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水产品加工及贮藏工程考研
　　1、学科简介
　　水产品加工及贮藏工程是食品科学与工程一级学科下设的二级学科。本专业主要研究水产资源加工制品的化学组成、特性、相互作用关系及其在加工过程中的变化规律，利用现代保藏原理和加工技术，开发各种水产食品。
　　2、专业培养目标
　　在大学本科毕业的基础上，进一步系统地掌握本专业的理论、实验技术和现代科学知识，提高思维能力和创新能力，掌握科学研究方法，使学生具有本专业较扎实的基础理论，熟悉本专业的科技发展动向，能熟练阅读本专业的外文资料，具有较强的独立分析问题和解决问题的能力，培养出适应水产品加工及贮藏工程领域科研、教学、生产、管理所需要的高层次人才。
　　3、专业方向
　　01水产品加工技术研究
　　02水产品的保鲜及贮藏新技术的研究
　　03水产品生物化学工程与功能性食品的研究
　　4、考试科目
　　①101思想政治理论
　　②201英语一203日语选一
　　③315化学(农)
　　④808食品微生物学与食品生物化学
　　(注：各个学校专业方向，考试科目有所不同，以上以中国农业大学为例)
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生物技术在水产品贮藏加工及质量安全控制中的应用
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官方公共微信71水产品中致病微生物的快速检测方法
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71水产品中致病微生物的快速检测方法
第１期；２００６年３月；第６卷；中国食品学报；ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＩｎｓｔｉｔｕｔ；Ｖｏｌ．６Ｎｏ．１Ｍａｒ．２００６；水产品中致病微生物的快速检测方法；杨文鸽；孙翠玲；潘云娣；候温甫；宁波３１５２１１）；（宁波大学生命科学与生物工程学院；摘要；阐述几种水产品中致病微生物的快速检测方法，这些方；利保障；关键词文章编号；水产品致病微生物快速检测；１
第１期２００６年３月第６卷中国食品学报ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＦｏｏｄＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙＶｏｌ．６Ｎｏ．１Ｍａｒ．２００６水产品中致病微生物的快速检测方法杨文鸽孙翠玲潘云娣候温甫宁波３１５２１１）（宁波大学生命科学与生物工程学院摘要阐述几种水产品中致病微生物的快速检测方法，这些方法的应用和发展将为水产品的质量安全提供有利保障。关键词文章编号水产品致病微生物快速检测１００９－７８４８（２００６）０１－０４０２－０５水产品中的致病微生物包括以下几类：一是水产品自身原有的细菌，这类细菌广泛分布于水中，如冷源性细菌肉毒杆菌（ＣｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍＢｏｔｕｌｉｎｕｍ）和单核李斯特菌（Ｌｉｓｔｅｒｉａｍｏｎｏｃｙｔｏｓｅｎｓ），噬热性致病菌如霍乱弧菌（Ｖｉｂｒｉｏｃｈｏｌｅｒａｅ）、副溶血弧菌（Ｖｉｂｒｉｏｐａｒａｈａｅｍｏｌｙｂｃｕｓ）；二是人为污染的细菌，主要存在于人和动物肠道内及被人或动物粪便污染的水环境中，常见的有沙门氏菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌｕｓ大、检验周期长（６￣７ｄ）、特异性不强等缺点，不能达到新鲜水产品贮藏时间短、需要快速检测的要求。随着现代生物技术的发展，生物技术检测方法以其简单、快速、专一、微量、准确等优点，在水产品检测尤其是致病微生物检测方面显示了巨大的应用潜力。本文简要论述了以ＤＮＡ或免疫学为基础，快速检测水产品中致病微生物的方法。ｓｐ．）、志贺氏菌（Ｓｈｉｇｅｌｌａｓｐ．）、大肠杆菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ．）和金黄色葡萄球菌（Ｓｔａｐｇｙｃｏｃｕｓａｕｒｅａｓ）等；此外还包括一类病毒，主要以双壳软体动物为载体，如甲型肝炎病毒（Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ－ｔｙｐｅＡ，１聚合酶链式反应（ＰＣＲ）技术聚合酶链式反应ＰＣＲ（ＰｏｌｙｍｅｒａｓｅＣｈａｉｎＲｅａｃｔｉｏｎ）是美国科学家Ｍｕｌｌｉｓ于ｌ９８３年发明的一种在体外快速扩增特定基因或ＤＮＡ序列的方法，故又称为基因的体外扩增法。它可以在试管中建立反应，数小时后能将极微量的目的基因或某一特定的ＤＮＡ片段扩增数十万乃至千百万倍，即可将皮克（ｐｇ）水平的ＤＮＡ特异地扩增到能够检测的微克（μｇ）水平，无须通过繁琐费时的基因克隆程序，便可以获得足够数量的精确的ＤＮＡ拷贝。目前ＰＣＲ技术已广泛应用于微生物病原的检测、基因克隆、基因分离、序列ＤＮＡ多态性分析、分析等领域，同时也频繁地被应用于水产品中致病微生物的快速检测。霍乱弧菌、副溶血弧菌及创伤弧菌是引起人类肠道急性传染疾病的三大病原菌，也是国际检验、检疫的重要菌株。钟凯［１］等利用副溶血性弧菌的ｔｌ基因为靶序列，设计１对引物，其ＰＣＲ扩增产物具有极好的特异性，对人工污染的冷冻虾仁、沙丁鱼的检出低限达到１０ｃｆｕ／ｇ。吴彩云等［２］以ｔｌ和ＨＡＶ）、诺伏克病毒（ＮｏｒｗａｌｋＶｉｖｕｓ）、雪山病毒（ＳｎｏｗＭｏｕｎｔａｉｎＡｇｅｎｔ）、杯状病毒（Ｃａｌｉｃｉｖｉｒｕｓ）、星状病毒（Ａｓｔｒｏｖｉｒｕｓ）、非甲非乙肝炎（Ｎｏｎ－ＡａｎｄＮｏｎ－Ｂ）病毒。致病微生物可通过水产食品对人产生危害，表现为胃肠炎、腹泻、发烧、呕吐、败血症、痢疾等主要症状。这些微生物所引起的食源性疾病是影响食品安全的主要因素之一。目前对水产及其加工品的微生物检验主要是针对一般的污染（如大肠杆菌、菌落总数）和致病菌（如沙门氏菌、副溶血性弧菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃氏菌等）。常规的微生物学检验通常以分离培养、生化试验及血清学试验来进行判断，具有操作复杂、手工劳动量收稿日期：２００５－０８－２５基金项目：宁波市博士基金项目（Ｎｏ．２００３Ａ６１０２０）作者简介：杨文鸽，女，１９６６年出生，副教授ｔｄｈ为靶基因，以单引物对的常规ＰＣＲ技术为参第６卷第１期水产品中致病微生物的快速检测方法４０３照，对双重ＰＣＲ（ｄ－ＰＣＲ）技术同时检测该两靶基因的可行性进行了研究，建立了一种快速、有效地检测副溶血弧菌有毒菌株的分子生物学方法。许龙岩等［３］根据霍乱弧菌Ｔ１３９、ｃｔｘＡ、ｔｃｐＡ和副溶血性弧菌ｔｄｈ基因，建立了利用多重－ＰＣＲ（ＭＰＣＲ）从罗飞鱼和牡蛎中快速检测霍乱弧菌和副溶血性弧菌的方法，探讨了运用该方法检测食品中霍乱弧菌和副溶血性弧菌的可能性。结果表明：ＭＰＣＲ用于污染的水产品检测，经过增菌培养，Ｏ１群霍乱弧菌的检测低限为２２ｃｆｕ／ｇ、Ｏ１３９群霍乱弧菌为５０ｃｆｕ／ｇ、副溶血性弧菌为６５ｃｆｕ／ｇ。在罗飞鱼和牡蛎中霍乱弧菌和副溶血弧菌只需增菌４ｈ就能被检出，整个实验在８ｈ内即可完成。何闪闪等［４］用ＰＣＲ技术对来自青岛市疾控中心的６株副溶血弧菌进行了分析，发现它们均含有ｔｌｈ基因，其中５株含有ｔｄｈ基因，但都不含ｔｒｈ基因；用碱性磷酸酯酶标记的ｔｌｈ探针和ｔｄｈ探针进行原位杂交，其鉴定结果与ＰＣＲ一致；同时采用随机引物扩增ＤＮＡ多态性技术对ｔｄｈ阳性菌株进行了分析。Ｋｕｍａｒ等也将ＰＣＲ技术用于印度传统海产品中沙门氏菌的检测［５］。韩悦等［６］对辽宁近海海域淤积海水样品及贝类中的甲型肝炎病毒（ＨＡＶ）ＲＮＡ的污染进行研究。他们采用石英粉滤柱法浓缩水样，并应用套式ＰＣＲ技术从鲅鱼圈月牙湾淤积海水中检出ＲＮＡ，结果表明月牙湾近海海域存在ＨＡＶ污染；同时应用抗原捕捉聚合酶链反应技术（ＡＣ－ＰＣＲ）在辽宁沿海地区的毛蚶、蚬等贝类中检出ＲＮＡ阳性。麻痹性贝毒（ｐａｒａｌｙｔｉｃｓｈｅｌｌｆｉｓｈｐｏｉｓｏｎｉｎｇ，ＰＳＰ）是一种由甲藻类浮游生物产生的麻痹性神经毒素，也是引起食用水产品中毒的主要原因之一。Ｌｕｃａ等［７］建立了ＰＣＲ快速检测Ａｌｅｘａｎｄｒｉｕｍ属和Ａ．ｍｉｎｕｔｕｍ污染贻贝中的所有毒素种类的方法，结果表明：ＰＣＲ是一种直接检测贻贝中目标浮游生物有效的、特异性强的方法。２实时定量ＰＣＲ技术实时定量ＰＣＲ技术是从传统ＰＣＲ技术发展而来，两者的基本原理相同，但定量技术原理不同。在实时定量ＰＣＲ技术中应用荧光染料和探针来保证扩增的特异性，并且荧光信号的强弱与扩增产物成正比，从而可以精确定量。实时荧光逆转录－ＰＣＲ方法是在常规逆转录－ＰＣＲ检测中加入１条荧光探针，无需电泳，不使用致癌物溴化乙锭，对研究人员和环境更安全。同时它能实时检测，与电镜法、ＥＬＩＳＡ法、普通逆转录－ＰＣＲ法相比具有敏感、特异和快速等特点。焦红［８］等以副溶血性弧菌的ｇｙｒａｓｅ基因序列设计并合成特异性引物和荧光标记探针，建立了荧光定量－ＰＣＲ技术检测冷冻虾、鱼片、鲈鱼、鳕鱼等水产品中副溶血性弧菌的方法，直接定量检测的检出低限为１０２ｃｆｕ／ｇ，若经过２４ｈ增菌培养，检出低限可以达到２ｃｆｕ／ｇ。诺伏克病毒是一种分布很广的肠道腹泻病毒，其污染的食品主要是贝类产品。国外从２０世纪８０年代开始研究诺伏克病毒，使用的方法有电镜法和免疫法等，但电镜技术只适用于早期病人粪便或呕吐物样本的诊断。由于诺伏克病毒的遗传多样性，限制了ＥＬＩＳＡ方法对所有病毒的检测。随着ＰＣＲ技术的不断成熟，应用逆转录－ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）检测诺伏克病毒的技术已越来越成熟。Ｄ．Ｎ．Ｌｅｅｓ［９］和ＤａｖｉｄＨ．Ｋｉｎｇｓｌｅｙ［１０］利用逆转录－ＰＣＲ技术检测贝类中的诺伏克病毒；国内潘文良等［１１］在常规逆转录－ＰＣＲ检测的基础上加入１条荧光探针，通过实时荧光逆转录－ＰＣＲ方法检测接种于牡蛎、文蛤中的诺伏克病毒；汪俊等［１２］应用甘氨酸洗脱、ＰＥＧ沉淀浓缩病毒粒子的方法处理尚未确定的诺伏克病毒污染的养殖太平洋牡蛎，并通过巢式ＰＣＲ检测牡蛎样品中的诺沃克病毒，建立了检测牡蛎中诺伏克病毒的方法，同时对我国牡蛎中存在的诺伏克病毒进行分类定位。在早期，利用多重嵌套式ＰＣＲ（ＡＢＣ－ＰＣＲ）扩增，从滤食性软体动物中提取的ＤＮＡ片段，通过分析ＰＣＲ扩增后的限制性片段和ＤＮＡ序列对人类粪便中的隐胞子虫（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍｓｐｐ）和贾第虫（Ｇｉａｒｄｉａｄｕｏｄｅｎａｌｉｓ）进行检测和鉴定。Ｃｏｕｓｏ等［１３］在贻贝的ＤＮＡ中插入隐胞子虫和贾第虫的基因片段，从而建立目标检测基因，再利用ＡＢＣ－ＰＣＲ方法检测，结果表明该法非常适用于贝类中隐胞子虫和贾第虫的检测。３免疫磁珠分离法（ＩＭＳ）免疫磁珠分离法可将特异性抗体偶联在磁性４０４中国食品学报２００６年第１期颗粒表面，与样品中被检致病微生物发生特异性结合，载有致病微生物的磁性微球在外加磁场的作用下向磁极方向聚集，因此可特异性地将目的微生物从样品中快速分离出来。Ｓｋｊｅｒｖｅ［１４］等用抗李斯特菌鞭毛抗原的单克隆抗体包被磁性微球，捕获增菌食物中的单核细胞增生性李斯特菌。Ｔｏｍｏｙａｓｕ［１５］用免疫磁性分离技术成功地从引起食物中毒的食物中分离出副溶血性弧菌。张凡飞［１６］利用免疫磁珠法从蛤肉中检出了产生耐热直接溶血毒素（ＴＤＨ）的副溶血性弧菌，该方法与一般细菌培养分离法相比，极大地提高了食品中病原性副溶血性弧菌的检出率。与常规检验方法相比，免疫磁性分离技术具有显著的优点，可以快速地从含有大量杂菌的悬液中有选择地分离出目的微生物。若与直接镜检技术、酶联免疫技术、ＰＣＲ等快速检测方法相结合，免疫磁性分离技术可大大提高致病微生物的检测效率。俞晓进［１７］等建立了免疫捕获－ＲＴ－ＰＣＲ技术，即先用ＩｇＧ抗体吸附标本中的甲型肝炎病毒（ＨＡＶ），然后将ＨＡＶ中的ＲＮＡ逆转录成ｃＤＮＡ。用ＰＣＲ方法扩增，改变了常规的核酸提取法等的繁琐步骤。该方法灵敏、特异，其灵敏度相当于逆转录－ＰＣＲ方法结合打点杂交。将食品中的单核细胞增多性李斯特菌进行免疫磁性分离，并与ＰＣＲ方法相结合，建立了检测食品中单核细胞增多性李斯特菌的ＩＭＳ－ＰＣＲ方法。检测表明，该方法能够有效地克服食品基质、培养基成分和杂菌对ＰＣＲ检测的干扰，且敏感度高、检测时间短、结果准确。４酶联免疫吸附技术（ＥＬＩＳＡ）酶联免疫吸附技术（ＥＬＩＳＡ）始于１９７１年，Ｅｎｇｖａｌｌ和ｐｅｒｌｍａｎｎ用碱性磷酸酶标记的ＩｇＧ定量测定ＩｇＧ。随着单克隆抗体技术的发展及免疫试剂盒的商业化，目前ＥＬＩＳＡ已广泛应用于临床医学、生物学、分析化学、食品分析等领域。和其它免疫法一样，ＥＬＩＳＡ以抗体和抗原的特异性结合为基础，以酶或辅酶为标记物，标记抗原或抗体，用酶促反应的放大作用来显示初级免疫学反应。ＥＬＩＳＡ法检测水产品中的药残、农残、毒素的报道很多。水产品中常见的致病菌，例如沙门氏菌、李斯特菌、大肠杆菌等也可以通过该方法进行检测。王文等建立了３种斑点ＥＬＩＳＡ（ＤＯＴ－ＥＬＩＳＡ、ＳＰＡ－ＤＯＴ－ＥＬＩＳＡ、ＢＡ－ＤＯＴ－ＥＬＩＳＡ）快速检测水产品中副溶血性弧菌的方法。这些方法简便、快速，均可在２２￣２４ｈ内报告结果，比常规法快４￣６ｄ，而且稳定性好，不与溶藻性弧菌、亲水气单孢菌等１３种杂菌发生交叉反应。有些细菌，如副溶血性弧菌、幽门螺杆菌、大肠杆菌等在低温贫营养的条件下可进入“活的非可培养状态”（ｖｉａｂｌｅｂｕｔｎｏｎｃｕｌｔｕｒａｂｌｅｓｔａｔｅ，ＶＢＮＣ）。它们在适当的条件下还可以复苏，且仍具有致病力。常规的培养法无法检测到处于该状态下的细菌，造成漏检。许多研究结果证实了进入ＶＢＮＣ的细菌仍然保持着和正常细菌一样的表面抗原，故可以利用免疫学技术进行检测。姚斐等研究了用间接ＥＬＩＳＡ检测ＶＢＮＣ大肠杆菌Ｏ１５７∶Ｈ７，显示了ＥＬＩＳＡ在这方面的应用潜力［１８］。韩伟［１９］针对易进入ＶＢＮＣ的弯曲菌属的１６ｓＲＮＡ，将ＰＣＲ与自动酶联免疫荧光分析方法相结合，建立了快速、灵敏、高效、特异、稳定的检测水产品暂养水样中弯曲菌属的方法。将ＰＣＲ技术与酶联免疫技术相结合，即ＰＣＲ－ＥＬＩＳＡ技术，用于大肠杆菌的检测，也取得了不错的效果。应用酶联免疫技术制造的全自动免疫分析仪，是用荧光分析技术通过固相吸附器，用已知抗体来捕捉目标生物体，然后以带荧光的酶联抗体再次结合，经充分冲洗，通过激发光源检测，即能自动读出发光的阳性标本。其优点是检测灵敏度高、速度快，可以快速鉴定沙门氏菌、大肠杆菌０１５７：Ｈ７、单核李斯特菌、空肠弯曲杆菌和葡萄球菌肠毒素等。５基因芯片技术基因芯片技术是将各种基因寡核苷酸点样于芯片表面，微生物样品ＤＮＡ经ＰＣＲ扩增后制备荧光标记探针，再与芯片上寡核苷酸点杂交，最后通过扫描仪定量并分析荧光分布模式来确定检测样品是否存在某些特定微生物。基因芯片技术可以对环境中的微生物实现高通量和并行检测。它在理论上可以在一次实验中检出所有潜在的致病原，可以用同一张芯片检测某一致病原的各种遗传学指标；同时具有灵敏、特异和快速便捷等优第６卷第１期水产品中致病微生物的快速检测方法４０５点，因而在致病微生物检测中有很好的发展前景。水产品安全检测中的重要的内容。在生产、销售等环节进行病原微生物的检测，若使用常规培养法，存在操作繁琐、速度慢、效率低等问题。而以微生物特异遗传因子或其免疫特性为指标来测定微生免疫法、基因芯片技术等具有物数量的ＰＣＲ法、很高的应用价值，能检测出未表现出明显症状或大规模爆发以前的致病微生物并对其进行准确预报和预防。ＰＣＲ技术可使微量特定的ＤＮＡ片段在短时间内迅速扩增到百万倍，极大地提高了检出的灵敏度和速度，但在实际应用中存在假阳性多的现象。此外，当实验条件不当时引物易突变，引物设计及靶序列选择不当时可能降低灵敏度和特异性等问题。而基因芯片技术虽然避免了ＰＣＲ技术的缺陷，但是其费用过高，使其产业化还需要时间和资金的投入。随着分子生物学技术的不断发展和成熟，多种诊断技术的综合运用，对水产品致病微生物的检测必将发挥重要的作用。Ｂｏｒｕｃｋｉ等［２０］构建的混合基因组微阵列可准确鉴别各种近缘单核增多李斯特菌分离物；Ｖｏｌｏｋｈｏｖ［２１］通过单管复合体扩增和基因芯片技术检测和鉴别６种李斯特菌；Ｃａｌｌ等［２２］通过分析Ｅ．ｃｏｌｉＯ１５７∶Ｈ７的Ｓｈｉｇａ样毒素Ⅰ、Ｓｈｉｇａ样毒素Ⅱ及溶血素Ａ，发现基因芯片可准确检测各种Ｅ．ｃｏｌｉＯ１５７∶Ｈ７分离物。用一种方法采集、处理和分析食品中的各种致病微生物是人们所追求的。目前虽然在样品采集、处理以及基因芯片技术等方面取得了很大的进展，然而要更广泛地应用基因芯片技术检测食品微生物，还需解决诸如建立标准化程序、降低检测费用、简化样品制备和标记操作、进一步提高检测的特异性等一系列问题。基因芯片技术在水产品致病微生物检测中的应用研究也有待进一步加强。６结语及时、准确地检出水产品中的致病微生物是参考文献（４）：１．钟凯，田静，李业鹏等．食品中副溶血性弧菌ＰＣＲ快速检测方法的研究［Ｊ］．中国食品卫生杂志，２００４，１６，３１７￣３２０２．吴彩云，蔡俊鹏，杨汝德．双重ＰＣＲ检测携带有ｔｌ和ｔｄｈ基因的副溶血弧菌毒力菌株［Ｊ］．水产科学，２００４，２３（５）：５￣９３．许龙岩，周宏斌，高东微等．ＭＰＣＲ检测食品中霍乱弧菌和副溶血性弧菌的研究［Ｊ］．卫生研究，２００５，３４（１０）：１１５￣１１８４．何闪闪，薛长湖，李兆杰等．海产食品致病性副溶血性弧菌基因检测［Ｊ］．中国食品学报，２００３，增刊：１５９￣１６４５．ＫｕｍａｒＨ．Ｓ．，ＳｕｎｉｌＲ．，ＶｅｎｕｇｏｐａｌＭ．Ｎ．ｅｔａｌ．ＤｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＳａｌｍｏｎｅｌｌａｓｐｐ．ｉｎｔｒｏｐｉｃａｌｓｅａｆｏｏｄｂｙｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ［Ｊ］．ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＪｏｕｒｎａｌｏｆＦｏｏｄＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，２００３，８８：９１￣９５６．韩悦，石有昌，周宝余等．从污染的淤积海水及贝类中检出甲型肝炎病毒ＲＮＡ［Ｊ］．环境与健康杂志，２００１，１８（１）：２７￣２８７．Ｌｕｃａ．，ＡｎｔｏｎｅｌｌａＰ．，ＥｌｅｎａＢ．ＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆａｑｕａｌｉｔａｔｉｖｅＰＣＲｍｅｔｈｏｄｆｏｒｔｈｅＡｌｅｘａｎｄｒｉｕｍｓｐｐ．（Ｄｉｎｏｐｈｙｃｅａｅ）ｄｅｔｅｃｔｉｏｎｉｎｃｏｎｔａｍｉｎａｔｅｄｍｕｓｓｅｌｓ（Ｍｙｔｉｌｕｓｇａｌｌｏｐｒｏｖｉｎｃｉａｌｉｓ）［Ｊ］．ＨａｒｍｆｕｌＡｌｇａｅ，２００５，５７：１５７￣１６２８．焦红，王方全，程刚等．用ＦＱ－ＰＣＲ方法快速检测水产品中副溶血性弧菌［Ｊ］．检验检疫科学，２００４，１４（６）：４０￣４３９．ＬｅｅｓＤ．Ｎ．，ＨｅｎｓｈｉｌｗｏｏｄＫ．ｅｔａｌ．ＤｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｓｍａｌｌｒｏｕｎｄｓｔｒｕｃｔｕｒｅｄｖｉｒｕｓｅｓｉｎｓｈｅｌｌｆｉｓｈｂｙＲＴ－ＰＣＲ［Ｊ］．Ａｐｐｌ．Ｅｎ－ｖｉｒｏｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，１９９５，６１：４４１８￣４４２４１０．ＤａｖｉｄＨ．Ｋｉｎｇｓｌｅｙ，ＧａｒｙＰ．Ｒａｐｉｄａｎｄｅｆｆｉｃｉｅｎｔｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｆｏｒｒｅｖｅｒｓｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ－ＰＣＲｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｈｅｐａｔｉｔｉｓＡａｎｄｎｏｒｗａｌｋ－ｌｉｋｅｖｉｒｕｓｅｓｉｎｓｈｅｌｌｆｉｓｈ［Ｊ］．Ａｐｐｌ．Ｅｎｖｉｒｏｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，２００１，６７：４１５２￣４１５７１１．潘文良，张舒亚．贝类产品中诺沃克病毒的实时荧光ＲＴ－ＰＣＲ检测方法研究［Ｊ］．检验检疫科学，２００４，１４（５）：１￣３１２．汪俊，薛长湖，李兆杰等．太平洋牡蛎中诺瓦克样病毒的ＲＴ－ＰＣＲ法检测和病毒聚合酶区部分序列的分析［Ｊ］．中国水产科学，２００４，（１２）：５２５￣５３０１３．ＣｏｕｓｏＨ．Ｇ．，ＳａｎｔｏｓＦ．Ｆ．，ＡｍａｒＣ．Ｆ．Ｌｅｔａｌ．ＤｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＣｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍｓｐｐａｎｄＧｉａｒｄｉａｉｎｍｏｌｌｕｓｃａｎｓｈｅｌｌｆｉｓｈｂｙ４０６中国食品学报ｍｕｌｔｉｐｌｅｘｅｄｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ［Ｊ］．ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＪｏｕｒｎａｌｏｆＦｏｏｄＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，２００４，９１：２７９￣２８８２００６年第１期１４．ＳｋｊｅｒｖｅＥ．，ＲｏｒｖｉｋＬＭ，ＯｌｓｖｉｋＯ．ＤｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＬｉｓ－ｔｅｒｉａｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓｉｎｆｏｏｄｂｙｉｍｍｕｎｏｍａｇｎｅｔｉｃｓｅｐａｒａｔｉｏｎ［Ｊ］．ＡｐｐｌＥｎｖｉｒｏｎＭｉｃｒｏｂｉｏｌ，１９９０，５６：３４￣７８１５．ＴｏｍｏｙａｓｕＴ．ＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｔｈｅｉｍｍｕｎｏｍａｇｎｅｔｉｃｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔｍｅｔｈｏｄｓｅｌｅｃｔｉｖｅｆｏｒＶｉｂｒｉｏｐａｒａｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓｓｅｒｏｔｙｐｅＫａｎｄｉｔｓａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｔｏｆｏｏｄｐｏｉｓｏｎｉｎｇｓｔｕｄｙ［Ｊ］．ＡｐｐｌＥｎｖｉｒｏｎＭｉｃｒｏｂｉｏｌ，１９９２，５８：２６￣７９１６．张凡飞，杉山宽治．利用免疫磁珠法分离环境及食品中产生ＴＤＨ副溶血性弧菌的研究［Ｊ］．中国卫生监督杂志，２００４，１１（１）：７￣９１７．俞晓进，朱荣，史智扬等．应用免疫捕获－逆转录－聚合酶链反应检测海域贝类中的甲肝病毒［Ｊ］．疾病监测，１９９８，１３（６）：２２５￣２２７１８．叶玫，吴成业，刘海新．酶联免疫吸附法在水产品安全检测中的应用［Ｊ］．上海水产大学学报，２００２，１１（２）：１７１￣１７５１９．韩伟，顾鸣．聚合酶链反应与自动荧光免疫酶标检测弯曲菌属的试验［Ｊ］．检验检疫科学，２００３，１３（３）：３２￣３４２０．ＢｏｒｕｃｋｉＭ．Ｋ．ＤｉｓｃｒｉｍｉｎａｔｉｏｎａｍｏｎｇＬｉｓｔｅｒｉａｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓｉｓｏｌａｔｅｓｕｓｉｎｇａｍｉｘｅｄｇｅｎｏｍｅＤＮＡｍｉｃｒｏａｒｒａｙ［Ｊ］．ＶｅｔＭｉｃｒｏｂｉｏｌ，２００３，９２：３５１￣３４２２１．ＶｏｌｏｋｈｏｖＤｅｔａｌ．ＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＬｉｓｔｅｒｉａｓｐｅｃｉｅｓｂｙｍｉｃｒｏａｒｒａｙ－ｂａｓｅｄａｓｓａｙ［Ｊ］．ＪＣｌｉｎＭｉｃｒｏｂｉｏｌ，２００２，４０：４７２０￣４７２８２２．ＣａｌｌＤ．Ｒ．ＤｅｔｅｃｔｉｎｇａｎｄｇｅｎｏｔｙｐｉｎｇＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉＯ１５７：Ｈ７ｕｓｉｎｇｍｕｌｔｉｐｌｅｘｅｄＰＣＲａｎｄｎｕｃｌｅｉｃａｃｉｄｍｉｃｒｏａｒｒａｙ［Ｊ］．ＩｎｔＪＦｏｏｄＭｉｃｒｏｂｉｏｌ，２００１，６７：７１￣７８ＲａｐｉｄＤｅｔｅｃｔｉｏｎＭｅｔｈｏｄｓｏｆＰａｔｈｏｇｅｎｉｃＭｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｆｒｏｍＡｑｕａｔｉｃＦｏｏｄｓＹａｎｇＷｅｎｇｅＳｕｎＣｕｉｌｉｎｇＰａｎＹｕｎｄｉＨｏｕＷｅｎｆｕ（ＦａｃｕｌｔｙｏｆＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＮｉｎｇｂｏＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎｉｎｇｂｏ３１５２１１）ＡｂｓｔｒａｃｔＳｅｖｅｒａｌｒａｐｉｄｄｅｔｅｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｓｏｆｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｆｒｏｍａｑｕａｔｉｃｆｏｏｄｓｗｅｒｅｉｎｔｒｏｄｕｃｅｄ．Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎａｎｄｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｔｈｅｓｅｍｅｔｈｏｄｓｗｉｌｌｇｕａｒａｎｔｅｅｓｅｆｆｅｃｔｉｖｅｌｙｔｈｅｓｅｃｕｒｉｔｙｏｆａｑｕａｔｉｃｆｏｏｄｓ．ＫｅｙｗｏｒｄｓＡｑｕａｔｉｃｆｏｏｄＰａｔｈｏｇｅｎｉｃｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍＲａｐｉｄｄｅｔｅｃｔｉｏｎ包含各类专业文献、应用写作文书、中学教育、专业论文、外语学习资料、生活休闲娱乐、71水产品中致病微生物的快速检测方法等内容。
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