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幼胚培养和离体授粉
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你可能喜欢小麦幼胚及成熟胚茎尖组织丛生芽诱导研究--《西北农林科技大学》2015年硕士论文
小麦幼胚及成熟胚茎尖组织丛生芽诱导研究
【摘要】：小麦是世界上种植范围最广的粮食作物之一,改良品质、增强抗性及提高产量已尤为重要。遗传转化是小麦品种分子改良的重要手段,而建立高效的小麦离体组织培养再生体系是小麦遗传转化的基础。目前,小麦遗传转化的主要受体是小麦幼胚愈伤组织,但其取材受季节限制、转化植株的嵌合特性及依赖于基因抢的遗传转化方法限制了这一技术的推广和应用,利用茎尖作为受体进行遗传转化在水稻、玉米等作物上已有了应用,但由于小麦茎尖离体培养特性差,因此,至今未见到离体培养成功的报道,而茎尖作为受体可以为农杆菌介导的小麦遗传转化体系的建立及解决遗传转化中存在的嵌合体现象提供新的途径和方法,因此,本研究以小麦幼胚和成熟胚为材料,通过供体材料的预处理、芽萌发培养和诱导培养过程中不同影响因子的优化,进行了小麦茎尖组织诱导丛生芽分化研究,旨在探索影响小麦幼胚及成熟胚茎尖组织丛生芽诱导的条件和因素,建立高效的小麦幼胚及成熟胚茎尖组织诱导丛生芽的技术体系,为小麦转基因分子育种提供更优良的转化受体,取得了以下研究结果:1.为了解决遗传转化中离体芽直接转化成苗出现的嵌合体现象,以5个普通小麦品种(系)的幼胚为材料,研究了TDZ(噻二唑苯基脲)、6-BA(6-苄基脲嘌呤)、4-PU(N—苯基—N′—4—脲)、TDZ与IBA(吲哚丁酸)复配及TDZ与6-BA复配对小麦幼胚茎尖丛生芽诱导的影响。结果表明,在萌发培养基中添加TDZ对小麦的幼胚萌发率有一定影响:在设计的浓度梯度范围内,随着TDZ浓度的增加,西农183的幼胚萌发率呈增加趋势;而千斤早、小偃22、扬麦12及扬麦18的幼胚萌发率呈先增加后降低的趋势,萌发率均在4mg·L-1时达到最大,且千斤早的最高幼胚萌发率可达92.2%,较对照提高了20.4%,同时,萌发培养基中添加TDZ有利于丛生芽的诱导。在诱导培养过程中,不同激素种类、浓度及复配对小麦幼胚茎尖丛生芽的分化有重要影响,5种诱导处理在最佳浓度及复配组合的前提下,3mg·L-1 TDZ与0.5mg·L-1 IBA复配诱导效果最好、3mg·L-1 TDZ与1mg·L-1 6-BA复配次之、3mg·L-1 TDZ单独诱导偏差、1mg·L-1 6-BA较差、2mg·L-1 4-PU最差。因此,小麦幼胚茎尖丛生芽形成的最优激素处理为4mg·L-1 TDZ诱导萌发,3mg·L-1 TDZ与0.5mg·L-1 IBA复配诱导不定芽和丛生芽的形成和发育。5个供试材料的幼胚茎尖丛生芽分化效果也有差异,其扬麦18的茎尖丛生芽诱导率、平均不定芽个数最高、扬麦12次之、千斤早偏低、西农183较低及小偃22最低。本研究结果可以为建立高效的小麦幼胚茎尖丛生芽诱导体系及转基因育种选择优良的转化受体提供一些参考。2.为了给遗传转化提供更好的受体,从而降低离体芽转化直接成苗出现的嵌合体现象,以5个普通小麦品种(系)为材料,研究了小麦籽粒TDZ浸泡预处理及激素对小麦成熟胚茎尖组织丛生芽形成的影响。结果表明,TDZ浸泡预处理降低了小麦成熟胚萌发率,但显著提高了小麦茎尖组织丛生芽的分化,在TDZ最佳浓度5mg·L-1时,5种供试小麦材料的成熟胚茎尖组织丛生芽诱导率和平均不定芽个数均达到最高;萌发培养基中TDZ浓度为4mg·L-1时,小麦成熟胚茎尖组织丛生芽的诱导率和平均不定芽个数最高;诱导培养基中细胞分裂素TDZ和6-BA浓度均为3mg·L-1时,诱导小麦成熟胚茎尖组织丛生芽的效果最佳,并且TDZ诱导效果优于6-BA;细胞分裂素与生长素配合诱导时,在3mg·L-1 TDZ和0.5mg·L-1 IBA复配、3mg·L-1 6-BA与0.05mg·L-1 2,4-D(2,4-二氯苯氧乙酸)复配时,诱导效果较好,但低于细胞分裂素单独诱导的效果;诱导培养基中附加不同有机添加物和诱导培养时间不同对小麦成熟胚茎尖组织丛生芽诱导均有一定影响。结果表明,诱导培养中添加500 mg·L-1水解酪蛋白、250 mg·L-1 L-天门冬酰胺和200mg·L-1L-谷氨酰胺,诱导天数为30天时,5种供试材料的成熟胚茎尖组织丛生芽诱导率最高和平均不定芽个数最多,其中,扬麦18的最高成熟胚茎尖组织丛生芽诱导率及最多平均不定芽个数分别达到84.1%和7.99个,比对照分别提高了7.1%和1.28个;同时基因型对小麦茎尖丛生芽诱导有重要影响,供试的5个材料中,扬麦18的丛生芽诱导率最高,扬麦12次之,千斤早、西农183较差、小偃22最差。5种供试材料的不定芽个数显著增加,扬麦18最多,小偃22最少。3.综合考虑,在实验设计范围内,幼胚茎尖组织诱导丛生芽的最佳程序为:4mg·L-1TDZ促其萌发,3mg·L-1 TDZ与0.5mg·L-1 IBA复配诱导不定芽和丛生芽的发育。成熟胚茎尖组织诱导丛生芽的最佳程序为:5mg·L-1 TDZ预处理浸泡小麦籽粒,4mg·L-1 TDZ促其萌发,在诱导培养基中添加3mg·L-1 TDZ、500mg·L-1水解络蛋白、250mg·L-1 L-天门冬酰胺和200mg·L-1L-谷氨酰胺进行诱导,诱导天数为30d。
【关键词】：
【学位授予单位】：西北农林科技大学【学位级别】：硕士【学位授予年份】：2015【分类号】：S512.1【目录】：
摘要6-8ABSTRACT8-13第一章 文献综述13-21 1.1 小麦组织培养及主要外植体来源13-18
1.1.1 小麦组织培养研究进展13-14
1.1.2 小麦组织培养主要外植体来源14-18 1.2 茎尖组织丛生芽诱导的研究进展18-20
1.2.1 诱导方式对植物茎尖组织丛生芽诱导的影响18-19
1.2.2 基因型对植物茎尖组织丛生芽诱导的影响19
1.2.3 植物生长调节剂对植物茎尖组织丛生芽诱导的影响19-20 1.3 立题目的和意义20-21第二章 小麦幼胚茎尖组织丛生芽诱导研究21-33 2.1 试验材料与方法21-22
2.1.1 供试材料21
2.1.2 培养基21
2.1.3 实验方法21-22 2.2 结果与分析22-31
2.2.1 不同浓度TDZ对小麦幼胚萌发特性的影响22-23
2.2.2 激素不同类型、浓度及复配对小麦幼胚茎尖组织丛生芽形成的影响23-31 2.3 讨论31-33第三章 小麦成熟胚茎尖组织丛生芽的诱导研究33-46 3.1 材料与方法33-34
3.1.1 供试材料33
3.1.2 培养基33-34
3.1.3 实验方法34 3.2 结果与分析34-44
3.2.1 不同浓度TDZ预处理对小麦成熟胚萌发及茎尖组织丛生芽分化的影响34-35
3.2.2 不同浓度TDZ对小麦成熟胚萌发特性的影响35-36
3.2.3 不同激素类型、浓度及复配对小麦成熟胚茎尖组织诱导丛生芽的影响36-41
3.2.4 不同有机添加物对小麦成熟胚茎尖组织诱导丛生芽的影响41
3.2.5 培养天数对小麦茎尖组织丛生芽分化的影响41-44 3.3 讨论44-46第四章 结论46-47参考文献47-53附录53-55致谢55-56作者简介56
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京公网安备75号第四章 胚胎_百度文库
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第四章 胚胎
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你可能喜欢玉米幼胚和成熟胚愈伤组织诱导过程中内源激素的比较--《核农学报》2009年04期
玉米幼胚和成熟胚愈伤组织诱导过程中内源激素的比较
【摘要】：以玉米自交系87-1的幼胚和成熟胚为材料,用酶联免疫法测定了不同培养时间诱导的幼胚及成熟胚愈伤组织内源脱落酸(ABA)、吲哚乙酸(IAA)、赤霉素(GA3)和细胞分裂素(ZR)含量的动态变化。结果表明,在0~7d时,幼胚及成熟胚的IAA和GA3含量均急剧下降,说明在胚萌发阶段IAA和GA3需求量较大。在幼胚胚性愈伤组织发生初期(14d左右),2种激素含量出现峰值,反映出幼胚较高水平的IAA和GA3含量,有利于胚性愈伤组织的诱导。在胚萌发后的愈伤诱导阶段,成熟胚愈伤中IAA、GA3和ABA含量以及IAA/ABA和GA3/ABA比值明显高于幼胚愈伤,且IAA/ABA和GA3/ABA比值均大幅度上升;而幼胚愈伤组织中IAA/ABA和GA3/ABA比值则稳定地维持在较低的水平上。可以认为,成熟胚愈伤组织中过高水平的IAA、GA3和ABA含量及IAA/ABA和GA3/ABA比值大幅度上升可能是导致其难以形成胚性愈伤组织的主要生理原因之一。
【作者单位】：
【关键词】：
【基金】：
【分类号】：S513【正文快照】：
玉米作为粮食、食品、饲料、化学工业的重要原料作物,基于其基因遗传转化技术的分子育种与功能基因组研究十分活跃。成功高效的遗传转化技术体系的核心是具备较高植株再生频率与转化效率的受体系统。已报道的用于玉米遗传转化受体系统的外植体有悬浮细胞系[1]、幼胚[2]和芽尖[
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