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大黄多糖对溃疡性结肠炎小鼠结肠上皮细胞和外周血中性粒细胞凋亡的影响
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大黄多糖对溃疡性结肠炎小鼠结肠上皮细胞和外周血中性
官方公共微信妊娠对小鼠外周血ROS、NO、细胞因子水平及其淋巴细胞活化的影响--《中华医学会第十次全国妇产科学术会议产科会场（产科学组、妊高症学组）论文汇编》2012年
妊娠对小鼠外周血ROS、NO、细胞因子水平及其淋巴细胞活化的影响
【摘要】：正目的研究妊娠对小鼠外周血中性粒细胞(PMN)胞内活性氧簇(ROS)、血清一氧化氮(NO)和细胞因子水平、T淋巴细胞活化的影响,初步探讨其对小鼠外周血淋巴细胞的免疫调节作用。方法以处于妊娠中期(怀孕14d)的BALB/c小鼠为研究对象,以ROS探针2-7-二氯氢化荧光素乙二脂(H2DCFDA)进行全血染色,结合流式细胞仪检测小鼠外周血中性粒细胞(PMN)胞内
【作者单位】：
【分类号】：R714.1【正文快照】：
目的研究妊娠对小鼠外周血中性粒细胞(PMN)胞内活性氧簇(ROS)、血清一氧化氮(NO)和细胞因子水平、T淋巴细胞活化的影响，初步探讨其对小鼠外周血淋巴细胞的免疫调节作用。方法以处于妊娠中期(怀孕14d)的BA比/。小鼠为研究对象，以ROS探针2一7一二氯氢化荧光素乙二脂(HZDCFDA)
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创伤性脓毒症过程中外周血PMN及组织中ICE MRNA表达的变化
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创伤性脓毒症过程中外周血PMN及组织中ICE MRNA表达的变化
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【求助】小鼠外周血中性粒细胞和单核细胞流式操作
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求助：想做小鼠外周血中性粒细胞和单核细胞的流式，查了很多帖子，仍然有些地方不是很清楚？中性粒细胞和单核细胞表面抗体应该用什么标记呢？现查阅资料整理如下单核细胞用1、cd14
中性粒细胞：1、Gr-1、cd11b双阳
2、Ly6G、cd11b双阳
3、 cd11b、cd14双阳这几种哪一种是正确的呢？时间较为紧张，急求各位帮忙！！！谢谢各位！
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目前中性粒细胞主流是CD11b，Ly6G,买ly6g要注意位点，1A8才是对的，而RB6-8C5会在单核细胞也有表达，所以最好不要采用；做完可以反选确定一下，PMN一般是SSC-A比较高的这群 单核细胞可以用cd115，比较靠谱
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overmind0571 edited on
应该是CD11b和Ly6G双阳，用于标记成熟中性粒细胞，楼上说的克隆号有参考意义。关于分群，可以先用FSC和SSC双参数分群进行初步鉴定，对FSC和SSC都高的一群分析其 CD11b和Ly6G表达情况，这样得到的细胞群纯度高。
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hezx1979 edited on
谢谢两位，我还想问一下单核细胞的标记用CD11b、CD14双阳还是只有CD68就行，大家都常用哪一种呢？
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我们用的是CD11b+ Ly6C+ Ly6G +
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【求助】小鼠外周血淋巴细胞分离培养的问题，急！！！
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这个帖子发布于5年零259天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
小弟打算做调节性T细胞的病毒RNA干扰实验，要从小鼠外周血分离出Treg细胞培养。原代行慢病毒载体介导的RNA干扰，看干扰后对淋巴细胞分化增殖的影响。存在一下问题：1.小鼠取血的问题：什么方法能取到尽可能多的血，要保证无菌。2.巴细胞分离：用的FICOLL分离液，稀释血液的时候用pbs可不可以？FICOLL分离液说明书上写的Hanks液。3.淋巴细胞培养的问题：要不要加conA,IL-2,加的话，各自浓度是多少？4.淋巴细胞培养密度问题：分离1ml血得到的淋巴细胞用多大的培养皿培养？35mm还是24孔版？
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1. 取血采用摘眼球的方法最多能取2-3ml，大部分只能取1.5ml左右；或者心脏穿刺的方法？另外，不知道你的小鼠是不是还需要继续养着，如果不继续养，可以采用提取小鼠脾脏淋巴细胞的方法；2.用分离液分离，稀释血液只要是等渗的都可以，我们用过PBS 生理盐水都没有问题；3.淋巴细胞培养的过程中，如要求培养1周以上，需要加CONA和IL-2，浓度常规参考文献，IL-2在100U/ml~250U/ml之间都可以；CONA 我们用20ug/ml；4.这个要看分离效果分离出来的淋巴细胞数量，培养浓度不宜过低最好能在1x106细胞/ml浓度及以上，看你的细胞数量确定用什么规格的培养皿或者培养板。希望能帮到你！
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1. 取血采用摘眼球的方法最多能取2-3ml，大部分只能取1.5ml左右；或者心脏穿刺的方法？另外，不知道你的小鼠是不是还需要继续养着，如果不继续养，可以采用提取小鼠脾脏淋巴细胞的方法；2.用分离液分离，稀释血液只要是等渗的都可以，我们用过PBS 生理盐水都没有问题；3.淋巴细胞培养的过程中，如要求培养1周以上，需要加CONA和IL-2，浓度常规参考文献，IL-2在100U/ml~250U/ml之间都可以；CONA 我们用20ug/ml；4.这个要看分离效果分离出来的淋巴细胞数量，培养浓度不宜过低最好能在1x106细胞/ml浓度及以上，看你的细胞数量确定用什么规格的培养皿或者培养板。希望能帮到你！
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如果你想纯化小鼠的调节性T细胞，不建议从小鼠的外周血中分离，因为小鼠的外周血太少，用Ficoll法分离后得到的淋巴细胞更少，你再分离调节性T细胞，就剩不了几颗了，完全无法满足实验需求。建议直接从小鼠的脾脏分离所需的调节性T细胞。制备脾脏的单细胞悬液非常简单，直接研磨就可以，也不用淋巴细胞分离液，得到细胞后，如果有条件的话，直接标记CD4和CD25流式分选就能够得到较多的且较纯的调节性T细胞。
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avivaqqqq 1. 取血采用摘眼球的方法最多能取2-3ml，大部分只能取1.5ml左右；或者心脏穿刺的方法？另外，不知道你的小鼠是不是还需要继续养着，如果不继续养，可以采用提取小鼠脾脏淋巴细胞的方法；2.用分离液分离，稀释血液只要是等渗的都可以，我们用过PBS 生理盐水都没有问题；3.淋巴细胞培养的过程中，如要求培养1周以上，需要加CONA和IL-2，浓度常规参考文献，IL-2在100U/ml~250U/ml之间都可以；CONA 我们用20ug/ml；4.这个要看分离效果分离出来的淋巴细胞数量，培养浓度不宜过低最好能在1x106细胞/ml浓度及以上，看你的细胞数量确定用什么规格的培养皿或者培养板。希望能帮到你！谢谢你的回复。1.小鼠不需要继续养。我试过眼内眦取血，每只只有0.1ml，我把5只小鼠的血混在一起，量还是不够，而且不知道混在一起可不可行？你说的2－3ml不是小鼠吧。当初实验设计的是外周血的淋巴细胞，不知道能不能换成脾脏的，我再看看。2.我用的天津TBD公司的分离液，全血：pbs：分离液＝1：1：2，2000rpm/20min，能分层，但白膜层很薄，很难准确的吸取。结果是pbs1500rpm/10min清洗2遍后，还是混有很多小点，怀疑是血小板。3.内眦取血很难控制无菌，看视频别人用的毛细吸管，我用针刺的办法，血顺着嘴角留下来，肯定污染了，培养一天后，就看不到细胞了。我买的peprotech的murine
IL-2,5ug的，不知道怎么换算成IU。
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kern6549 如果你想纯化小鼠的调节性T细胞，不建议从小鼠的外周血中分离，因为小鼠的外周血太少，用Ficoll法分离后得到的淋巴细胞更少，你再分离调节性T细胞，就剩不了几颗了，完全无法满足实验需求。建议直接从小鼠的脾脏分离所需的调节性T细胞。制备脾脏的单细胞悬液非常简单，直接研磨就可以，也不用淋巴细胞分离液，得到细胞后，如果有条件的话，直接标记CD4和CD25流式分选就能够得到较多的且较纯的调节性T细胞。是很少，现在实验第一步就无法继续了。你说的制备脾脏的单细胞悬液非常简单，不知能不能发个具体步骤。我咨询过这边的流式老师，他说流式分选不可行，太慢了，他说在他手上就做过一次，失败了。考虑过用免疫磁株，不过价钱太贵。现在Ficoll法粗提都没有做好，后面无法做。
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设计实验首先就需要考虑你的实验的可行性，如果你们实验室无法做到磁性分选或者流式分选，也就无法分离纯化调节性T细胞，那你的一切实验设计都是纸上谈兵，根本就无法完成。
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我也要进行Treg分选，后续培养，现在看Treg分选，要么流式，要么磁珠，现在打算用磁珠分选，因为周围没有无菌的流式分选设备。但是现在遇到的问题是原实验设计用小鼠的肺脏提取Treg，而目前公司的试剂盒都是针对淋巴结或者脾脏的，不知道实验是否可行。大算明年动手，担心花钱又费时间，还没结果。
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xiaojua 我也要进行Treg分选，后续培养，现在看Treg分选，要么流式，要么磁珠，现在打算用磁珠分选，因为周围没有无菌的流式分选设备。但是现在遇到的问题是原实验设计用小鼠的肺脏提取Treg，而目前公司的试剂盒都是针对淋巴结或者脾脏的，不知道实验是否可行。大算明年动手，担心花钱又费时间，还没结果。肺脏提取Treg，你想要提多少Treg？一个小鼠脾脏PBMC2-3*10^7，Treg5*10^5左右。肺脏的话肯定很少!
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暂时打算用4只小鼠的肺脏一起做，不够可能再加一两只吧
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xiaojua 暂时打算用4只小鼠的肺脏一起做，不够可能再加一两只吧如果Treg细胞比例很低的话，会很浪费试剂，我用的美天妮的试剂盒，一个试剂盒可分离的细胞总数是10^9，如果Treg比例小于1%的话，那就只能得到10^7个Treg。
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zougengui 如果Treg细胞比例很低的话，会很浪费试剂，我用的美天妮的试剂盒，一个试剂盒可分离的细胞总数是10^9，如果Treg比例小于1%的话，那就只能得到10^7个Treg。有道理，我要想想怎么富集一下，谢谢zougengui
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各位高手，小鼠脾脏淋巴细胞体外培养，用六孔板，放10的6次方个细胞是否合适？这个量的细胞加多少ml培养液合适？另外，最让我头疼的就是细胞换液的问题，淋巴细胞悬浮啊，要加药培养3天后，再加刺激因子1天，才能检测，4天的时间怎么解决换液的问题呢？如果每天多加一些培养液，最后把培养液加的太多，又担心，会稀释上清液中细胞因子的含量，怕用ELISA测不出。请高手们给指点一下！另外，楼上提到的问题，个人认为肺脏提Treg不可行，肺脏细胞太少了，能用流式分选的实验室不多，如果是没有充足经验的操作者，很可能会失败，浪费抗体、浪费钱、浪费时间，实验一定要三思而后行啊！
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kern6549 如果你想纯化小鼠的调节性T细胞，不建议从小鼠的外周血中分离，因为小鼠的外周血太少，用Ficoll法分离后得到的淋巴细胞更少，你再分离调节性T细胞，就剩不了几颗了，完全无法满足实验需求。建议直接从小鼠的脾脏分离所需的调节性T细胞。制备脾脏的单细胞悬液非常简单，直接研磨就可以，也不用淋巴细胞分离液，得到细胞后，如果有条件的话，直接标记CD4和CD25流式分选就能够得到较多的且较纯的调节性T细胞。
您好，我现在做的也是小鼠treg的分选扩增。流式分选的方法，细胞的得率怎样，会不会很低？我现在用的是免疫磁珠分选的方法，但是，分选的纯度不够高。不知道，你们流式分选具体效果怎样？
还有，请问你们做treg后续的扩增培养吗，效果如何？
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