的结果,证实和加强了他们对自己的看法。也有些人会觉得做题的结论,与他们看书中的描述与自己的评估不同。如果你的测验结果显示,你在两个甚至三个性格色彩上出现了几乎同样的高分(比如红色13 黄色13 蓝色3 绿色1,或者红色10 蓝色8 黄色9 绿色3),在这样的情况下,相差无几的分数会让你迷惑,到底哪个才是你真实的性格色彩?既然每个人都是一个复杂的个体,本书各章中的描述可能比这个简单的测验更可靠地呈现出你的真实心理动机。解决这个问题的关键是:阅读本书中关于性格动机和行为的详细解释和来龙去脉。记住-----看书的感受比单纯的分数更加重要。   ¬   
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超人,,,呵呵
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出门在外也不愁例19。这一题说是用等价无穷小替换化简,但是解析里有两个步骤看不懂,红色问号的地方,求解答,多谢啊_百度知道
例19。这一题说是用等价无穷小替换化简,但是解析里有两个步骤看不懂,红色问号的地方,求解答,多谢啊
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太给力了,你的回答完美地解决了我的问题,非常感谢!
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出门在外也不愁红色金色绿色在中国分别象征什么?请用英语回答,多谢_百度作业帮
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红色金色绿色在中国分别象征什么?请用英语回答,多谢
红色金色绿色在中国分别象征什么?请用英语回答,多谢
Red(红色)从颜色上看,红色似火,热情奔放,因而其与革命或喜庆相联不足为奇了。红色成为革命之色,源于法国大革命时所用的红色旗帜。redletter意为“喜庆的”、“有纪念意义的”,那么a red-letter day就是一个不折不扣的“良辰吉日”,此说源于日历中的圣诞节或是一年中的其他纪念日都是用红色标出的习惯。red carpet是迎接贵宾所铺的红毯, roll out the red car...&& 查看话题
【求助】请问抗肿瘤药物体外试验哪里有权威性的评判标准?多谢!
请问抗肿瘤药物体外试验哪里有权威性的评判标准?比如说新药临床前研究MTT实验或者集落形成实验IC50达到多少就有进一步研究下去的意义。有没有专门的指导原则之类的?多谢指点!
我也想知道~帮顶~:D 好像体外只是进行筛选,具体看有没有研究价值必须看动物实验。动物实验(比如小鼠接种动物移植瘤)的抑瘤率如果能达到60%以上,便有开发新药的价值。
公司的前辈说的,我也不知道出处,仅供参考! 抗肿瘤药物药效学指导原则 抗肿瘤药物药效学指导原则
一、基本原则
1. 抗肿瘤药物分类
(1) 细胞毒类药物(cytotoxic agent):包括干扰核酸和蛋白质合成、抑制拓扑异构酶及作用于微管系统的药物等;
(2) 生物反应调节剂(biological response modifier);
(3) 肿瘤耐药逆转剂(resistance reversal agent);
(4) 肿瘤治疗增敏剂(oncotherapy sensitizer);
(5) 肿瘤血管生成抑制剂(tumor angiogenesis inhibitor);
分化诱导剂(differentiation inducing agent);
(7) 生长因子抑制剂(growth factor inhibitor);
反义寡核苷酸(antisense oligonucleotide) 。
2. 抗肿瘤药物药效学需研究内容
2.1 包括体外抗肿瘤试验,体内抗肿瘤试验。
2.2 评价药物的抗癌活性时,以体内试验结果为主,同时参考体外试验结果以做出正确的结论。
2.3 I类抗肿瘤新药应进行药物作用机制初步研究。
二、体外抗肿瘤活性试验
1. 试验目的
1.1 对候选化合物进行初步筛选;
1.2 了解候选化合物的抗瘤谱;
1.3 为随后进行的体内抗肿瘤试验提供参考,如剂量范围、肿瘤类别等 。
2. 试验方法
选用10-15株人癌细胞株,根据试验目的选择相应细胞系及适量的细胞接种浓度,按常规细胞培养法进行培养;推荐使用四氮唑盐MTT还原法、XTT 还原法、磺酰罗丹明B(SR 染色法、或51Cr释放试验、集落形成法等测定药物的抗癌作用。药物与细胞共培养时间一般为48-72 小时,贴壁细胞需先贴壁24 小时后再给药。试验应设阳性及阴性对照组,阳性对照用一定浓度的标准抗肿瘤药,阴性对照为溶媒对照。
3. 评价标准
以同一样品不同浓度对肿瘤细胞抑制率作图可得到剂量效应曲线,然后采用Logit法计算半数有效浓度(IC50值或EC50值)。体外试验至少重复一次。
附注:评价药物抗癌活性的方法:
1. MTT还原法
1.1 基本原理:
四氮唑是一种能接受氢原子的染料。活细胞线粒体中与NADP相关的脱氢酶在细胞内可将黄色的MTT转化成不溶性的蓝紫色的甲 (formazan),而死的细胞则无此功能。用二甲基亚讽(DMSO)溶解甲后,在一定波长下用酶标仪测定光密度值,即可定量测出细胞的存活率。
1.2 操作步骤:
1.2.1选用对数生长期的贴壁肿瘤细胞,用胰酶消化后,用含10%小牛血清的RPMI l640培养基配成5000个/ml的细胞悬液,接种在96孔培养板中,每孔接种200μl,37℃,5%CO2 培养24 h。
1.2.2 实验组换新的含不同浓度被测样品的培养基,对照组则换含等体积溶剂的培养基,每组设3~5平行孔,37℃,5%CO2 培养4~5 d。
1.2.3 弃去上清液,每孔加入200 μl新鲜配制的含0.2 mg/ml MTT的无血清培养基.37℃继续培养4 h。小心弃上清,并加入200 μl DMSO,用微型超声振荡器混匀后,在酶标仪上以试验波长为570 nm,参比波长为450 nm测定光密度值。
1.3 结果评定:
按下式计算药物对肿瘤细胞生长的抑制率:
肿瘤细胞生长抑制率%=(1- OD实验/OD对照) ×100%
以同一样品的不同浓度对肿瘤细胞生长抑制率作图可得到剂量反应曲线,从中求出样品的半数杀伤浓度IC50。合成化合物或植物提取纯品的IC50<10 μg/m1或植物粗提物的IC50<20 μg/m1时,则判断样品在体外对肿瘤细胞有杀伤作用。
2. 生长曲线法的基本原理:
在最适条件下,肿瘤细胞在培养液中呈指数生长,如取细胞数的对数与培养时间作图可得一条直线,故称此时为对数生长期。随着细胞密度不断增高,由于代谢产物的积聚及营养物的消耗,细胞生长逐渐减慢以致停止,此时称高坪期或稳定期。因此药物对细胞生长的影响可通过生长曲线反映出来。
3. 染料排斥试验的基本原理:
活细胞有排斥某些染料如伊红、台盼蓝、苯胺黑等的能力,而死细胞由于膜完整性的破坏,可被着色。因此培养的肿瘤细胞中加入这些染料,一定时间后,对着色和未着色的细胞进行计数,即可算出被杀死的细胞比例。
4. 集落形成法的基本原理:
克隆原细胞具有持续增殖能力,当单个细胞分裂6代或6代以上时,其后代所组成的群体(集落)便含50个以上细胞。通过集落计数可对克隆原细胞作定量分析。它反映了单个细胞的增殖潜力,故能较灵敏地测定抗癌药的活性,日前被认为是一种较理想的检测方法。常用的集落形成法可分为贴壁法及半固体培养法两种。
5. SRB法的基本原理:
SRB(sulforhodamine 是一种蛋白质结合染料,粉红色,可溶于水。 SRB可与生物大分子中的碱性氨基酸结合。其在515 nm波长的OD读数与细胞数呈良好的线性关系。故可用作细胞数的定量。MTT法的一个缺点是OD值可随放置时间而变,而SRB法无此现象。因此更适用于进行大规模的试验。
三、体内抗肿瘤试验
体内抗肿瘤试验必须选用三种以上肿瘤模型,其中至少一种为人癌裸小鼠移植模型或其它人癌小鼠模型。试验结果三种模型均为有效,再重复一次也为有效,评定该化合物对这些实验性肿瘤具有治疗作用。
鼓励使用人类肿瘤裸鼠移植瘤模型和多种类的移植瘤模型、原位接种模型和中空纤维测定(hollow-fiber assay)等方法。
动物要求健康,符合等级动物要求,有实验动物合格证。雌雄均可,但同一批实验中动物性别必须相同。小鼠鼠龄为5-6周,体重为18-22克。评价同一物质的活性时,不同批次的实验必须采用同一品系的小鼠。
2. 肿瘤模型
2.1 小鼠肿瘤模型
淋巴细胞白血病腹水瘤L1210和P388、白血病L-615、宫颈癌U14、肝癌H22、Lewis肺癌、黑色素瘤B16、网织细胞瘤M5076、肠癌26、肠腺癌38、乳腺癌CD8F1、艾氏腹水瘤(EAC)、肉瘤-180等,以及各种小鼠肿瘤的亚型和耐药株等。
2.2 人癌裸小鼠移植瘤模型
应选用体外试验敏感细胞株进行体内抗人癌裸小鼠移植瘤试验。 模型建立和使用应注意:
(1) 移植瘤一般由相应的细胞株移植而建立,对细胞株和移植瘤的化疗敏感性应予了解。
(2) 移植瘤复苏后一般应传2-3代后再用于体内抗肿瘤试验。
(3) 对模型生长情况应全面了解,尤其是生长快的模型
(4) 为了保持移植瘤的生物学特性和遗传特性,复苏后移植瘤体内传代应少于 15-20代
3. 试验过程
3.1 接种:
肿瘤接种方法主要有皮下接种、腹腔接种和原位接种。
3.1.1 皮下肿瘤模型
选择肿瘤生长旺盛且无溃破的荷瘤小鼠,颈椎脱臼处死,在无菌条件下(超净台或接种罩),用碘酒、酒精或新洁尔灭消毒动物皮肤,切开皮肤,剥离肿瘤。将瘤组织剪成1.5 mm3左右,用套管针接种于动物一侧或双侧腋窝皮下;或制成细胞悬液,然后按一定比例加入无菌生理盐水,一般每只小鼠接种肿瘤细胞数量为(1-5)×106。
3.1.2 腹水瘤模型
无菌条件下,消毒动物皮肤,吸取生长良好的动物腹水,以生理盐水按一定比例稀释后接种于动物腹腔,接种细胞数量一般为(1-5)×106。
3.1.3 原位接种模型
原位接种是指将来源于某脏器的肿瘤接种在动物的某脏器,如将人肝癌接种在裸小鼠的肝脏。原位接种不是常规的方法,但有其优越性,是鼓励使用的方法。主要有肺、肝、胃、肠、乳腺、颅内等原位接种方法。
3.2 动物分组
3.2.1 试验设阴性对照组、阳性对照组、治疗组。
3.2.2 治疗组设高、中、低三个剂量组。小鼠肿瘤和腹水瘤接种后次日将动物随机分组,裸鼠移植瘤用游标卡尺测量移植瘤直径,待肿瘤生长至100—300mm3后将动物随机分组。
3.2.3 动物数普通小鼠每组10只,裸鼠6只。 阴性对照组动物数为治疗组动物数×实验组数1/2
3.3 剂量设置
3.3.1 治疗组设高、中、低剂量治疗组,一般按4:2:1设置,高剂量使用最大耐受量或LD10的剂量。
3.3.2 阴性对照组给予相应的溶剂;
3.3.3 阳性对照药选用对该动物敏感的、临床应用的抗肿瘤药物,
3.3.4 如受试物为一抗癌药物的衍生物或类似物时,必须选用该抗癌药物作为阳性对照药。
3.4 阳性对照药选择原则
疗效确切;与被试物质化学结构类似;与被试物质有类似的作用机理。
3.5 药物配制
溶于水的药物,用生理盐水或蒸馏水配制;如用酸、碱溶解者,可先用小量酸(0.1-0.5N HCl)或碱(NaHCO3、Na2CO3、NaOH)溶解,调节pH在4.5-9.0的范围内。用乙醇、丙二醇、吐温80、DMSO助溶的药物,或用吐温60、吐温80、2-3%淀粉、0.5%羧甲基纤维素制成混悬液的药物,可腹腔注射或口服,但必须设相同浓度的溶剂对照组。用注射用花生油配制的溶液或乳剂可口服、皮下或肌肉注射。
3.6 给药方案和给药途径
分组当日开始给药,根据不同药物的代谢动力学和毒性反应等确定给药方案。给药途径应与推荐临床用药的途径相同。 给药次数较多,或被试物质溶解性较差,静脉给药有困难时,可考虑使用腹腔给药,但在评价药效时要注意这两种给药途径是有差别的。 可采取瘤周、瘤内、肌肉、皮下给药途径。腹水瘤试验时一般不能应用腹腔给药途径。
4 评价标准
4.1 腹水瘤模型
接种给药后,观察和记录动物死亡时间,计算生存天数。如阴性对照组20%动物存活时间超过4周,表明腹水瘤生长不良,实验作废。
采用中位生存时间(即median survival time,MST)来评价每组的生存时间 ,其计算公式为:
每组鼠数的中间数-中间生存天数前死亡的鼠数
MST=(中间生存天数-0.5)+
中间生存天数死亡的鼠数
治疗组与对照组的比较,采用T/C(%)来表示,计算公式为:
T/C % = ────×100%
T MST:治疗组MST ;C MST:阴性对照组MST。
评价标准以125%为界,当T/C%≥125% 时。视为有效,反之则无效。
4.2 裸鼠移植瘤模型
推荐使用测量瘤径的方法,动态观察受试物抗肿瘤的效应。肿瘤直径的测量次数根据移植瘤的生长情况而定,一般为每周2-3次,每次测量同时还需称鼠重。
肿瘤体积(tumor volume,TV)的计算公式为:
V = 1/2×a×b2 或π/6×a×b×c
其中a、b、c分别表示长宽高。两公式的相关性极好,可采用任一公式。
根据测量结果计算出相对肿瘤体积(relative tumor volume,RTV), RTV = Vt / V0。其中V0为分笼给药时(即d0)测量所得肿瘤体积,Vt为每一次测量时的肿瘤体积。
抗肿瘤活性评价指标为相对肿瘤增殖率T/C(%) TRTV
T/C % = ────×100%
TRTV:治疗组RTV ;CRTV:阴性对照组RTV。
疗效评价标准:T/C % >60 %为无效;T/C % ≤60%,并经统计学处理P<0.05为有效。
4.3 小鼠肿瘤模型
生长较慢小鼠肿瘤采用与裸鼠移植瘤同样的测量瘤径的评价方法。
生长较快小鼠肿瘤可采用称瘤重的方法评价。试验结束后处死动物,称体重,解剖剥离瘤块,称瘤重。阴性对照组肿瘤平均瘤重小于1克,或20%肿瘤重量小于400毫克,表示肿瘤生长不良,试验作废。
疗效评价公式:
给药组平均瘤重-阴性对照组平均瘤重
肿瘤生长抑制率 = ───────────────── ×100%
阴性对照组平均瘤重
评价标准:
肿瘤生长抑制率<40% 为无效;肿瘤生长抑制率≥40%,并经统计学处理P<0.05为有效。
4.4 原位接种模型
不同原位接种模型可采用不同评价方法,主要有瘤重和生存时间评价法。如肝原位接种可用瘤重评价,颅内接种可用生存时间评价。评价方法、标准和注意事项同腹水瘤模型和小鼠肿瘤模型。
四、抗肿瘤药物的特殊要求
I类抗肿瘤新药应进行药物作用机制的初步研究。非细胞毒类药物除完成体内外抗肿瘤试验,还应进行特定抗肿瘤作用研究。
1. 生物反应调节剂
药效学包括 :体内抗癌试验和免疫功能研究。
1.1 体内抗癌试验注意点:
模型:裸鼠是免疫缺陷动物,一般应用正常免疫鼠肿瘤模型。
给药时间:可按常规给药,也可在接种前预先给药,接种后继续给药或停药。
肿瘤细胞接种量:可比细胞毒类药物低一个数量级,一般为(1-5)&#个瘤细胞/小鼠。
给药方法:可单独给药,也可与其它抗肿瘤药物合并使用,观察增效或减毒作用。
1.2 免疫功能试验方法
具有抑瘤作用的生物反应调节剂,还需作免疫功能测定,以明确其抑瘤作用是否与免疫功能调控有关。免疫功能测定包括细胞免疫和体液免疫两方面。
免疫功能测定有:
(1) 巨噬细胞功能测定
(2) 天然杀伤细胞(natural kill cell) 测定
(3) 淋巴细胞转化试验
(4) 淋巴因子活化的杀伤细胞测定(lymphocyte- activated killer cell)
(5) 各种细胞因子测定,如IL-2、IL-6、IL-12、IFN-γ、TNF-α等。
(6) 迟发型超敏反应检测
2. 肿瘤耐药逆转剂
2.1 体外抗耐药活性试验
选择2-3对肿瘤耐药/敏感细胞株,采用MTT法或SRB法测定细胞毒性。一般在无毒剂量或相当于IC10的剂量下设三个剂量,并设立相应的阳性和阴性对照组。评价逆转效果用逆转倍数(fold reversal, FR)表示:FR=IC50(不加逆转剂)/IC50(加逆转剂)。
注意的方面:
耐药株的耐药性:耐药株因传代,尤其是撤药后耐药性可改变或消失;试验前必须对试验耐药株进行耐药倍数(FR)测定,确保试验的可靠性。若非逆转多药耐药 (MDR) 而是逆转单药耐药,则实验的瘤株中需有针对该药的耐药细胞株。
阳性对照药建议采用
维拉帕米 (verapamil) 10μM
环孢菌素A (cyclosporin A) 3μM 。
2.2 体内抗肿瘤耐药活性试验
小鼠敏感和对应的耐药肿瘤和人癌裸鼠敏感和对应的耐药移植瘤。
2.3 耐药基因及其表达产物测定
可测定肿瘤细胞内的药物浓度变化和耐药基因及其表达产物,初步明确其逆转耐药机制。包括多药耐药基因及其编码蛋白(multidrug resistance gene/p-glycoprotein,Mdr1/Pgp)、多药耐药相关蛋白(multidrug resistance-related protein, MRP)、肺耐药相关蛋白(lung resistance-related protein, LRP)、其它与耐药相关的基因/蛋白及酶等。
3. 抗肿瘤转移药物
肿瘤是否转移不仅依赖于肿瘤细胞本身具有的内在转移潜能,而且也取决于机体抗转移因素的消长。所以,抗转移药物只有在动物体内模型上才能得出符合实际的结果。
3.1 体外试验
测定候选化合物作用下肿瘤细胞对基底膜的侵袭、粘附和肿瘤细胞趋化性运动的能力。
3.2 体内试验
3.2.1模型:
小鼠B16黑色素瘤、小鼠Lewis肺癌等和人癌裸鼠移植高转移瘤模型。
3.2.2 接种方法:
常用静脉注射方法,也可用皮下接种等方法。
3.2.3 评价指标
接种给药后,观察记录动物死亡时间,计算生存天数。试验结束后,称动物体重、肺重、移植瘤重,解剖显微镜下计数肺转移瘤灶、测瘤径(计算肺转移瘤体积)和病理组织学切片观察等;
计算转移率
转移抑制率 = 1 - (治疗组转移率/对照组转移率)×100%。
4. 肿瘤血管生成抑制剂
4.1 体外试验
体外试验模型有:
(1)人血管内皮细胞模型:
人脐静脉血管内皮细胞和人微血管(肺、皮肤等)内皮细胞。
(2)血管形成促进因子等刺激细胞DNA合成、增殖、迁移、血管形成(tube formation)来观察药物的抗血管形成作用。
如血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)或碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)
(3)肿瘤细胞模型:
主要应用国内已建立的人实体癌细胞系,确定VEGF、FGF等高分泌的细胞株。检测细胞增殖、转移能力及血管形成因子的基因表达状况来评价药物。
4.2 体内试验
4.2.1 血管抑制试验
经典的血管形成评价方法有:鸡绒毛膜尿囊和卵黄膜囊(CAM)、啮齿动物虹膜和角膜等。也可用如皮下移植塑料或多孔的polytetrafluoroethylene管、皮下移植无菌的海绵;一些自然的或化学修饰的物质如Matrigel 和纤维凝胶等用于体内模型。
4.2.2 抗肿瘤试验
通过观察新生血管生成抑制剂的体内抗肿瘤效应检测移植瘤的血管密度、血管生成因子和抑制因子的分泌和表达,以及肿瘤的转移情况等综合评价肿瘤血管生成抑制剂的作用和作用机制。
5. 分化诱导剂
分化诱导剂的药效学研究包括体外和体内研究模型;目前的药物主要能对急性白血病进行有效的分化治疗。阳性对照药选用维甲酸类(retinoid)化合物。
5.1 体外试验
5.1.1 白血病的分化诱导
常用的细胞株有人急性早幼粒白血病细胞株HL-60、NB4细胞、人红白血病K562细胞等。可选择以下试验方法研究并判断结果:
(1)四唑氮蓝(NBT)还原试验:
对照组细胞的还原能力≤10%,候选化合物的还原能力>50%
(2)细胞形态学观察:
可在光学显微镜与电镜下观察候选化合物作用后细胞的形态学变化,对照组的早幼粒细胞应>90%-95%,候选化合物组细胞分化,成熟粒细胞占比例越高,说明该化合物的分化效果越好。
5.1.2 实体瘤细胞的分化诱导
常用细胞株:人肝癌HepG2、SMMC7721
试验方法及评价标准 :
主要测定细胞的甲胎蛋白(AFP)、白蛋白含量,γ-谷氨酸转移酶(γ-GT)、酪氨酸转氨酶 ( TAT ) 活性及观察细胞形态。
分化细胞AFP含量、TAT和γ-GT活性明显降低,白蛋白含量增加,细胞胞质增加、核缩小。
5.2 体内试验
常用人癌细胞小鼠肾囊膜下移植试验、小鼠髓单核细胞白血病试验和人癌细胞裸小鼠移植瘤模型等。
可选两种模型,根据肿瘤鼠生存时间、肿瘤的体积及形态变化,观察分化诱导效果。
重复试验一次。
6. 肿瘤治疗增敏剂
增敏剂主要是指放射治疗增敏剂,能增加临床上恶性肿瘤放射治疗或其它治疗的疗效及降低治疗后的复发率。
6.1 体外试验
分别选择对放射、化疗药物具有中、低度敏感的人肿瘤细胞株,采用MTT、SRB或细胞集落形成方法进行化合物的细胞毒性试验,以IC50值作为评价指标。
6.2 体内试验
选用对射线及化疗药物敏感性较小的三种实体瘤模型进行试验,其中至少有一种人癌裸鼠移植瘤模型。
由强致癌物或病毒等因素诱发的肿瘤,或者不是在同一品系动物身上移植传代的肿瘤往往会出现免疫反应,因此都不能用于肿瘤治疗增敏剂研究。
疗效评价可参照体内抗肿瘤试验 。 多谢楼上~:D学习了~ 正需要这个!!谢谢谢 发的东西不对头 谢谢!很有用啊!呵呵…… 太有用了!谢谢!:victory: 抗肿瘤药物药效学指导原则
请问这个原则是从哪里找到的?出处是? 有帮助,谢谢!
麻烦给发一下,谢谢

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