用于氨基酸含量测定方法的比色法有哪些

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2015-05-20 03:57 标签： 酸性染料比色法
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关键词：氨基酸测定&&化学试剂&&&&& & 国家标准物质网1．原理 氨基酸在碱性溶液中能与茚三酮作用，生成蓝紫色化合物(除脯氨酸外均有此反应)，该蓝紫色化合物的颜色深浅与氨基酸含量成正比，其最大吸收波波长为570 nm，据此可以用吸光光度法测定样品中氨基酸含量。2．仪器可见分光光度计。3.试剂①2％茚三酮溶液：称取茚三酮1 g于盛有35 mL热水的烧杯中使其溶解，加入40 mg氯化亚锡(SnCl2·H2O)，搅拌过滤(作防腐剂)。滤液置冷暗处过夜，加水至50 mL，摇匀备用。②pH 8．04磷酸缓冲溶液：准确称取(KH2P04)4．5350 g于烧杯中，用少量蒸馏水溶解后，定量转入500 mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀备用。准确称取磷酸氢二钠(Na2HPO4)11．9380 g于烧杯中，用少量蒸馏水溶解后，定量转入500 mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀备用。&&取上述配好的磷酸二氢钾溶液lO．0mL与190mL磷酸氢二钠溶液混合均匀，即为pH8．04的磷酸缓冲溶液。&&③氨基酸标准溶液：准确称取干燥的氨基酸(如异亮氨酸)O．200 0 g于烧杯中，先用少量水溶解后，定量转入100 mL容量瓶中，用水稀释至刻度线，摇匀。准确吸取此液10．O mL于100 mL容量瓶中，加水至刻度，摇匀。此为200&g·mL-1氨基酸标准溶液。4．操作步骤①样品处理：准确称取粉碎样品5～lO g或吸取液体样品5～10 mL，置于烧杯中，加入50 mL蒸馏水和5 g左右活性炭，加热煮沸，过滤，用30～40 mL热水洗涤活性炭，收集滤液于100 mL容量瓶中，加水至刻度，摇匀备测。②标准曲线绘制：准确吸取200mol·L-1的标准溶液O．O、O．5、1．O、1．5、2．0、2．5、3．0 mL(相当于O、100、200、300、400、500、600&g氨基酸)，分别置于25 mL容量瓶或比色管中，各加水补充至容积为4．O mL然后加入茚三酮和磷酸缓冲溶液各1 mL，混合均匀，于水浴上加热15 min，取出迅速冷至室温，加水至刻度，摇匀。静置15 min后，在570nm波长下，以试剂空白为参比液测定其余各溶液的吸光度A。以氨基酸的含量(微克数)为横坐标，吸光度A为纵坐标，绘制标准曲线。&&③样品的测定：吸取澄清的样品溶液1～4 mL，按标准曲线制作步骤，在相同条件下测定吸光度A值，用测得的A值在标准曲线上即可查得对应氨基酸含量。5．计算& &X= c÷(m×1000) ×100
式中：x——样品氨基酸的含量，&g·(100 g)-1；& & c——从标准曲线上查得的氨基酸的含量，&g；& & m——测定的样品溶液相当于样品的质量，g。6．说明&&在放置过程中易被氧化呈淡红色或深红色，使用前须进行纯化，方法为：取10 g茚三酮溶于40 mL热水中，加入l g活性炭，摇动1 min，静置30 min，过滤。将滤液放人冰箱中过夜，即出现蓝色结晶，过滤，用2 mL，冷水洗涤结晶，置干燥器中干燥，装瓶备用。
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茚三酮比色法测定青天葵中总游离氨基酸的含量
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茚三酮比色法测定青天葵中总游离氨基酸的含量.PDF
官方公共微信来源：《中国药房》2012年第35期 作者：陈再洁;殷金龙;李坤;孙一;刘淑莹;越皓;
柱前衍生RP-HPLC法测定人参中17种氨基酸的含量
人参系五加科人参属植物人参Panax ginseng C.A.Mey.的干燥根和根茎[1],含有多种化学成分,如人参皂苷、多糖、生物碱、挥发油、氨基酸、脂肪酸等。人参具有多种生物活性和药理作用,如抗肿瘤、抗衰老、提高机体免疫力、降糖降脂、增加血管新生等[2]。2010年版《中国药典》[1]对人参及人参产品的质量标准以人参皂苷的检测为主。2010年人参新资源食品在吉林省试点,人参产品面临着由药品至保健食品再至食品的转变,质量标准相应的从以药效活性成分为目标到以营养成分为目标。人参中富含多种氨基酸,多数为人体必需氨基酸,氨基酸含量已作为衡量人参产品质量的指标之一。目前对人参中氨基酸类成分的分析报道较多[3,4],但多依赖于氨基酸分析仪对总氨基酸的测定,不能系统地监测人参原料的质量、全面反映人参产品中的营养成分。氨基酸衍生试剂的发展,使柱前衍生法分析氨基酸得到了广泛应用[5,6],但用其检测人参中17种常见游离氨基酸的研究未见报道。本试验通过柱前衍生反相高效液相色谱(RP-HPLC)法测定了人参中17种游离氨基酸和总氨基酸的含量,用于人参及其相关产品中氨基酸的定......(本文共计4页)
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主办：中国医院协会;中国药房杂志社
出版：中国药房杂志编辑部
出版周期：旬刊
出版地：重庆市茚三酮比色法测定青天葵中总游离氨基酸的含量,氨基酸 茚三酮,茚三酮,青天葵,比色法..
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