半荧光定量pcr标准品RT-PCR内标怎样选择

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现在在做半定量RT-,反应有指数期和平台期,怎么来确定其合理的循环数呀?
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生物秀探花
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跑10个平行的管,
从26循环取出2管;
28循环结束时再取2管
类似这样的循环梯度,完了电泳。
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谢谢你,取出的是不是还要在72度延伸下呀?我看文献上写30个循环以上可能就到了平台期了,就没有必要做了,我就做了一个25循环的,条带有些弱。您说的,每隔两个循环取出两管最后以什么标准确定循环数呢?
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对 延伸完成 变性之前。
即使是30就到了平台,你也得至少加个32才能确定30之后就到了平台期
按照循环数小到大从左往右点胶,亮度逐步增加直至恒定,不就可以确定你所需要的循环数了吗
该用户从未签到
谢谢!是不是要选用上升期的中间数作为最佳循环数,比如从25到32,30个循环达到平台就应该选用28/29作为最佳循环数呢?
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我觉得是这样的,和别人交流过的一般在28-19个循环
该用户从未签到
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半定量RT-PCR试验心得
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