鸡血紫檀融合时要注意哪些

动物细胞融合,用鸡血做材料做实验要那些材料,试剂,仪器,和注意事项_作业帮
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动物细胞融合,用鸡血做材料做实验要那些材料,试剂,仪器,和注意事项
动物细胞融合,用鸡血做材料做实验要那些材料,试剂,仪器,和注意事项
【实验原理】在诱导物(如仙台病毒,聚乙二醇)作用下,相互靠近的细胞发生凝集,随后在质膜接触处发生质膜成份的一系列变化,主要是某些化学键的断裂与重排,进而细胞质沟通,形成一个大的双核或多核细胞(此时称同核体或异核体). 【实验目的】1.了解PEG诱导细胞融合的基本原理.2.通过PEG诱导鸡红细胞之间的融合实验,初步掌握细胞融合技术. 【仪器、材料及试剂】1.仪器:显微镜 离心机 天平 离心管 注射器 细滴管 载片、盖片.2.材料:一龄公鸡静脉血3.试剂:Alsever溶液、GKN溶液、0.85%生理盐水、50%PEG溶液、双蒸水.
附试剂的配配制:①Alsever溶液:葡萄糖 2.05g,柠檬酸钠0.80g,NaCl 0.42g,溶于100ml双蒸水中.
②GKN溶液:NaCl 8g,KCl 0.4g,Na2HPO4·2H2O 1.77g,NaH2PO4.H2O 0.69g,葡萄糖 2g,酚红 0.01g,溶于1000ml双蒸水中.③0.85%生理盐水
④50%PEG溶液:称取一定量的PEG(WM=4000)放入烧杯中,沸水浴加热,使之熔化,待冷却至50℃时,加入等体积预热至50℃的GKN溶液,混匀,置37℃备用.
【操作步骤】1.在公鸡翼下静脉抽取2 ml鸡血,加入盛有8 ml的Alsver液中,使血液与Alsver液的比例达1:4,混均后可在冰箱中存放一周.2.取此贮存鸡血1ml加入4ml 0.85%生理盐水,充分混均,800rpm离心3min,弃去上清,重复上述条件离心两次.最后弃去上清,加GKN液4ml,离去.3.弃去上清,加GKN液,制成10%细胞悬液.4.取上述细胞悬液以血球计数器计数,用GKN液将其调整为1×106个/ ml.5.取以上细胞悬液1 ml于离心管,放入37℃水浴中预热.同时将50%PEG液一并预热20min.6.20min后将0.5ml 50%PEG溶液逐滴沿离心管壁加入到1 ml细胞悬液中,边加边摇匀,然后放入37℃水浴中保温20min.7.20 min后,加入GKN溶液至8ml,静止于水浴中20 min左右.8.800rpm离心3min,弃去上清,加GKN溶液再离心1次.9.弃去上清,加入GKN液少许,混均,取少量悬浮于载玻片上,加入Janus green染液,用牙签混均,3min盖上盖玻片,观察细胞融合情况.10.计算融合率,融合率=视野内发生融合的细胞核总数/视野内所有细胞核总数×100%.GKN液在鸡血细胞融合实验中的作用?_作业帮
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GKN液在鸡血细胞融合实验中的作用?
GKN液在鸡血细胞融合实验中的作用?
首先看看GKN液的成份:NaCl 8g,KCl 0.4g,Na2HPO4.2H2O 1.77g,NaH2PO4.2H2O 0.69g,葡萄糖2g,酚红0.01g,溶于1000ml重蒸水中.看着没?这是模拟内环境啊!其中有缓冲对:磷酸一氢钠和磷酸二氢钠,维持细胞的正常形态和活性,使成为细胞悬液,便于融合啊!GKN液在鸡血细胞融合实验中的作用_作业帮
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GKN液在鸡血细胞融合实验中的作用
GKN液在鸡血细胞融合实验中的作用
首先应该可以为细胞提供一个合适的缓冲环境,细胞在体外很脆弱的,对于任何的介质变化、机械损伤都极为敏感;同时,葡萄糖的存在也起着调节渗透压的作用吧,细胞要保持形态和功能活性,渗透压的稳定是很重要的.化学因子诱导的细胞融合,如聚乙二醇(PEG);电场诱导的细胞融合;激光诱导的..
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鸡血细胞的体外融合PPT
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