为何细胞增殖实验中空白组OD值总是高于加药组?(细胞增殖,药物,促进作用,成骨细胞) - 细胞实验 - 生物秀
标题: 为何细胞增殖实验中空白组OD值总是高于加药组?(细胞增殖,药物,促进作用,成骨细胞)
摘要: [为何细胞增殖实验中空白组OD值总是高于加药组?(细胞增殖,药物,促进作用,成骨细胞)] 郁闷啊!我做的是药物对原代成骨细胞增殖的促进作用实验,最后用酶标仪测定时,无论阳性药还是受试药物,其OD值总高于空白对照组!我的细胞密度是3*10E3cell mL,200ul well 还有两次接种时:1 5*10E3cell mL,cell mL,200ul well 前者太稀,没长好,后者太密,长过头了 我该怎么办呢?那位高手能告诉我
关键词:[细胞增殖 药物 促进作用 成骨细胞 酶标仪 对照组 细胞密度]……
郁闷啊!我做的是药物对原代成骨细胞增殖的促进作用实验,最后用酶标仪测定时,无论阳性药还是受试药物,其OD值总高于空白对照组!我的细胞密度是3*10E3cell/mL,200ul/well.还有两次接种时:1.5*10E3cell/mL,200ul/5*10E3cell/mL,200ul/well.前者太稀,没长好,后者太密,长过头了.我该怎么办呢?那位高手能告诉我.....
回复对不起,无论阳性药还是受试药物,其OD值总低于空白对照组!药液浓度为:10E-4mol/L,10E-5mol/L,10E-6mol/L回复1，不知道你是用DMSO作为溶剂的吗？注意一下DMSO的浓度问题；这个是最可能的了。2，楼主保证了从种板到检测整个过程对实验组和对照组的操作都是相匹配的吗？有时偷懒没有吸出培养液而直接往干预组里头加药的，这个是不对的，有时枪尖会接触底部影响干预组的细胞生长的；3，总是低于空白对照组？？低于多少呢？如果超过20％的话，都可以认为药物是个增殖抑制了。阳性药都做不出结果，而且还是总是低于，看来和药物浓度和细胞接种密度没有太大关系。药物是不是污染了？！唉！实在是找不到其他的可能了，请高手支招哈。回复你的空白对照组的吸收值有多大，肉眼可见蓝紫色吗，如果有明显的颜色，估计你的空白对照有污染，要知道活的微细胞内也是有琥珀酸脱氢酶的，也可以还原MTT；如果空白没有明显的颜色，按照你说的“无论阳性药还是受试药物,其OD值总低于空白对照组!”，则试验组肯定也没有颜色了，可能的原因：1、细胞活率太差或都死掉了，根本没有和MTT反应，生产相关物质。建议用光学显微镜观察，如果确实有Formazan生产，光镜下是可见的；2、溶剂问题，溶剂有没有过期，有没有掺水等Good luck回复1、注意一下各组细胞接种密度是否均一，生长状态是否一致，这是MTT实验真实反映各组细胞活性差异的前提，一般细胞种板时应不断摇晃细胞悬液使之密度均一，另外注意每组细胞各孔OD值是否相差很大，如果标准差太大，则样本不能很好的代表总体。2、如果这些都没问题，就应该注意一下药物的配制问题，药物配制的时间（时间过久可能失效）、纯度（纯度不高会影响药效）、溶剂（DMSO控制终浓度千分之五以下）。3、另外，我想你研究的药物，很有可能对成骨细胞增殖作用不明显，你之所以设计这个实验是想看看药物对骨的促生长作用吧，不过要知道对骨的促生长作用还体现在对破骨细胞的抑制作用，我建议如果多次实验还是这个结果，不妨换个角度考虑一下，祝实验成功。回复十分感谢楼上的各位朋友帮我分析问题！我再把大家提出的问题说一下:1)在我最近做的一次中，细胞密度是3*10E3cell/mL,200ul/well，随机加药，最外一圈没有加药；全部是换液后加药的，应该没问题吧？！2）各孔OD值差别不是很大，标准差小于均值的1/10，也应该没事！3）DMSO与乙醇的浓度是千分之一，不会有问题吧！4）是大的可能就是我的细胞有支原体污染：每次瓶内培养时没有活动的小黑点，接到板上后就感觉这种东西特别的多（光镜下观察）。我做的是原代，听说支原体不好处理，我该怎么办呢？哪位能告诉。。。。。回复4）是大的可能就是我的细胞有支原体污染：每次瓶内培养时没有活动的小黑点，接到板上后就感觉这种东西特别的多（光镜下观察）。感觉支原体污染的可能性不大。因为你的孔间差异并不大，只要是微污染，不可能“各孔OD值差别不是很大，标准差小于均值的1/10”的。如果真的是支原体污染的话，那楼主就麻烦了，重新开始吧，这种东西最好的治疗方法就是预防。感觉楼上lijianyu118 朋友提到的“成骨细胞增殖作用和对破骨细胞的抑制作用”的探讨很有深度，支持一下！我以前出现过阳性药不对的情况（是中科院帮忙合成的），后来重新合成就表现为阳性了。关注中.........回复to sigmalog朋友： 你发现小黑点了，是不是做布朗运动，有的还呈杆状，而且随培养时间的延长，小黑点会越来越多。可能是“黑胶虫”啊，园内关于此虫的帖子不少，但还没达成一致的意见。我们室曾遭遇过虫害，比较麻烦，“黑胶虫”也是一种生物，如果空白组遭遇虫害，那麽你给药组和阳性药组OD值肯定低于空白组，因为MTT的值和琥珀酸活性密切相关。所以我建议你用新的96孔板测，注意无菌操作。回复首先感谢lijianyu118朋友！可能我的细胞中有这种所谓的＂黑胶虫＂，我以前也看过一些贴子，但没看出对实验有建设性的资料。这种东西接在培养瓶（平行培养用）内均没有出现，接到板（均用新板，国产和进口板上均会出现）上就出现了，且 随培养时间的延长，小黑点会越来越多，各组中均存在这种东西。我真的不知道如何解决这个问题？出现这种东西“可能”对我的实验结果有直接的影响作用。然而，出现这种实验结果会不会还有其它原因呢？回复sigmalog 朋友： 注意一下你的吧，好多朋友认为“黑胶虫”是内寄生的一种原虫，尤其是国产血清很多都会发现，而且“黑胶虫”生活环境喜酸性，所以细胞数量越多，密度越大，培养时间越长，细胞代谢产物增多，培养液越偏酸性，这种虫子就会生长越旺盛。我个人认为：底面积大，所装培养液也较多，如果勤换液，保持略偏碱的环境，可能“黑胶虫”不会过快生长，但96孔板每一个孔底面积都很小，培养液也很少，细胞代谢产物快速堆积，培养液很快变为酸性环境，因此“黑胶虫”就快速的旺盛繁殖，以至于满视野都是小黑点。 我建议换一下血清试试吧，长过虫子的板子要好好消毒。别灰心，风雨过后终见彩虹。
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电话：021-小剂量他汀类降血脂药物可以长期服用吗？_好大夫在线
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小剂量他汀类降血脂药物可以长期服用吗？
如今“，高血脂，高血糖”已是困扰现代人类的三大顽疾。一旦形成，需要长期甚至终身服药已得到广泛认可。而高血脂是否也需要长期服降脂药物，在广大患者朋友中始终存在疑问，一部分患者认为血脂正常就不需要继续服药，还有部分患者担心降脂药物的副作用而不愿意服药。针对这个疑问，我们应该具体问题具体分析，根据年龄、所患心血管疾病、心血管病家族史、血脂水平、心血管及肝肾功能状态等具体情况，综合分析，在尊重客观证据，尊重医生的经验，尊重患者意愿的前提下，结合临床指南，选择合适的药物，服用合适的时间，得到一个比较理想的结果，这是我们共同的愿望。首先要弄清楚胆固醇与血管粥样硬化的关系。古人云：知己知彼，才能百战不殆。百年胆固醇学说证实血中胆固醇，低密度脂蛋白升高是引起动脉粥样硬化的主要原因，也就是说“没有胆固醇就没有动脉粥样硬化。”尤其是低密度脂蛋白，容易滞留在动脉内膜上，甚至渗透至内膜下，这时体内的清道夫巨噬细胞就会吞噬低密度脂蛋白，变成臃肿而肥大的泡沫细胞，导致活动能力下降，细胞堆积在一起发生融合破裂，释放出有害的脂质物质破坏血管内皮，这些脂质垃圾就以此为据点扎根下来，逐渐积累增多，日复一日，年复一年，形成脂质斑块病变，造成血管腔狭窄，导致血液供应障碍，使得器官组织缺血缺氧，这就是引起、心肌梗塞、脑梗塞、四肢动脉粥样硬化的罪魁祸首。正常情况下我们体内的各种细胞，各器官系统之间通过高度纷繁复杂的相互作用，使脂质代谢处于动态平衡状态，产生的脂质垃圾被及时清除。就像一个巨大的化工厂，从原料进厂到产品出厂，每个环节，每道工序都必须符合设计要求。我们摄入的脂肪食物，在完成了各自的功能之后，剩余的部分就变成了脂质垃圾，这时就需要巨噬细胞、血管内皮细胞，各种生化酶来处理这些垃圾，也需要高密度脂蛋白、载脂蛋白A等运输工具，把低密度脂蛋白、极低密度脂蛋白运输到肝脏进行加工处理。随着年龄的增长，我们自己的器官功能，工作效率会逐渐下降，有时我们的工厂也会有设备老化、消极怠工的现象发生，生产能力不足，具体到人体内就是胆固醇、低密度脂蛋白及甘油三酯升高，而高密度脂蛋白、载脂蛋白A降低，这些物质的平衡失调造成人体脂质代谢紊乱。这时候我们就需要依靠调血脂药物，帮助调节血脂代谢，该升的升，该降的降，达到平衡。为什么要长期服用降血脂药物？迄今为止，包括动物实验、细胞学实验、流行病学调查和高胆固醇血症相关基因等方面的研究均支持低密度脂蛋白和胆固醇升高是的主要原因。让我们回顾一下最常用的他汀类降血脂药物的应用历史。80年代开始就有医生应用他汀类药物治疗高脂血症，1994年公布的具有划时代意义的大型临床研究“4S研究”，也称为“斯堪的纳维亚辛伐他汀存活试验”，首次证实了应用他汀类药物可以降低胆固醇水平，减少心血管不良事件的发生。此后相继有西苏格兰预防研究（WOSCOPS），胆固醇和再发事件研究（CARE），普伐他汀对缺血性心脏病的长期干预研究（LIPLD），空军德克萨斯冠状动脉粥样硬化预防研究（AFCAPS/Tex CAPS）等研究公布。这些具有里程碑意义的大规模临床试验证实，积极降低胆固醇和低密度脂蛋白水平，可显著降低事件，并能降低和相关的死亡率。在这20余年来，应用他汀类降脂药物治疗高脂血症、冠状动脉粥样硬化、的研究层出不穷，例如TNT、PROVE-IT、IDEAL和AtoZ研究，以及新近公布的IMPROVE-IT研究，该研究共有18144例急性冠状动脉综合征患者参与，历时9年，这个研究告诉人们即使低密度脂蛋白恢复正常，应放心继续服药，在没有发生肝脏及肌肉方面副反应时，不应该减量或停药。以上大规模临床试验都证明长期服用他汀类降血脂药物可以减少动脉粥样硬化患者发生心肌梗死和脑梗塞的几率，这些循证医学证据所揭示的临床意义使医学界为之振奋，高脂血症、动脉粥样硬化性疾病不再是不治之症，心肌梗死、脑梗塞患者长期生存成为可能，长期服药获益更大。长期应用的副作用：过去我们没有认识到大剂量降血脂药物会有那么多副作用，随着药物不良反应监测系统的建立，我们发现大剂量使用降脂药物可能引起很多鲜为人知的副反应。所以美国食品药品监督局对所有医务人员提出警示：医生的责任不仅在于开药单，而在于其指导的职责，他有责任告诉病人药品进入人体后，会有什么样的功能，会带来什么样的副作用。我们最常用的他汀类降血脂药物，作用及副作用存在量效关系，常规剂量或中等剂量的他汀就可以明显降低低密度脂蛋白，而副作用显著减少，而大剂量的他汀降低低密度脂蛋白的疗效仅增加6%，而不良反应明显增多。所以他汀类药物的副反应与剂量有关，长期小剂量服用，通过近20年的临床应用经验看并没有发现严重的副作用。但是应用剂量过大时，犹如一把双刃剑，在迅速杀敌的同时，稍有不慎，也会极大地伤害自己。这就是任何事物都有双重性的特点，从不同的角度看各有利弊，但是降低低密度脂蛋白是硬道理，是主要矛盾。小剂量或常规剂量长期服用是安全的。综上所述，患有、急性冠脉综合征、及伴有多个心血管高危因素的患者朋友，长期服用小剂量或常规剂量的他汀类降血脂药，可以明显减少心脑血管意外事件的发生，即使低密度脂蛋白降至正常，也应该继续服药，实践证明小剂量服用安全可靠，持续保持血脂正常，控制低密度脂蛋白，可长期获益。
发表于： 10:47
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心血管系统疾病，老年脑血管病，更年期综合症，高血压，心律失常请问关于MTT实验中药物浓度(药物浓度,密度,接种,中药) - 细胞实验 - 生物秀
标题: 请问关于MTT实验中药物浓度(药物浓度,密度,接种,中药)
摘要: [请问关于MTT实验中药物浓度(药物浓度,密度,接种,中药)] 相关疾病：肿瘤我刚开始做MTT实验，是筛选6味中药提取物的对肿瘤细胞的增殖抑制作用（目的：以对这6味药的抗肿瘤活性部位进行追踪，方便下面实验研究活性成分的作用机制）。想请教一下大家所用中药提取物的浓度（我的实验先是选择了6个浓度0 01,0 1,1,10,100,200ug ml，实验发现0 01-10抑制率没有显著性，100，200有显著性。第二次选择浓度10，50，100，200。不知这样选择 关键词:[密度 接种 药物浓度 中药 显著性 肿瘤细胞 抗肿瘤]……
我刚开始做MTT实验，是筛选6味中药提取物的对肿瘤细胞的增殖抑制作用（目的：以对这6味药的抗肿瘤活性部位进行追踪，方便下面实验研究活性成分的作用机制）。想请教一下大家所用中药提取物的浓度（我的实验先是选择了6个浓度0.01,0.1,1,10,100,200ug/ml，实验发现0.01-10抑制率没有显著性，100，200有显著性。第二次选择浓度10，50，100，200。不知这样选择浓度是否合理？还有我做了这四个浓度在24，48，72h的MTT实验，在48和72h，10－100ug/ml细胞密度特别大，测定OD(570nm达到2.0多，72h有的达到3）我的细胞接种密度是5000个/孔，用的是Hela细胞。我想问一下怎样选择细胞接种密度，一般大家的接种密度是多少？大家测出的OD值是多少（我看有的书上写OD值在0.3-1之间较好）？十分感谢！
回复怎么没有人帮忙呢？请大家给点建议吧，我自己顶一下免的沉下去。回复我刚开始做MTT实验........第二次选择浓度10，50，100，200。不知这样选择浓度是否合理？很好！先用大跨度的浓度差，后来逐渐缩小范围，可以把浓度摸的很清楚，10，50，100，200应该是没有问题的，最高浓度药物干预后的抑制率值一定要保证>50％，方便的话，最好多设几个浓度，可以让实验结果的曲线更漂亮。还有我做了这四个浓度在24，48，72h的MTT实验，在48和72h，10－100ug/ml细胞密度特别大，测定OD(570nm达到2.0多，72h有的达到3）.......我想问一下怎样选择细胞接种密度，一般大家的接种密度是多少？大家测出的OD值是多少（我看有的书上写OD值在0.3-1之间较好）？十分感谢！OD值，对于阴性对照组，应该不要>1.2，0.8-1.2比较好。细胞不会长的太满，细胞数量也不少；我们药物干预组的最高浓度常常达到0.2-0.3的（我们用的是6-7个不同药物浓度）。至于你的接种细胞数，肯定是太高了，一般生长比较快的肿瘤细胞，我们接种5×10的3次方，或者1×10的4次方就足够了。你的OD值高，应该和你的细胞数和干预时间较长有关。适当减少接种数量试试看。回复真是太感谢了！！！我再安你说的摸一下合适的细胞密度》回复亲
为什么看不到指教你的那个人的评论
我也很想了解接 谢谢
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