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角蛋白K5%2cK10%2cK14%2cK17在扁平苔癣和盘状红斑狼疮中的表达及意义.pdf46页
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表达及意义
目的：角蛋白是一种中间丝蛋白，主要表达于上皮细胞，由于其具有
很高程度的组织特异性和分化特异性，故而被认为是上皮细胞分化不同阶
段的分子标志。近年来研究发现它在许多的生理病理事件中发挥重要的作
用fl、2、3】。扁平苔藓 1ichen
从临床表现上分属两种不同的疾病，即：红斑鳞屑
erythematosus．DLE
性皮肤病和结缔组织病。但在病理分类上，两者均属于界面皮炎。本实验
5 ，K10 keratin10 ，K14 keratin14 、
通过观察角蛋白K5 keratin
K17 keratin
17 在扁平苔藓和盘状红斑狼疮的皮肤组织表达情况，探讨
以上指标与这两种疾病之间的相互关系，并比较角蛋白K5，K1
7在这两种病理分类上相同而临床表现不同的疾病中表达是否存在异
同，进而探讨上述角蛋白在扁平苔藓和盘状红斑狼疮的病理改变中的意
方法：本试验以石蜡包埋的lO例正常人表皮、3l例扁平苔藓和20
例盘状红斑狼疮的皮损组织标本作为研究对象，采用免疫组化SP法检测
况。K5、K14、K10和K17表达的免疫组化结果应用Motic6．0数
码医学图像分析系统分析。两组间比较采用t检验，其余统计方法用完全
计软件完成。
性表达。6例在基底层及棘层下部呈阳性表达。阳性染色部位主要表达在
角质形成细胞的胞质内。对照组lO例在基底层有8例呈强阳性表达，有2
正在加载中，请稍后...原癌基因c-fos,c-jun,c-myc,k-ras联合表达与非小细胞肺癌预后的研究--《中华医学会呼吸病学年会——2013第十四次全国呼吸病学学术会议论文汇编》2013年
原癌基因c-fos,c-jun,c-myc,k-ras联合表达与非小细胞肺癌预后的研究
【摘要】：正目的探讨原癌基因c-fos,c-jun,c-myc,k-ras联合表达与非小细胞肺癌(NSCLC)预后的关系。方法年,100例符合条件患者进入本研究。免疫荧光方法检测c-fos,c-jun,c-myc,k-ras蛋白表达。Kaplan-Meier法计算生存率及远处转移率,Cox-regression模型分析4种原癌基因表达与预后关系。结果4种癌基因免疫荧光染色结果,以癌组织与周围正常组织组织荧光灰度值比值为变量进行分析。4种原癌基因蛋白表达阳性率分别为:c-Fos63%(63/100),c-Jun44%(44/100),c-Myc56%(56/100),k-Ras89%(89/100)。
【作者单位】：
【分类号】：R734.2【正文快照】：
目的探讨原癌基因c一fos，c-jun，c一myc，k-ras联合表达与非小细胞肺癌伽scLC)预后的关系。方法年，100例符合条件患者进入本研究。免疫荧光方法检测c一fos，。jun，。一myc，k一ras蛋白表达。Kaplan一Meier法计算生存率及远处转移率，cox一regression模型分析4种
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京公网安备75号KHSRP在坐骨神经损伤后的表达及功能研究--《苏州大学》2015年博士论文
KHSRP在坐骨神经损伤后的表达及功能研究
【摘要】：目的研究KHSRP在坐骨神经损伤后的表达情况,探究KHSRP与施万细胞分化和神经元轴突再生的关系,分析KHSRP与β-catenin的相互调节关系及两者在施万细胞分化和神经元轴突再生过程中的作用,进一步揭示KHSRP在周围神经损伤后的再生机制。方法1.为了研究KHSRP在损伤后坐骨神经中的表达,本研究通过构建大鼠坐骨神经夹伤模型,利用western blot,免疫组织化学技术检测了KHSRP在正常组织及损伤组织中的表达；采用免疫荧光方法检测了KHSRP的细胞定位情况,分析其与施万细胞分化和神经元轴突再生的关系2.为了研究KHSRP在施万细胞分化过程中的作用,本研究通过构建原代施万细胞体外分化模型,western blot及RT-PCR技术检测KHSRP、β-catenin及相关蛋白在此过程中的表达情况；通过核浆分离检测KHSRP的胞浆转移情况；通过构建KHSRP小干扰RNA及β-catenin过表达质粒并结合免疫细胞荧光技术检测KHSRP是否通过调节β-cateni n的稳定性从而介导施万细胞的分化。3.为了研究KHSRP在神经元突起生长过程中的作用,采用100ng/ml NGF刺激未分化的PC12细胞,模拟神经元体外分化过程,以及构建原代DRG神经元体外发育模型,检测KHSRP在神经元延伸过程中的表达、胞浆转运及对神经元突起延伸的影响。4.原代施万细胞和神经元的共培养,模拟坐骨神经损伤后施万细胞的再成髓鞘化过程,检测KHSRP、β-catenin的表达及KHSRP的胞浆运输对β-catenin稳定性的影响。结果1. western blot免疫组化分析显示,KHSRP在坐骨神经损伤后表达升高,在第5天达到最高,随后逐渐回复。免疫荧光结果显示KHSRP NF200、S100及Oct-6阳性的细胞中均有表达,提示KHSRP可能在施万细胞分化和神经元轴突再生过程中发挥作用。2.在cAMP诱导的施万细胞分化过程中, KHSRP的表达升高,而β-catenin的表达降低。核浆分离结果显示KHSRP在分化过程中胞浆蛋白水平增加,相应此时β-catenin的胞浆蛋白水平降低,提示KHSRP可能通过调节β-catenin的稳定性来介导施万细胞的分化。KHSRP的小干扰RNA转染施万细胞后抑制了施万细胞分化的形态发生,该效应与过表达β-catenin的施万细胞形态相似。3.NGF刺激PC12细胞分化和体外培养的原代DRG神经元发育的过程中,KHSRP的蛋白及mRNA水平的表达均升高,而β-catenin成相反趋势。此外也相应观察到KHSRP的胞浆聚集及β-catenin的胞浆稳定性降低现象。KHSRP的小干扰RNA转染的PC12或DRG神经元突起延伸也受到影响。4.施万细胞和DRG神经元共培养过程中,KHSRP在1d表达最低,随后随着施万细胞髓鞘化,表达逐渐增高,β-catenin的表达呈相反趋势。核浆分离也显示出KHSRP的胞浆转移及β-catenin的稳定性衰退现象。结论1.KHSRP在坐骨神经损伤后参与施万细胞分化和神经元轴突再生过程。2.KHSRP通过调节自身的核浆分布来影响β-catenin的稳定性,从而介导周围神经的再生过程。
【关键词】：
【学位授予单位】：苏州大学【学位级别】：博士【学位授予年份】：2015【分类号】：R688【目录】：
摘要4-6Abstract6-10第一章 绪论10-13 1.1 课题来源、研究的目的和意义10-11 1.2 国内外研究概况11-12 1.3 论文的主要研究内容12-13第二章 材料和方法13-27 2.1 材料13-16 2.2 方法16-27第三章 结果27-38 3.1 KHSRP 在正常坐骨神经及损伤后不同时间段的动态性表达27-28 3.2 KHSRP 在组织中的细胞定位28-31 3.3 KHSRP 与施万细胞分化的关系31-33 3.4 KHSRP、β-catenin 介导 cAMP 诱导的施万细胞分化的形态学改变33-35 3.5 KHSRP 对神经元突起延伸的影响35-36 3.6 KHSRP 涉及神经元/施万细胞共培养中的髓鞘形成过程36-38第四章 讨论38-42第五章 结论42-43参考文献43-48综述48-86 综述参考文献66-86在攻读博士学位期间公开发表的论文与参加的项目86-87英文缩写词表87-89致谢89-90
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京公网安备75号硒蛋白K在小鼠中的组织差异表达及T淋巴细胞内定位--《热带医学杂志》2014年11期
硒蛋白K在小鼠中的组织差异表达及T淋巴细胞内定位
【摘要】：目的检测硒蛋白K(Sel K)在小鼠脾、肾、肠、肺、脑、肝组织中的表达差异及在T淋巴细胞内的定位,为研究Sel K的分布与生物学功能的关联性提供参考。方法采用实时荧光定量PCR,Western blot以及免疫组化方法检测硒蛋白K在小鼠各组织的表达差异,并采用细胞免疫化学的方法 ,用激光共聚焦显微镜观察硒蛋白K在小鼠T淋巴细胞内的定位。结果实时荧光定量PCR结果显示硒蛋白K在小鼠各组织中均有表达,并且在脾脏中的表达明显高于其他组织(P0.05)。Western blot及免疫组化结果与实时荧光定量PCR结果基本一致。细胞免疫化学结果显示硒蛋K在小鼠T淋巴细胞中定位于内质网。结论硒蛋白K是一种在脾脏中高表达的内质网蛋白。
【作者单位】：
【关键词】：
【基金】：
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硒作为人和动物必需的一种微量元素,对许多生理功能起重要作用,并与多种疾病密切相关,如癌症、神经退行性疾病及心血管病等[1-2]。硒主要以硒代半胱氨酸(Sec)的形式存在于蛋白质内,通过各种硒蛋白发挥生物功能。目前已发现25种硒蛋白,硒蛋白K(Sel K)是2003年被Gladyshv实验室
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免疫组化染色在肾肿瘤诊断中的应用(转载)
个常见的主要组织学亚型依次是透明细胞性肾细胞癌（），乳头状肾细胞癌（），嫌色细胞性肾细胞癌（）。其它少见的包括肾集合管癌（），黏液小管和梭形细胞癌（），以及伴有基因易位的等。随着对病理发生中分子遗传学研究的不断认识，近年人们发现了许多新的亚型如透明细胞乳头状肾细胞癌，管状囊状肾细胞癌，与终末期肾疾病相关的肾细胞癌等，这些亚型各自具有独特的临床病理学特征，预后意义及分子遗传学背景。其他部位原发的恶性肿瘤也可以转移到肾脏。准确的组织学鉴别诊断和亚分类肾细胞癌对于指导患者的临床治疗具有重要意义。然而肾细胞癌各种组织学亚型之间存在明显的形态学上的重叠，某些远处转移来的或周围器官直接扩散而来的肾肿瘤在光镜下与原发的肾肿瘤极难区分，因此辅助诊断手段，特别是免疫组织化学染色（）在肾脏肿瘤鉴别诊断中具有重要的利用价值。（一）常用于诊断肾脏肿瘤的免疫组化标记物肾细胞癌标记物 RCC Ma是一种抗人类肾脏近端肾小管刷状缘上糖蛋白抗原的抗体。是一种约大小的型细胞表面糖蛋白分子，在正常肾组织表达于近端肾小管上皮刷状缘及肾小球的足细胞。和（肾特异性结合蛋白 ：是一种钙离子依赖的细胞粘附分子，调节细胞与细胞之间的连接。是的一个亚单位。两者都是远端肾单位的标记物。 是与肾脏发育和成熟过程有关的一种核转录因子，大多数的肾上皮性肿瘤均核表达。 是与密切相关的另外一种核转录因子，其在肾脏肿瘤中的表达谱与相似。细胞角蛋白（） 不同类型的表达可用于区分肾肿瘤，研究最广泛的是。波形蛋白（） 作为一种广谱的间叶性标记物，可在许多中表达。 是一种编码络氨酸跨膜受体的原癌基因蛋白，广泛用于胃肠道间质肿瘤的诊断，大多数的嫌色细胞与嗜酸细胞腺瘤表达，而透明细胞与乳头状几乎总是不表达，一部分的血管平滑肌脂肪瘤可表达，以及组织蛋白酶 Xp11.2易位的肾细胞癌免疫组化特征性的核表达融合基因转录因子，对于鉴别诊断基因易位的具有较高的特异性和敏感性。则是另外一种融合基因转录因子，明显过表达于伴有易位的肾细胞癌，免疫组化核表达对于这一亚型的具有诊断意义。是因子控制路径下游的一个靶点，因此组织蛋白酶明显过表达于易位和易位的肿瘤中，免疫组化染色检测有助于易位的与其它鉴别。是一种调节脂肪酸合成的线粒体酶，在正常肾脏中表达于近端肾小管，表现为颗粒状的胞质染色。 Claudin-7是一种紧密连接蛋白，表达于人类肾脏远端肾单位。 是蛋白家族成员之一，具有调节细胞增殖和分化的功能。广泛表达于肾实质小管细胞的核及胞浆内。 是一种转移抑制基因。在正常肾组织内，表达仅表达于远端肾单位的细胞膜。碳酸酐酶， 是一种复杂的跨膜酶蛋白，主要调节细胞的增殖、粘附以及浸润。（二）免疫组化染色在肾肿瘤鉴别诊断中的应用透明细胞嫌色细胞 透明细胞与嫌色细胞是两种完全不同的肾细胞癌亚型，在经典的组织学背景下，区分两者并不困难。而有时种肿瘤可能显示重叠的形态学特征造成鉴别诊断困难，包括胞浆透明，胞界清楚以及颗粒状嗜酸性胞质等。然而在预后方面，嫌色细胞明显好于透明细胞，包括前者具有的年和的年生存率，因此准确的区分这两个亚型十分的重要。嫌色细胞性嗜酸细胞腺瘤 嫌色细胞与嗜酸细胞腺瘤均起源于远端肾小管，两者在形态学及免疫表型特征方面均有部分重叠。嫌色细胞的嗜酸细胞亚型与嗜酸细胞腺瘤鉴别诊断困难，两者都具有颗粒状的嗜酸性胞浆，界限不清的细胞轮廓。某些典型的嗜酸细胞腺瘤局灶区域可表现为核周透明类似于嫌色细胞瘤细胞的核周空晕。嗜酸细胞腺瘤典型的是一种良性肿瘤，而嫌色细胞通常是一种低度恶性的肿瘤，具有发生肉瘤样去分化和远处转移的潜能。在某些特别困难情况下，形态学特征结合恰当的免疫组化标记有助于我们做出倾向性的诊断。几乎所有的嗜酸细胞腺瘤均表达和，特征性的表现为核旁及膜周球状颗粒状着色方式。如前所述，联合应用，及可有助于鉴别嫌色细胞与嗜酸细胞腺瘤。两者均表达，和均不表达，可能反映了其共同的组织学发生起源，联合应用这些标记物有助于与其它肾肿瘤的鉴别。乳头状粘液小管状和梭形细胞癌（） 乳头状特征性的表现为广泛的伴有纤细血管轴心的乳头形成伴或不伴有间质泡沫细胞聚集，某些少见的特征包括局灶小管形成及灶状的粘液分泌。是最近描述的一组亚型，典型的表现为广泛的粘液样基质的背景中，肿瘤细胞呈狭长的小管状和伸展的梭形细胞分布，局灶可有乳头形成及泡沫细胞聚集。最近又报道了少粘液的亚型以及伴有低级别梭形细胞灶的乳头状同时乳头状与偶尔均可表现为高级别梭形细胞的肉瘤样分化，因此这两种肿瘤在形态上存在明显的重叠，有时鉴别相当的困难，特别是当肿瘤表现为某些不同寻常的特征是更是如此。而在免疫表型特征方面，两者也具有明显的相似性，不同程度的显示近端和远端小管分化的证据。事实上某些学者认为可能就是乳头状的一种形态学变异，但遗传学特征不支持这一假说，细胞遗传学分析表明乳头状典型的表现为号染色体获得，染色体丢失，而这一现象很少出现于。透明细胞易位的上皮样血管平滑肌脂肪瘤易位的是最近描述的一组伴有小眼转录因子（包括等）基因易位的。易位的在形态学上易于与透明细胞特别是高核分级的混淆，免疫组化染色显示特征性的强而弥漫的核或的表达对明确诊断基因易位的必不可少。如前所述，小眼转录因子下游的靶蛋白的表达也有助于其与其它鉴别诊断。与普通的不同，易位的通常较少或至仅局灶表达和特别是某些罕见的融合类型和融合的几乎不表达广谱角蛋白，而异常表达黑色素标记物如，可与肾血管平滑肌脂肪瘤（）特别是其纯的上皮样亚型（）造成鉴别诊断困难，在形态学上表现为实性成片的具有丰富胞浆的上皮样细胞聚集，免疫组化表达，而较少表达肌源性标记物（如等），不表达和肾肿瘤标记物。与之不同的是易位的除了特征性的核表达或之外大多数还表达，及等可资鉴别。尿路上皮癌这两型肿瘤多数表现为以成片的间变性细胞弥漫浸润为特征往往占据肾实质的大部分，在缺乏某些可能提示肿瘤来源的组织学特征时，利用免疫组化套餐可有助于两者的区分。尿路上皮癌大多数表达和，不同程度的表达，超过半数表达。是尿路上皮较特异的标记物着染约的尿路上皮癌，而高分子量角蛋白（）与血栓调节蛋白似乎是尿路上皮肿瘤表达较为敏感的标记物，分别表达于及的尿路上皮癌。上述标记物除了与之外，几乎均不表达于，而尿路上皮癌典型的不表达，，，等标记物。乳头状后肾腺瘤 I型乳头状，特别是实体型亚型在组织病理特征上与后肾腺瘤（）存在明显重叠。乳头状除了典型的具有纤维血管轴心的乳头之外尚可出现梁状，小管状，肾小球样和实性生长方式，而主要由密集排列的小管状结构组成，间质稀少，局灶区小管内形成乳头状内折类似于发育不成熟的肾小球。少数研究发现乳头状与后肾腺瘤均可出现，号染色体三体性和染色体丢失而提示两者之间可能存在着遗传性联系，而大多数研究者并不认同这一观点。对于鉴别两者困难的病例，特别是当乳头状表现为较广泛的管状实性生长和具有较多乳头结构时，免疫组化染色有助于两者的区分。大多数表达，较少表达基本不表达，而乳头状刚好相反，的乳头状表达不表达目前还没有其它肾肿瘤标记物如等在的研究报道。肉瘤样与纯肉瘤 几乎任何一种亚型的都可出现提示预后不佳的肉瘤样转化。在年的分类中，肉瘤样并不是一种肿瘤实体，而是代表了各种不同亚型的出现高级别转化的共同的形态学表现。因此大多数的肉瘤样都会伴有可识别的低级别或经典型成分。免疫组化染色对于鉴别两者提供一些有用的诊断线索。肉瘤样成分通常表达广谱与，尽管可能是局灶性的或斑驳状的表达，而不表达或与之相反，真正的肉瘤往往不表达和依赖其分化方向可不同程度的表达，，，等间叶性标记物。上皮样血管平滑肌脂肪瘤可显示不同程度的细胞非典型性，其特征性的共表达黑色素标记物和肌源性标记物可与肉瘤样癌鉴别。其它肾肿瘤标记物包括等均不表达于肉瘤样与肉瘤中，因此对于鉴别诊断没有帮助。而对于在肉瘤样的表达，报道结果则不一致；总的来说，对于明显原发于肾的肉瘤样肿瘤，阳性表达或对于诊断肉瘤样癌具有证实意义，而阴性表达结果则不能除外肉瘤样成分。集合管癌（）与其它高级别肿瘤的鉴别是一种起源于远端肾集合管罕见的高度侵袭性肿瘤，占所有肾肿瘤的不到。组织学上，肿瘤细胞呈腺样，管状乳头状浸润性生长，瘤细胞显示不同程度的鞋钉样细胞分化，间质可见广泛的促纤维增生性反应伴混合性慢性炎细胞浸润。在形态学上与易造成混淆的肿瘤主要是其它的高级别高级别尿路上皮癌以及转移癌。最近两项研究证明了联合表达在鉴别诊断与高级别尿路上皮癌的意义，所有集合管癌均表达而绝大多数的尿路上皮癌不表达，但表达。的免疫表型特征支持诊断具有的敏感性及的特异性，与之相反的免疫表型特征诊断尿路上皮癌具有的敏感性及的特异性。肾髓质癌是一种非常独特的高度侵袭性肾上皮性肿瘤，组织学上与集合管癌存在明显的重叠最近发现肾髓质癌是一种与缺失相关的肿瘤，据推测基因的胚系或激活突变促使这一类肿瘤的发生，肿瘤细胞易于表现为横纹肌样形态，其它与缺失相关的肿瘤包括肾及肾外恶性横纹肌样瘤，中枢神经系统非典型畸胎样横纹肌样瘤，骨外粘液性软骨肉瘤等。（三）转移性的鉴别诊断 与原发性肾肿瘤相比，转移性肾肿瘤存在某些独特的临床或病理学表现易于造成混淆。如某些转移性肾癌可在原发部位发现肿瘤之前出现；转移性肿瘤可能在形态上更加不分化，或表现为与原发肿瘤明显不同的组织学特征，特别是在接受放化疗治疗之后。或者在转移的器官内，肾细胞癌可能与该器官某些原发的肿瘤形态十分相似，另外转移性肾肿瘤可能出现原有免疫表型特征的丢失等等。因此，广泛的应用一系列免疫标记物对于识别这些肿瘤具有重要的意义。器官特异的免疫标记物在诊断转移性肾细胞癌中特别有用，如等，但在转移性肿瘤中的表达通常出现不同程度的丢失或不表达。需要注意的是，其它共表达的非肾脏来源肿瘤包括甲状旁腺腺瘤癌，卵巢苗勒氏上皮起源的癌，细胞癌，肾源性腺瘤和淋巴瘤等。与或相比，与诊断转移性的敏感性和特异性明显降低，大多数的研究表明只对于鉴别转移性透明细胞有用，然而许多非肾脏来源的肿瘤都可表达，如皮肤附属器肿瘤，子宫内膜间质肿瘤等。最近一项综合性的免疫组化研究表明，联合应用及人肾脏损伤分子（）及对于诊断转移性透明细胞具有较高的敏感性和特异性。基本只对转移性嫌色细胞诊断有用，然而这一亚型很少出现转移（不到）。绝大多数的转移性乳头状表达而同样非肾脏来源的肿瘤亦可表达这一标记物，包括来源于胃肠道，肝脏，膀胱，肺脏，乳腺，卵巢的癌以及某些神经内分泌肿瘤等。转移性肉瘤样的诊断是个难点，目前免疫组化的鉴别作用似乎不大，研究表明某些转移性可不表达上述所有肾肿瘤相关的标记物，因此仔细寻找典型的低级别肿瘤成分以及紧密的结合临床病理学特征对于确立转移性肉瘤样的诊断至关重要。综上所述，目前还没有哪一种免疫标记物对鉴别诊断转移性绝对可靠。联合应用一系列的免疫组化标记物，再辅以某些转移部位器官特异性的标记物或者各种需要与转移性鉴别的非肾脏肿瘤的较特异的标记物对于鉴别诊断转移性具有重要的作用。然而需要牢记的是，任何免疫组化染色结果的评估始终需要结合形态学特征和临床病理学背景，任何不加分析的单纯依赖免疫组化染色所做出的诊断最终都可能造成严重的不良后果。
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