格式试剂制备交换求助

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2015-06-08 03:44 标签： 格式试剂和羧酸反应
环境标志产品技术要求 电话_百度文库
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环境标志产品技术要求 电话
环​境​标​志​产​品​技​术​要​求​ ​电​话
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2-溴-1，3，5-三甲苯的格式反应杂质多
如题所述，我要进行该格式反应，试剂除水，仪器干燥就不再描述。操作如下：在反应瓶中加入0.5mol的镁屑和100mlTHF和0.05mol2-溴-三甲苯，加热到回流，加入2粒碘，反应也很容易引发，控制温度在50-60度，2小时滴加剩余的0.45mol的2-溴-三甲苯和150mlTHF，滴加完毕，加热到微回流，保持两小时，反应液用甲醇淬灭中控，格式实际含量（液谱上以三甲苯的显示）一般为70%，原料约为3%，还有两个大杂质，不知道为何？会是两分子偶联产物吗？
以我的感觉，做格氏试剂温度绝对不能太高，一高偶联产物就很多。
你前面引发加热到回流是否有必要？保温四五十度加碘能否引发？还有后面的微回流。。。在实验室做格氏试剂，只要是THF溶剂，我们一般都保温在四五十度，而在实际生产中一般是三四十度的 偶联产物是肯定会有一些的啊，关键是温度和浓度，你的浓度有些大，一般做成1mmol/L的，500mmol需要500mL的THF。
不知道我的回答能否帮助到你。 : Originally posted by feng5chen at
以我的感觉，做格氏试剂温度绝对不能太高，一高偶联产物就很多。
你前面引发加热到回流是否有必要？保温四五十度加碘能否引发？还有后面的微回流。。。在实验室做格氏试剂，只要是THF溶剂，我们一般都保温在四五 ... 碘引发的时候内温一般在50-60度左右，引发后体系会迅速升温，温度低了是引发不了，我滴加剩余的原料现在也是在60度不到，然后滴加完再升温微回流2小时。 格氏试剂置换试试。将异丙基氯格氏试剂低温（<10℃）滴到溴苯中或反之，可能避免副反应。 就是开始一下啊，引发时大多比较剧烈，然后通过控制滴速来控制温度，保持微冒泡就行
再就是上面有人讲了，你的溶剂用少了，一般来说得20倍量以上，你的0.5mol镁屑最好用个200-300ml的THF，如果你需要浓度比较高，反应结束后来浓缩也比你直接小倍量溶剂的效果好 我们格式试剂一般温度在45度。温度太高副产物过多，先把THF和碘加入。然后在缓慢加溴-三甲苯直至引发，温度不要超过50度。 我认为问题出在你淬灭操作。不加淬灭剂试试。
我们做氯甲烷的格氏试剂的反应温度控制在约45，通完氯甲烷后加热至弱回流30分钟赶走氯甲烷。 干嘛非要做成格式试剂啊& &做成锂试剂试试 1.反应引发后，滴加反应物时，必须缓慢加入，此时温度应保持在30度左右，否则就要停止滴加，甚至用冰水浴冷却降温。温度或反应物控制不好，就会有偶联产物生成；
2.生成的格氏试剂不能与含活泼氢的化合物反应，你加甲醇猝灭，估计醇与格氏试剂发生了反应，生成了三苯基乙烷。
估计两个大的产物就是这样来的。格氏试剂_百度文库
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关于氘代试剂的几个问题
做核磁常用的氘代试剂有：氘代丙酮，氘代苯，氘代氯仿，重水，氘代二甲基亚砜，氘代甲醇，倒带二氯甲烷，倒带吡啶等等。
1、请问这些氘代试剂是怎么产生的？
2、这些氘代试剂中有点含有少量的水，有的又不含水，这是什么原因呢？
3、哪些氘代试剂能和活泼氢发生交换？
4、怎么比较能与活泼氢发生交换的氘代试剂的D活泼性？
1.可能是通过同位素置换和离心生产的。
3.都会发生活泼氢交换
参考！ 不懂，学习下 NMR Solvent Data Chart : Originally posted by celan at
NMR Solvent Data Chart NMR Solvent Data Chart 1、请问这些氘代试剂是怎么产生的？应该是通过重水工业化生产方法出来的。
2、这些氘代试剂中有点含有少量的水，有的又不含水，这是什么原因呢？因此含有重水正常，一些溶剂除水不彻底，你懂得。
3、哪些氘代试剂能和活泼氢发生交换？含活泼氘的就能和你的活泼氢交换，比如水，甲醇等。
4、怎么比较能与活泼氢发生交换的氘代试剂的D活泼性？氘的活泼性和氢一样啊，不很明白你的真正意思。 只知道怎么解谱，对于这个没研究过唉，
就是解谱费脑细胞:hand::D 1、请问这些氘代试剂是怎么产生的？ 应该是同位素交换来的吧！
2、这些氘代试剂中有点含有少量的水，有的又不含水，这是什么原因呢？这个主要是处理的问题吧。
3、哪些氘代试剂能和活泼氢发生交换？ 一般的都能够交换的 : Originally posted by jinqingxian at
1、请问这些氘代试剂是怎么产生的？应该是通过重水工业化生产方法出来的。
2、这些氘代试剂中有点含有少量的水，有的又不含水，这是什么原因呢？因此含有重水正常，一些溶剂除水不彻底，你懂得。
3、哪些氘代试 ... 我的意思是：氘代甲醇和重水都和同一个物质的活泼氢进行交换，哪个氘代试剂更容易交换？丁香客App是丁香园社区的官方应用，聚合了丁香园论坛和丁香客的精彩内容。医生可通过丁香客App浏览论坛，也可以在这个医生群集的关系网络中分享和互动，建立更广泛的学术圈子。
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【求助】阳离子交换柱的选择问题
【求助】阳离子交换柱的选择问题
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这个帖子发布于5年零71天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
近期实验需要纯化一个短肽，因为大小非常小（不到30个氨基酸），将其先连接在一个可以自我剪切的蛋白上，再加上his标签进行融合蛋白表达，前期的表达条件摸的比较好了，在上清中表达量很高，用镍柱纯化之后效果也非常明显（目的带很亮，杂带很弱）。因为需要启动融合蛋白的自剪切活性需要再一定的ph缓冲体系中，因此想到了离子交换柱层析，本人的短肽的等电点预测之后大概在10.5左右，初步打算是模仿某参考文献中的方法（蛋白等电点基本相当），准备使用whatman的cm52纤维素柱，但是由于到货周期等原因，准备先用借来的GE的SP琼脂糖柱试一试。在网上查过之后发现cm和sp分别是弱和强的阳离子交换剂。小弟在网上查询了不少资料之后仍然不甚明白（参考文献中的方法是用ph6.5的缓冲体系，但是我在网上看到的都说液相ph最好与等电点相差一个单位）请问各位大侠，强、弱阳离子交换剂（SP和cm）的柱子有什么差别已知等电点的情况下如何选择离子交换剂？比如本人等电点10.5，选择SP和CM是否有本质上的区别？缓冲液的ph该如何选取？是否需要浓度梯度洗脱？浓度范围在多少合适？还是需要摸个条件？万分感谢！
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唉，又是一个copy文献去做蛋白质纯化的。要想一想CM52 纤维素是那个时代开发的纯化介质啊！现在的实验室中没有人再用它去开发蛋白质纯化工艺了。SP柱可用。强、弱阳离子交换剂（SP和cm）柱子的差别主要在于适用pH的范围，SP稍宽，CM稍窄。当然你的SP 琼脂糖和cm52纤维素还有基质方面的差异，如耐压性、非特异性吸附等。等电点10.5，可以用阳离子柱吸附纯化。如何选择pH没有定论，要试验去确定。目标蛋白吸附最好，杂蛋白吸附最不好，而且洗脱方便的就是最佳pH。根据你的情况，起始试验pH可以选择高一些，如pH7.5-8.0。梯度洗脱是要做的，目的自然是为了提高纯度。选择阴离子柱穿脱后阳离子柱吸附也是一个很不错的思路。
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呵呵呵，现在没关系了，想找whatman的产品，万宗归一了，最终还是GE，建议做纯化的看文献还是要看最新的
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skykiller 唉，又是一个copy文献去做蛋白质纯化的。等电点10.5，可以用阳离子柱吸附纯化。如何选择pH没有定论，要试验去确定。目标蛋白吸附最好，杂蛋白吸附最不好，而且洗脱方便的就是最佳pH。根据你的情况，起始试验pH可以选择高一些，如pH7.5-8.0。梯度洗脱是要做的，目的自然是为了提高纯度。谢谢大侠。我想问一下能够清楚的讲一下等电点ph与交换柱的选择之间的关系吗？另外，ph该如何试？（用几管ph梯度的缓冲液加入介质，然后上样，跑胶，观察上清蛋白量？）因为之前已经his纯化了一次，杂蛋白相对较少，梯度洗脱的时候可以全部收集在同一个管子里吗？
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lvqiulun 谢谢大侠。我想问一下能够清楚的讲一下等电点ph与交换柱的选择之间的关系吗？另外，ph该如何试？（用几管ph梯度的缓冲液加入介质，然后上样，跑胶，观察上清蛋白量？）因为之前已经his纯化了一次，杂蛋白相对较少，梯度洗脱的时候可以全部收集在同一个管子里吗？缓冲液的PH＝pI值＋1，上阴离子柱，＝pI值－1，上阳离子柱，一般缓冲液ph范围在6.5～8.5之间，与PI值相差1个PH是比较理想的。如果不清楚PI值，可以将蛋白溶到PH梯度的缓冲液里，然后分别试阳离子和阴离子填料（50ul左右得体积就够了），看那个PH下挂得好。
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我用SP柱纯化过等电点为9.6的蛋白，用的缓冲是pH6.5等MES，很好，我建议你用小试的方法摸摸条件，在保证蛋白不变性的条件下都可以去尝试了，能挂上，能洗下来就行，文献可以参考，不过实践是最重要的
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关于你说的如何选择pH，我觉得首先要考虑的是多肽稳定性的问题，即你的多肽在你选择的pH范围内是稳定的。其次再考虑你的pH范围，如果你是选择pH差异洗脱，因为你的多肽等电点较高，你可以根据柱子的情况从容选择合适的pH梯度，如果是利用盐溶度洗脱，如果你的多肽对pH不敏感的话，我觉得选择阳离子柱，从中性pH开始试一试纯化是个不错的选择。另外CM52 纤维素柱还是不要做了，太古老了。
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