MTT检测对凋亡和坏死的判别(坏死,细胞凋亡,细胞发生) - 细胞实验 - 生物秀
标题: MTT检测对凋亡和坏死的判别(坏死,细胞凋亡,细胞发生)
摘要: [MTT检测对凋亡和坏死的判别(坏死,细胞凋亡,细胞发生)] MTT是做细胞活性检测的。请问细胞凋亡(Apoptosis)的时候一定有MTT下降吗？如果细胞发生坏死，是否也有MTT的下降？是否坏死的时候MTT的下降程度比凋亡的时候更厉害？请问区分细胞是活的还是死的，除了MTT，LOH检测外，还有其他的经典指标吗？ 关键词:[坏死 细胞凋亡 细胞发生]……
MTT是做细胞活性检测的。请问细胞凋亡(Apoptosis)的时候一定有MTT下降吗？如果细胞发生坏死，是否也有MTT的下降？是否坏死的时候MTT的下降程度比凋亡的时候更厉害？请问区分细胞是活的还是死的，除了MTT，LOH检测外，还有其他的经典指标吗？
回复MTT主要是根据检测线粒体脱氢酶的活性来判断细胞活性，无法区分凋亡和坏死，因此凋亡和坏死都可以造成MTT检测中OD值的降低。还有苔盼蓝染色法，CCK-8法回复都会的，要区别的话可以借助流式细胞技术来检测回复还有Ｈ（氚）－ＴＤＲ掺入法，氚标记的胸腺嘧啶核苷可以作为ＤＮＡ的前体物质参与细胞的核酸代谢，增殖的细胞将它摄入而参与ＤＮＡ的合成，用β－液闪仪测定氚标记的胸腺嘧啶核苷就可确定活细胞数了．回复另外还有几种方法，仅供参考．LDH释放法酸脱氢酶（LDH）在胞浆内含量丰富，正常时不能通过细胞膜，当细胞受损伤或死亡时可释放到细胞外，此时细胞培养液中LDH活性与细胞死亡数目成正比，用比色法测定并与靶细胞对照孔LDH活性比较，可计算效应细胞对靶细胞的杀伤%。本法操作简便快捷，自然释放率低，可用于CTL及NK细胞活性测定及药物、化学物质或放射引起的细胞毒性，现已有LDH法测定CTL活性试剂盒（promega）。应注意较高浓度FCS中所含LDH可能干扰结果。51铬（Cr）释放法，本法结果准确、重复性好，但也存在以下不足：①使用放射性的51Cr不利于安全操作及废物处置，且需特殊测定；②51Cr自发释放率高，常因不同靶细胞标记效率变化差别大而影响结果判定；③51Cr半衰期（27.8天），无法用于需多次测定的动物试验；④细胞共育时间短而试验操作步骤多，不能在单个细胞水平进行测定。荧光测定法：如： alamarBlue一步荧光测定法alamarBlue为活细胞代谢指示剂，易溶于水，进入细胞后经线粒体酶促还原产生荧光及颜色变化，可用以定量。具体测定方法是：在靶细胞孔（T）、效应细胞孔（E）和实验孔（T+E）各加alamarBlue,共育6~24h后用板式荧光测定仪测530nm（发射）/590nm（散射）波长荧光强度，将T及E孔荧光均值相加后减去实验孔（T+E）荧光均值，与T孔荧光均值比较即可计算CTL对靶细胞的溶解%。本法与51Cr释放法纺织厂较有以下特点：①特异性相当但灵敏度更高，重复性好，组内及组间差异很小。②使用方便，无需预先标记靶细胞及离心和洗涤步骤，适用于大批量样品的高准确性自动测定。③alamarBlue的使用浓度不影响细胞正常代谢及基因表达，可在无菌条件下测定后继续培养扩增细胞，有利于对培养细胞的连续监测及深入研究。④还可测定淋巴细胞增殖或化学物质的细胞毒性及细胞凋亡(Apoptosis)。⑤多种粘附或非粘附细胞系、细菌、真菌等可用作靶细胞，所需效应细胞数较少（3×105/孔即可）。⑥含胎牛（FCS）及酚红的培养液也不干扰测定结果。回复谢谢各位.是否能这样理解,即MTT反应死亡的发生包括坏死和凋亡.但是不能区分凋亡和坏死,也就是说坏死MTT不一定比凋亡MTT高.LDH放映细胞坏死,凋亡的时候LDH不增高,坏死的时候增高.再问苔盼蓝染色法能够区分凋亡和坏死吗?
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【求助】细胞计数与MTT在测定细胞增殖方面有什么区别
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这个帖子发布于10年零175天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
对接受干预的细胞进行培养，培养一段时间之后方法1 ：细胞计数，并计算细胞浓度，细胞增殖抑制率＝（空白组细胞浓度－干预组细胞浓度）÷空白组细胞浓度×100％方法2 ：96孔板培养接受干预的细胞，做MTT实验，细胞增殖抑制率＝（空白组OD值－干预组OD值）÷空白组OD值×100％由这两种方法得出的
“细胞增殖抑制率”
是否意义相同原理上： 细胞计数法只能反映绝对细胞数的多少，而从MTT法的原理中知道，它反映的是细胞的增殖力，只有增殖期的细胞才能被着色，所以是否两者的结果在意义和数值上都有所不同请教，谢谢
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细胞计数法应该是反映增殖比较好的指标啊，理论上来讲是最好的。但是主观性太强，自然说服力就差一点了。ＭＴＴ好东西啊，但是只在大规模的药物筛选时候比较常用，说服力强。省钱，精确性不够啊，不是高手的话，常常存在重复性差的问题。是个间接反映细胞增殖的指标，想靠这个发ＳＣＩ，有点悬啊！直接反映细胞增殖的是ＢＲＤＵ和什么Ｔ3掺入法，后者有点放射性，但是对健康影响比较小的，前者价钱贵啊。
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谁帮我看看这个帖子啊？
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我查过相关的资料大家说法不一，还有没有高手知道的多一些的？
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我做了好多MTT，结果发现不理想，原因我认为是和该实验手段有关，虽然加入了MTT,但是死细胞的酶动力学并没有完全消失，检测的结果也细胞计数有较大的差距。要做 MTT的同学要慎重。另外，我认为MTT仅在看趋势方面可以，在精确检测抑制率方面还是不可靠。本人看法，供参考。
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同志的意思是，在MTT实验中，死细胞也会被着色？
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peachfang flyskype
同志的意思是，在MTT实验中，死细胞也会被着色？死细胞也会着色？不会。
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fangwhite 原理上： 细胞计数法只能反映绝对细胞数的多少，而从MTT法的原理中知道，它反映的是细胞的增殖力，只有增殖期的细胞才能被着色，所以是否两者的结果在意义和数值上都有所不同MTT的原理是根据细胞内的线粒体酶与MTT反应会生成 formazan，假设同种细胞的线粒体酶是相等的，每个细胞反应生成的formazan相等，在一定的细胞数量范围内，细胞数与产生的颜色呈正比。所以如果正确使用MTT法测得的OD值，就相当于细胞数量的相对数。也就是MTT等同于细胞计数。
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本人觉得mtt法的说服力更强一些
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1.意义相同 2.MTT是个比较好的反映细胞数的试验，但其有很大的缺陷，需要控制试验条件才能使其符合事实，接种的细胞数和培养时间是很重要的两个因素。3.显微镜下可见的明显的差别，如果不是足够大，MTT就不能检测出差别。
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dongwp MTT的原理是根据细胞内的线粒体酶与MTT反应会生成 formazan，假设同种细胞的线粒体酶是相等的，每个细胞反应生成的formazan相等，在一定的细胞数量范围内，细胞数与产生的颜色呈正比。所以如果正确使用MTT法测得的OD值，就相当于细胞数量的相对数。也就是MTT等同于细胞计数。这只是MTT原理或者说理想的情况下，如果干预因素本身就影响了线粒体的活动的话，肯定不如直接细胞计数。另外，有没有在加入MTT孵育后在显微镜下看过细胞？会发现其实细胞间个体差异很大的，有的细胞黑成一个团，有的却仅仅有些黑丝~~~~这又该怎么解释？
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【求助】MTT检测细胞增值活性
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这个帖子发布于7年零171天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
我养的内皮祖细胞，想用MTT检测细胞增殖活性。用的是碧云天的细胞增殖与毒性检测试剂盒。内有MTT溶液和formazon溶解液。原说明书没有了，从网上当下来的说明书中使用说明是：1. 通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100微升5000个细胞（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定）。按照实验需要，进行培养并给予0-10微升特定的药物刺激。 2. 每孔加入10微升MTT溶液，在细胞培养箱内继续孵育4小时。 3. 每孔加入100微升formanzan溶解液，在细胞培养箱内再继续孵育。直至在普通光学显微镜下观察，formazan全部溶解。 4. 在570nm测定吸光度。如无570nm虑光片，可以使用560-600nm的虑光片。 有几个疑问1、在加入MTT溶液前是否要去除培养基2、在加入formazan溶解液前要去除培养基吗？我们实验室酶标仪要求每孔量不超过300微升，如果取200微升培养液培养细胞，再加入100微升溶解液，那就不好检测了。3、加入formazan溶解液后要培养多长时间，看网上二甲基亚砜都是10分钟就好了，溶解液有的说要孵育4小时，究竟应该用哪个？谢谢！！！
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加mtt前不用去掉培养基，加formazan溶解液的时候要去掉。至于孵育多久，我就不清楚了
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我刚刚做的，DMSO振荡10min就OK了
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谢谢诸位支持，昨天给碧云天的技术支持发信，今天收到回复如下：加入MTT前保留原有的细胞培养液。加入MTT前，要求每孔的培养液用量为100微升。加入formazan溶解液前不要去除培养基。如果前面的体积是100微升加10微升，这时的总体积是210微升，对于检测体积方面就没有问题了。 要求孵育4小时，并需确定结晶完全溶解。DMSO溶解是快一些，但需要把培养液吸掉，这样很容易吸掉结晶，产生误差。
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还要注意你所加的药物是不是和MTT反应，或者你所加的药物本身在570nm下有吸收。
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那通过MTT法怎样找出最适合浓度呢？
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关于丁香园检测细胞凋亡并计数的方法除了MTT法和流式细胞仪，还有什么其他方法吗？_百度知道
检测细胞凋亡并计数的方法除了MTT法和流式细胞仪，还有什么其他方法吗？
检测细胞凋亡并计数的方法除了MTT法和流式细胞仪，还有什么其他方法吗？还有流式细胞仪一定要通过染色才能检测细胞凋亡吗？
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就流式最好了，除非是悬浮培养的细胞。活细胞可以用caspase的底物染色。检测凋亡，一般都要染色要计数的话，是最简便快捷的方法，有配套试剂盒
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