triton x 114-100是干什么用的

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2015-06-16 04:55 标签： triton
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【求助】有关Triton X-114提取膜蛋白的问题
各位同仁：
小弟我现在想用Triton X-114提取膜蛋白，Triton X114能与水在4度混溶，而在37度能形成水相和去污剂相。但我在做试验时将Triton X114水溶液37度水浴5min后，Triton X114溶液并没有变混浊，离心后也不会分层。这究竟是什么原因,敬请各位赐教！一般使用triton114含量是1-2%，除此之外还要在溶液中加入tri和nacl作为缓冲体系，你可先用配好的试剂做一个空白试验，应该是可以的先用40mmtri破碎细胞，然后再用triton114处理我是在将细胞重悬在10mMTris，150mMNaCl，pH7.4的TBS中，然后加入终浓度1％的Triton X-114 。在4度混匀、离心取上清，移到37度没有预计的云雾状出现。再请问市售的Triton X-114 是液体的吗，国外的材料上好像说是固体的。是液体的.我们用的就是一个大瓶子,纯的非常粘稠你是室温离心吗？是啊。上清移到37度没有一点cloudy的感觉，然后放在室温（至少20度）5000rpm离心10min，没有分层。空白实验我也做了，就是把1ml的Triton X-114 溶解在100ml的10mMTris，150mMNaCl，pH7.4的TBS中，混匀后移到37度，没有...Triton-114是很粘稠的，国内华美、生工都有分装。它的溶解原理是 在低温（4度）的时候溶解度高，根据有机物相似相溶的原理这时膜蛋白就会和Triton-114相溶；在37度反而溶解度低，从而将大部分Triton-114连同膜蛋白一起析出分在下层有机相。根据你的描述，没有分层可能有三个原因1.可能你用的管太大，1.5mLEp管和50mL离心管的分离效果差很多2.离心的时候要用水平转头，2000rpm 离心5－10min就行，离心完毕，小心取出就可以看到分层。3.可能你Triton-114的配制方法不对，我是将Triton-114加入TBS（10mMTris，150mM NaCl，pH7.4）中形成终浓度1%的Triton-114，保存在4度，用时直接重悬细胞，冰浴作用30分钟后放入37度作用5-10分钟（根据管子大小），水平转头离心。一些后续步骤：将上述沉淀（Triton-114与膜蛋白的混合物）加入9倍体积冰冻丙酮，冰浴40分钟，10000rpm离心20-30分钟，这时就可以将上层的丙酮和Triton-114一起去除，从而得到膜蛋白。谢谢lxd777指教！另外，是否可以用肉眼看到37度形成的云雾状？如果将含有1%Triton-114的TBS（10mMTris，150mM NaCl，pH7.4）从4度移到37度5min是否也能分层？这也主要取决于你用的管大小，小管可以看到云雾状，大管可以看到明显的分层界限，从4度移到37度理论上来说应该也能分层。我用的也是1.5ml的离心管，可就是没有云雾。我的试剂是Amresco分装的，应该不会有问题。另外，为什么用水平转子，用角转子不行吗。谢谢水平转头在高速旋转的时候容易使有机相和水相保持分层状态，而角转子是不可能保持两相分离的状态，自然就达不到分离膜蛋白的目的呀，两种不同转子离心原理不同啦。建议你按我上述的方法操作一遍。lxd777 ，还有一事请教。终浓度1％的Triton X-100的TBS作用，约1ml（置于1.5mlEP管中）离心后通常可以得到的去污剂相有多大体积？有机相体积有多大，小于0.5ml吧，这很重要吗？我觉得你只要分层清晰就行了。沉淀（Triton-114与膜蛋白的混合物）可以直接加sds loading buffer跑SDS PAGE么？我用角转也能分层啊~你的样本中是否还有其他成分,如高浓度的盐影响分层?hdq303 wrote:沉淀（Triton-114与膜蛋白的混合物）可以直接加sds loading buffer跑SDS PAGE么？没问题我把去垢相（Tritonx-114与膜蛋白的混合物）加水调至和水相相同的体积，直接加loading buffer，跑SDS-PAGE，去垢相几乎没有什么带，水相的蛋白带很清楚，这是怎么回事啊？hdq303 wrote:我把去垢相（Tritonx-114与膜蛋白的混合物）加水调至和水相相同的体积，直接加loading buffer，跑SDS-PAGE，去垢相几乎没有什么带，水相的蛋白带很清楚，这是怎么回事啊？那就沉淀一下吧请教各位战友是否膜蛋白的提取方法和胞浆蛋白的提取方法不一样?用的裂解液也不同吗?感谢michael11 wrote:我用角转也能分层啊~你的样本中是否还有其他成分,如高浓度的盐影响分层?我的裂解液是10mMTris，150mMNaCl，pH7.4的TBS，10mM的PMSF和10ug/ml的Aprotinin，盐浓度不会很高啊，不致影响分层。而且，我用纯水配成1％的TritionX114溶液，可是37度也没有cloudy。按照lxd777 战友的建议，我用水平转子离心，可是结果一样。为什么没有人回答我的问题啊,tritionX114是那个公司的啊，那里有售，再次感谢那为高手说一下啊，急等用啊，感谢我也按楼上的方法做的,用丙酮沉淀以后可以看到白色的渣渣状东西,可是离心后放一会就变的透明,我师姐说那些可能是糖类,跑一向电泳,没有条带,成弥散状,就象瀑布一样,请问这是怎么回事?如何解救呢??我做的是酵母TBS含Triton X-114重悬细胞后是否影响超声裂解细胞？
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100() 是一种（或称去污剂）。分子量为646.86（C34H62O11）。它能溶解脂质，以增加抗体对细胞膜的通透性。中Triton X-100常用浓度为1%和0.3%，其中1%的Triton X-100常用于漂洗组织标本，0.3%的Triton X-100则常用于稀释血清，0.1%的Triton X-100常用于LAMP（环介导等温扩增），配制BSA等。但通常是先配制成30%的Triton X-100储备液，临用时稀释至所需浓度。外文名Triton X-100类&&&&型同义词聚氧乙烯辛基苯基醚形&&&&态液体分子式C14H22O(C2H4O)n
取Triton X-100及PBS（或TBS）混合，置37℃～40℃水浴中2～3h，使其充分溶解混匀。用前取该储备液稀释至所需浓度。Triton X-100可广泛的应用于不同的学科领域。在显微镜和实验室，其稀释的溶液可作为润湿剂，协助染色，并可作为清洁剂对钻石刀进行清洁。
在电子工业领域，该产品的作为晶片清洁剂，以便增强和加速某些程序和操作。Triton X-100可以在晶片表面形成一层薄膜，该薄膜可使用标准抗蚀剂剥离膜技术或 SPI Plasma Prep II 等离子蚀刻机的氧蚀刻进行清除。
在生命科学领域，该产品经常被用于水中帮助分解蛋白酶；但是，必须使用尽可能低的浓度否则会污染样品，污染还会影响MS分析。
基因工程中还用作的缓冲液（NEBuffer EcoRI）的成分之一 配比：
该产品通常还作为聚合乳液的配方使用。
新手上路我有疑问投诉建议参考资料 查看TWEEN&and&Triton&X&-100
　　吐温是(TWEEN)的音译,也叫吐温型，为（Span，脂肪酸酯）和的缩合物，为一类非离子型去污剂。
　　化学名称：
　　聚氧乙烯失水山梨醇酯，简称聚山梨酯(Polysorbate)，
　　产品系列：
　　由于司盘为山梨醇与不同高级脂肪酸所形成的酯，故吐温实际上是同类型的系列产品，在一般精细化工店或化学试剂公司分20，40，60，80好多种，根据不同的需要来选用。
　　吐温20(TWEEN-20)、吐温21(TWEEN-21)、吐温40(TWEEN-40)、吐温60(TWEEN-60)、吐温61(TWEEN-61)、吐温80(TWEEN-80)、吐温81(TWEEN-81)、吐温85(TWEEN-85)
　　吐温-60为酯；吐温-80为酯；吐温-20为酯，为聚氧乙烯去水山梨醇单月桂酸酯和一部分聚氧乙烯双去水山梨醇单月桂酸酯的混合物。
　　外观和性状：
　　淡黄色至琥珀色油状液体或膏状物，溶于水、乙醇、油脂等。
　　原理：
　　由于聚山梨酯分子中有较多的亲水性基团一聚氧乙烯基，故亲水性强，为一种非离子型去污剂。
　　作用与用途：
　　1.生物学实验中乳化蛋白，在使用时，Tween 和同类型的Triton
X-1OO(聚乙二醇辛基苯基醚)非离子型去污剂不破坏蛋白的结构，可减少对蛋白质之间原有的相互作用的破坏。离子型去污剂如SDS则破坏蛋白的结构。
在生物学实验中作封闭剂，封闭剂应该封闭所有未结合位点而不替换膜上的靶蛋白、不结合靶蛋白的标委、也不与抗体或检测试剂有交叉反应。Tween-20有复性抗原的作用，可提高特异性的识别能力。在做westen
blot时，用惰性蛋白质或非离子去污剂封闭膜上的未结合位点，可以降低抗体的非特异性结合。最常见的封闭剂是BSA、脱脂奶粉、酪蛋白、明胶和Tween-20（0.05
& 0.1%）稀溶液。
　　3.常作为水包油（O/W）型乳化剂，使其他物质均匀在溶液中分散，主要用于农药、食品、化妆品。与其他乳化剂如月桂醇硫酸钠或司盘类合用，能增加乳剂的稳定性。吐温可用来使精油乳化后溶解于水液体中，完全发挥作用。相对来说，吐温20更温和一些，吐温80的乳化性更强一些。
　　4.药用：
　　（1）可作某些药物的增溶剂。
　　（2）有溶血作用，以吐温-80作用最弱。
　　（3）水溶液加热后可产生混浊，冷后澄明，不影响质量。
　　（4）在溶液中可干扰抑菌剂的作用。
Triton X-100
Triton X-100是一种非离子型表面活性剂（或称去污剂），它能溶解脂质，以增加抗体对细胞膜的通透性。1%的Triton
X-100常用于漂洗组织标本，0.3%的Triton X-100则常用于稀释血清，配制BSA等，0.25%的Triton X-100
常用于细胞的通透。
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