怎样跑出16bp的dna片段化

琼脂糖电泳跑试剂盒提取出来的线粒体DNA 16500bp ,marker出了,dna条带没有网上查了改变很多条件了也没出 也用试剂盒重新换提了好几次DNA了 也没条带 顺便问一下放DNA的离心管和枪头啥的用特殊处理么
离心管和枪头都要进行高温湿热灭菌后才能使用.另外,你确定不是你样品本身的问题么?或者提取DNA的时候最后洗脱没有洗脱下来?
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【求助】3000多bp的基因片段,连不上T载体
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PCR产物连pmd-T载体,产物大于3kb,始终都连不上,应该怎样优化连接体系,或时间,这个载体可以连这么大的基因吗?
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What kind of template did you use for PCR amplification of this 3,000 bp fragment? Try to do blunt ending ligation with CIPped blunt ends on the vector. Set up ligation at room temperature overnight.
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smile旧时光 PCR产物连pmd-T载体,产物大于3kb,始终都连不上,应该怎样优化连接体系,或时间,这个载体可以连这么大的基因吗? 这么大的基因不建议连T载体,我们一般较长的基因直接构建到客户指定载体
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注意几个关键点:1. PCR产物回收:扩增时如果用的是高保真酶,那就没有poly A尾,不可能连上T载体。你需要使用加尾试剂盒加尾。普通Taq酶能够产生poly A尾,可以直接做。PCR结束后,采用琼脂糖凝胶回收方式回收产物,确保PCR产物的纯度,测定浓度。2. 连接时:计算插入片段和载体的摩尔比,载体建议使用100ng,插入片段计算公式ng of insert= (ng of vector*size of insert/size of vector)*molar ratio.
建议使用1:1, 3:1,6:1三个摩尔比例同时做。连接温度16度水浴过夜。3. 转化环节:这个实验最关键的在于感受态细胞DH5a的效率一定要高,如果感受态细胞的效率不高,难以成功。建议购 买质量可靠的感受态细胞,并且保存时间不要超过一个月。总之,与T载体的连接相对容易,把握住每个环节的关键点,祝你成功!
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3000多的基因,不大的,应该好连。我们的快速T载体,平端、TA连接的都有,我们有客户连接7100多bp的基因,阳性率都达到70%。一般主要环节,楼上说的挺详细的。祝顺利!
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按说能连上的,这个是基本功。1、增加外源片段的用量,减少T载体的用量。2、PCR扩增外源片段时,最好加72度30分钟,充分加A3、PCR产物一定要做纯化,不纯化是连不上的
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让别的公司帮您连,因为他们有经验
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关于丁香园分离相差36bp的DNA片段所用琼脂糖电泳浓度及电压_百度知道
分离相差36bp的DNA片段所用琼脂糖电泳浓度及电压
提问者采纳
你可以去查一下不同浓度下agarose胶分离DNA的最佳范围,想要分离好的关键是和DNA本身的分子量大小有关,5V&#47,可以考虑PAGE和毛细管电泳,36bp这个差别如果是1000bp以下的DNA话agarose就可以搞定,乘以电极间的距离。如果对分辨率要求很高的话。想分辩率好的话电压不用太高;cm以内胶浓度也不是越大越好
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该是很难分出来。但是这个数量的差别为什么不用聚丙烯酰胺胶,电压50V左右。可以尝试用3%的琼脂糖胶
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【请教】我跑的是600bp的DNA,marker是条带100bp,结果如图,求原因,谢谢!
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market用的不正确,该用1000bp的market,你就能看到你跑的条带大致大小了。
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wangchina edited on
不好意思,没说明白,我用的就是1000bp的marker,每条带是100bp。
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丁香园助理版主
鲁大师dxy 不好意思,没说明白,我用的就是1000bp的marker,每条带是100bp。 你把market的图给我看看,怎么可能每条都是100?第一,确定你是不是用错marker了,第二,搞清marker图谱。
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wangchina edited on
红色箭头表示的是marker,最前面表示的是100bp,最后面是1000bp,中间的8个条带以100bp依次递增分别是200bp、300bp、400bp、500bp、600bp、700bp、800bp、900bp。
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