高压过的18.2水中有rna酶抑制剂吗

提RNA的枪头和离心管能直接高压灭菌俩次,不用DEPC水处理吗?如题所述,这样可以吗?有这样做过的吗?
博凌科为-为你不可以,因为DEPC是一种强烈但不彻底的RNA酶抑制剂.它通过和RNA酶的活性基团组氨酸的咪唑环结合使蛋白质变性,从而抑制酶的活性.高压两次是无法除去RNA酶的,这样还是会存在RNA酶污染并讲解你的RNA.是在嫌麻烦,可以买一些滤芯枪头,无需处理,但是会比较贵.
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标题: 避免RNA酶污染的方法
摘要: RNase酶非常稳定,是导致RNA降解最主要的物质。它在一些极端的条件可以暂时失活,但限制因素去除后又迅速复性。用常规的高温高压蒸气灭菌方法和蛋白抑制剂不能使所有的RNase完全失活。为了获得高质量的真核细胞mRNA,必须使用RNA酶的抑制剂或采用下述的破碎细胞和灭活RNA酶同……
RNase酶非常稳定,是导致RNA降解最主要的物质。它在一些极端的条件可以暂时失活,但限制因素去除后又迅速复性。用常规的高温高压蒸气灭菌方法和蛋白抑制剂不能使所有的RNase完全失活。为了获得高质量的真核细胞mRNA,必须使用RNA酶的抑制剂或采用下述的破碎细胞和灭活RNA酶同步进行的方法,最大限度地降低细胞破碎过程中所释放的RNA酶的活性。同时,避免偶然引入实验室内其他潜在的痕量RNA酶也很重要。下面列举避免RNA酶污染问题的一些注意事项。大多数有经验的研究者并不拘泥于这些注意事项,只是在遇到问题时可能采用其中的一种或几种方法加以解决。我们谨将下述内容作为解决RNA酶污染问题的实验指南。 1.塑料制品:尽可能使用无菌、一次性塑料制品。已标明RNase-free的塑料制品,如没有开封使用过,通常没有必要再次处理。对于国产塑料制品,有些厂家提供的产品已达到RNase-free,可以直接使用,再次处理容易造成二次污染,得不偿失。但原则上国产塑料制品处理后方可使用。处理方法如下: (1)在玻璃烧杯中注入去离子水,加入焦碳酸二乙酯(DEPC)使DEPC的终浓度为0.1%。注意:DEPC有致癌之嫌,须在通风柜中小心操作。 (2)将待处理的塑料制品放入一个可以高温灭菌的容器中,注入DEPC水溶液,使塑料制品的所有部分都浸泡到溶液中。 (3)在通风柜中37℃或室温下处理过夜。 (4)将EDPC水溶液小心倒入废液瓶中,用铝箔封住含DEPC水处理过的塑料制品的烧杯,高温高压蒸气灭菌至少30分钟。上述处理可以除去器皿上痕量的DEPC,以防DEPC通过羧甲基化作用对RNA的嘌呤碱基进行修饰。 (5)用合适的温度(80-90℃)烘烤至干燥,置于干净处备用。 2.玻璃和金属制品: 实验室用的普通玻璃和金属器皿经常有RNA酶污染,使用前必须于180℃干烤8小时或250℃烘烤3小时以上。另一种方法是用0.1%的DEPC水溶液浸泡。 3.电泳槽:用于RNA电泳的电泳槽应用去污剂洗干净,再用水冲洗,用乙醇干燥,然后灌满3%的H2O2溶液,于室温放置10分钟,然后用0.1%DEPC处理过的水彻底冲洗电泳槽。最好能留出一些玻璃器皿,塑料制品和电泳槽作上特殊标记,存放在指定地点,为RNA实验专用。 4.移液器: RNase的又一污染源是移液器。根据移液器制造商的要求对移液器进行处理。一般情况下采用用DEPC配制的70%乙醇擦洗移液器的内部和外部,基本达到要求。移液器金属退头器是RNA酶的一个重要来源,实验前最好取下它。 5.溶液:用高压灭菌的水和RNA研究专用的化学配制溶液,用干烤过的药匙称取,将溶液装入无RNA酶的玻璃器皿。可能的话溶液应用0.1% DEPC水于 37℃至少处理12小时,然后于100℃加热15分钟或在15 lbf/in2(1.034×105Pa)的高压下蒸气灭菌30分钟。注:DEPC可与胺类迅速发生化学反应,因此不能用来处理含有一类的缓冲液,可存几瓶新的,未开封的晶体以制备无RNA酶的溶液。 6.研究人员: RNA酶广泛存在于人的皮肤上,最主要的潜在污染源是研究人员的手。因此,在准备分离和分析RNA的材料和溶液时,以及在涉及RNA的一切操作过程中,都应戴一次性手套,接触“脏的”玻璃器皿和其他物品以后,手套就可能沾染上RNA酶,因此进行RNA实验时应勤换手套。
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& 学年高一生物苏教版必修1课时作业:18《ATP和酶》(二)
学年高一生物苏教版必修1课时作业:18《ATP和酶》(二)
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资料概述与简介
目标导航 1.举例说明酶的特性和酶促反应的过程。2.探究影响酶活性的因素。
一、酶的催化作用及酶的作用机理
1.酶具催化作用的实验过程及现象
2.酶催化的机理
酶催化作用的实质就在于它能降低化学反应的__________,使反应在较低________水平上进行,从而使化学反应______________。
二、酶的特性
1.酶具有特异性的实验
(1)实验原理
淀粉在____________的催化作用下,能够水解成麦芽糖。在________________的条件下,斐林试剂能使麦芽糖氧化,自身则还原成____________的氧化亚铜沉淀。因此,斐林试剂可以用来鉴定溶液中是否有还原性糖,进而看出淀粉酶是否只能催化淀粉水解,不能催化其他糖类水解。
(2)实验过程与现象
2.酶在常温、常压、适宜的pH等温和条件下具有很高的催化效率,即____________。
三、影响酶促反应速率的因素
1.温度:反应速率最高时的温度通常称为酶促反应的________________。适当提高温度能加速酶促反应;温度过高,加速了________________,反而会使反应速率下降。
2.pH:酶表现出最大活性时的pH称为酶的______________。pH能改变酶的________________。
3.酶的浓度
温度和pH不变,底物充足时,酶的浓度与酶促反应速率成________________。
4.底物的浓度
温度和pH不变,酶的浓度一定的情况下,在底物的浓度较低时,反应速率与底物浓度成____________关系;当底物浓度达到某一定值后,底物浓度增加,反应速率不再________。
知识点一 酶的功能
1.下列关于酶的叙述中,正确的是(  )
A.人体中酶的活性受温度、pH的影响,并只能在人体的细胞内起作用
B.酶的形成都要经过核糖体的合成、内质网和高尔基体的加工等几个阶段
C.酶能降低化学反应的活化能,因此能加快化学反应速率
D.酶均是由具有分泌功能的腺细胞合成的,具有高效性和专一性
2.多酶片中含有的蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶具有辅助消化的作用。关于酶的叙述,正确的是(  )
A.多酶片中的酶都是蛋白质
B.一个酶分子只起一次作用
C.酶提供反应开始时所必需的活化能
D.食物消化过程需要酶的作用,而细胞内的化学反应不需要酶的作用
知识点二 酶的特性
3.研究表明:一分子过氧化氢酶能在1分钟内使5×105个过氧化氢分子分解成氧和水,相当于Fe3+催化速率的109倍,但是对糖的水解却不起作用,这个事实说明酶分别具有(  )
A.多样性,稳定性B.高效性,多样性
C.高效性,特异性D.高效性,稳定性
知识点三 影响酶促反应的因素
4.甲、乙、丙三图依次表示酶浓度一定时,反应速度和反应物浓度、温度、pH的关系。据图判断下列叙述中不正确的是(  )
A.甲图表明当反应物浓度超过某一浓度时,反应速率受酶浓度的制约将不再上升
B.乙图中a点以后,随温度升高酶的活性下降
C.丙图可以表示胃蛋白酶催化反应的速率曲线
D.三图说明反应物浓度、温度、pH对反应速率均有影响
5.某同学为了探究温度对唾液淀粉酶催化作用的影响,设计了下表所示的实验。其他同学看了该实验设计后,提出了下列修改意见,其中正确的是(  )
A.1号试管不必加入2 mL蒸馏水,而应该加入2 mL新鲜唾液
B.2号试管不必加入2 mL新鲜唾液,而应该加入2 mL蒸馏水
C.2号试管应该保持在37℃环境中进行恒温处理
D.1号试管应加入2 mL新鲜唾液,并保持在0℃环境中进行恒温处理
1.下列哪项不符合有关酶的叙述(  )
A.酶是有机物
B.酶的催化效率很高
C.酶起催化作用时,和无机催化剂相同,是降低化学反应的活化能
D.酶在催化反应中本身也发生了变化
2.酶加速化学反应的根本原因是(  )
A.降低反应体系的自由能B.增加反应体系的自由能C.降低反应的活化能D.调节了反应所需的酸碱度
3.嫩肉粉是以蛋白酶为主要成分的食品添加剂,就酶的作用特点而言,下列使用方法中最佳的是(  )
A.炒肉的过程中加入
B.肉炒熟后起锅前加入
C.先用沸水溶解后与肉片混匀,炒熟
D.室温下与肉片混匀,放置一段时间,炒熟
4.做唾液淀粉酶催化淀粉实验时,用口含一小口清水然后将含过的清水加入淀粉溶液中,也会使淀粉消化,和用纯唾液的效果一样,这一现象表明(  )
A.酶的特异性B.酶的高效性
C.酶的多样性D.酶受温度和pH的影响
5.某学生为了证明唾液能够使淀粉水解,进行了下面的实验:先用碘液检验一块干面包,变蓝色;他嚼碎了另一块干面包,一段时间后用斐林试剂检验,嚼碎的面包出现砖红色;得出结论。此实验设计最大的失误在于(  )
A.未对面包做还原性糖检验
B.未对唾液做淀粉检验
C.未对嚼碎的面包做淀粉检验
D.应该用双缩脲试剂检验
6.水稻细胞内合成的某物质,能够在常温下高效分解淀粉,该物质(  )
A.在4℃条件下易变性B.只含有C、H
C.也能催化淀粉合成D.含有羧基
7.科学家在某温泉喷水口中发现一种耐热细菌,其最适环境为温度80℃和pH为7.0。从这种细菌体内提取到一种细菌蛋白酶,现将这种细菌蛋白酶、胃蛋白酶、唾液淀粉酶、乳清蛋白、淀粉和适量水混合后,装入一容器内,调整pH至7.0,保存于80℃的水浴锅内。过一段时间后,容器内最终剩余的物质是(  )
A.细菌蛋白酶、多肽、淀粉、水
B.胃蛋白酶、唾液淀粉酶、多肽、麦芽糖、水
C.细菌蛋白酶、淀粉、胃蛋白酶、多肽、水
D.细菌蛋白酶、胃蛋白酶、麦芽糖、水
8.下图表示在不同条件下,酶催化反应的速率(或生成物量)变化,有关叙述不正确的是(  )
A.图①中虚线可表示酶量增加一倍时,底物浓度和反应速率的关系
B.图②中虚线表示增加酶浓度,其他条件不变时,生成物量的变化示意曲线
C.若图②中的实线表示Fe3+的催化效率,则虚线可表示过氧化氢酶的催化效率
D.图③不能表示在反应开始后的一段时间内,反应速率与时间的关系
9.酶A、B、C是大肠杆菌的三种酶,每种酶只能催化下列反应链中的一个步骤,其中任意一种酶的缺失均能导致该菌因缺少化合物丁而不能在基本培养基上生长。
化合物甲化合物乙化合物丙化合物丁
现有三种营养缺陷型突变体,在添加不同化合物的基本培养基上的生长情况如下表:
   突变体
添加物   突变体a
(酶A缺陷) 突变体b
(酶B缺陷) 突变体c
化合物乙 不生长 不生长 生长
化合物丙 不生长 生长 生长
由上表可知:酶A、B、C在该反应链中的作用顺序依次是(  )
A.酶A、酶B、酶CB.酶A、酶C、酶B
C.酶B、酶C、酶AD.酶C、酶B、酶A
题号 1 2 3 4 5 6 7 8 9
10.如图为“探索淀粉酶对淀粉和蔗糖水解的作用”的实验装置图,据图回答下列问题。
(1)振荡2支试管,然后将其下部浸到60℃左右的热水中,保温5 min。
①用60℃左右的热水保温,是因为α-淀粉酶的____________________________________。
②保温5 min的目的是让______________________________________。
(2)5 min以后取出试管,往2支试管中分别加入2 mL斐林试剂,并水浴加热1 min。在此过程中,2支试管中溶液颜色的变化分别是:甲试管______________________;乙试管
________________。设置乙试管的目的是作为________。
(3)解释甲、乙两试管中溶液颜色变化的原因。
①甲试管_____________________________________________________;
②乙试管__________________________________________________________。
(4)上述实验现象说明了___________________________________________。
(5)从上述实验结果可得到的结论是__________________________________。课前预习
一、1.3 mL 2滴蒸馏水 振荡 无明显变化2.活化能 能量 加速
二、1.(1)淀粉酶 水浴加热 砖红色 (2)2 mL 2 mL 5 min 2 mL 1 min 有砖红色 无砖红色 2.高效性
三、1.最适温度 酶蛋白的变性 2.最适pH 活性中心 3.正比例关系 4.正比例 增加
方法点拨 (1)证明酶的本质是蛋白质的依据
①酶水解后最终产物是氨基酸,酶被蛋白酶水解而失活。蛋白酶的合成:在核糖体上由不同的氨基酸脱水缩合而成。
②酶是具有生物活性的大分子,凡是能使蛋白质变性的因素(如高温、强酸、强碱等)都可使酶变性失活。
③酶也具有蛋白质所具有的化学呈色反应(与双缩脲试剂反应呈紫色)。
(2)核酶(RNA):如四膜虫的rRNA前体具有催化活性。核酶遇派洛宁染液呈红色证明是RNA。
2.A [多数酶为蛋白质,少数酶为RNA。多酶片中的酶全为消化酶,其化学本质为蛋白质。酶的作用原理是降低化学反应的活化能,而不是提供反应开始时所需的活化能。另外,生物体内各种化学反应,不管是食物消化,还是细胞内的化学反应,均需酶的催化。]
知识链接 酶的作用机理
(1)酶在细胞代谢中的作用
在细胞代谢过程中,酶的作用仅是催化化学反应的进行,并不为反应提供物质和能量。
(2)酶能降低化学反应活化能
(3)酶与一般催化剂的共同点
①改变化学反应速率,本身不被消耗。
②只能催化已存在的化学反应。
③降低活化能,使反应速率加快。
④加快化学反应速率,缩短达到平衡的时间,但不改变平衡点。
特别提醒 酶在反应中不被消耗,可利用多次,但时间过长,催化能力降低甚至丧失,被称为钝化。
思路导引 正确解答该题应围绕酶的特性展开以下思考:(1)过氧化氢酶的催化效率是Fe3+的109倍,这说明了什么?(2)过氧化氢酶对糖的水解却不起作用,说明了什么?(3)以上事实说明了酶具有什么特性?
知识链接 酶对化学反应的影响
(1)甲图说明:在底物充足,其他条件适宜的情况下,酶浓度与酶促反应速率成正比。
(2)乙图说明:酶A会促进A反应物的酶促反应,酶B则不会,所以酶具有特异性。
(3)丙图说明
①与无机催化剂相比,酶的催化效率更高。
②酶只会缩短达到化学平衡所需的时间,不改变化学反应的平衡点。
4.C [胃蛋白酶的最适pH为2.0,显然丙图曲线不能表示胃蛋白酶催化反应的速率变化。]
知识链接 pH和温度对酶活性的影响
(1)甲图说明:①在最适pH时,酶的催化作用最强,高于或低于最适pH,酶的催化作用将减弱;②过酸过碱都会使酶失活;③不同的酶最适pH不同。
(2)乙图说明:①在一定温度范围内,随温度的升高,酶的催化作用增强,超过这一范围酶催化作用将减弱;②低温只会抑制酶的活性,而高温会使酶失活。
(3)丙图说明:反应溶液pH的变化不影响酶作用的最适温度。
5.A [实验的自变量是温度,除两试管控制温度不同之外,其他方面都是相同的。]
思路导引 考查温度对酶活性影响的实验设计。解答本题首先要掌握实验原理、方法、过程及结果,尤其注意对照实验的设计,要突出单一变量原则,然后逐项分析。
实验链接 “探究温度对酶活性影响”实验结果的鉴定方法
本实验不宜选用斐林试剂,因为斐林试剂与还原性糖只有在加热的条件下才能有砖红色沉淀生成,而该实验需严格控制不同的温度。
1.D [酶是一种有机催化剂,具有无机催化剂的一些特点,如都是降低化学反应的活化能,改变化学反应速率,和无机催化剂一样,在化学反应前后,性质和数量不变。同时酶又具有自己的特点,如酶的催化效率很高,不能在高温、高压、强酸或强碱等条件下保持其活性等。]
2.C [大家知识,反应中能发生有效碰撞的分子称为活化分子。活化分子越多,反应速率越快。为了使反应物发生有效碰撞,需要从外部供给能量,这部分能量称为活化能。反应需要的活化能越少,反应就越易进行,酶的作用就在于降低化学反应所需要的活化能。]
3.D [蛋白酶作为一种生物催化剂,其活性受温度、pH等条件的影响,炒、煮等措施都会因温度过高而导致酶失活。]
4.B [题干的意思是唾液用量极少与用量较多的催化效率一样,说明酶具有高效性。]
5.A [干面包中还没有检测是否含有还原性糖。]
6.D [由题意知,该物质在细胞内合成,具有生物催化作用,故该物质为酶。生物体内绝大多数的酶是蛋白质,蛋白质由氨基酸脱水缩合形成,一条肽链上至少含有一个氨基和一个羧基;酶的活性易受温度、pH的影响,低温时酶的活性受抑制但不会变性,高温、pH过高或过低会使酶变性失活;蛋白质主要含C、H、O、N四种元素,有的蛋白质还含P、S等元素;酶有特异性,一种酶只能催化一种或一类物质的化学反应。]
7.A [在pH为7.0,温度为80℃的条件下,只有细菌蛋白酶具有酶活性,而胃蛋白酶、唾液淀粉酶、乳清蛋白作为蛋白质,都将被细菌蛋白酶分解为多肽,由于唾液淀粉酶被分解,所以不可能将淀粉分解。]
8.D [底物浓度充足时,酶促反应与酶浓度成正比,图①中虚线反应速率加快一倍,可表示为酶量增加一倍时所引起的;催化剂只能缩短达到化学平衡所需要的时间,但不改变化学反应的平衡点,同时酶的催化效率高,故图②中虚线表示增加酶浓度,生成物量的变化示意曲线;实线若表示Fe3+的催化效率,则虚线为过氧化氢酶的催化效率;酶促反应开始时底物浓度高反应快,后来底物逐渐被分解反应速率降低。]
9.D [突变体c加入化合物乙、丙都生长,说明突变体c不能由化合物甲合成化合物乙,即酶C作用于化合物甲合成化合物乙的过程。同理突变体a加入化合物乙、丙都不生长,说明不能由化合物丙合成化合物丁,即酶A作用于化合物丙合成化合物丁的过程。]
10.(1)①最适催化温度是50~75℃ ②淀粉分解得多,产生的麦芽糖较多 (2)由蓝色变为砖红色 无颜色变化 对照 (3)①淀粉被淀粉酶分解为具有还原性的麦芽糖,在水浴加热条件下,使蓝色的Cu(OH)2还原为Cu2O而呈现砖红色 ②淀粉酶不能将蔗糖分解,蔗糖不具有还原性(4)淀粉酶能催化分解淀粉为还原性的麦芽糖(5)酶具有特异性
解析 酶发挥作用需要适宜的条件,在此实验中自变量为反应物类型,因此要控制酶处在适宜的温度和pH条件下,并且要给予足够长的时间使反应进行。在适宜的条件下淀粉酶可以使淀粉分解成麦芽糖,麦芽糖具有还原性可以和斐林试剂反应生成砖红色沉淀,淀粉酶不能分解蔗糖而蔗糖又不具有还原性,不能与斐林试剂发生反应,这一实验验证了酶具有特异性。
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为了获得高质量的真核细胞mRNA, 必须使用RNA酶的抑制剂或采用下述的破碎细胞和灭活RNA酶同步进行的方法,最大限度地降低细胞破碎过程中所释放的RNA酶的活性。同时,避免偶然引入实验室内其他潜在的痕量RNA酶也很重要。下面列举避免RNA酶法染问题的一些注意事项。大多数有经验的研究者并不拘泥于这些注意事项,只是在遇到问题时可能采用其中的一种或几种方法加以解决。
实验程序 RNA 酶的抑制剂 破碎细胞和灭活RNA酶同步进行的方法
(一)实验程序 如不谨慎操作,外源性RNA酶可以通过下述途径污染RNA制品: (1)玻璃制品、塑料制品和电泳槽 灭菌的一次性使用的塑料制品基本上无RNA酶,可以不经预处理直接用于制备和贮存RNA。实验室用的普通玻璃器皿和塑料制品经常有RNA酶法染,使用前必须于180 ℃干烤8小时或更长时间(玻璃器皿)或用氯仿冲洗(塑料制品)。另一种方法是用0.1 %焦碳酸二乙酯(DEPC)的水溶液浸泡用于制备RNA的烧杯,试管和其他用品。DEPC是RNA酶的强烈抑制剂,但其作用并不是绝对的(Fedorcsak和Ehrenberg,1966)。灌满DEPC的玻璃或塑料器皿在37℃放置2小时,然后用灭菌水淋洗数次, 并于100℃干烤15分钟(Kumar和Lindberg,1972)。在15 lbf/in2(1.034x105Pa)高压蒸氯灭菌15分钟。上述处理可以除去器甲上痕量的DEPC,以防DEPC通过羧甲基化作用对RNA的嘌呤碱基进行修饰。
羧甲基化的RNA在无细胞体系中翻译效率很低,然而,除非其中大部分嘌呤碱基均被修饰,否则其形成DNA:RNA或RNA:RNA杂交休的能力并不明显降低。用于RNA电泳的电泳槽应用去污剂洗干净,再用水冲洗,用乙醇干燥,然后灌满3%的H2O2溶液,于室温放置10分钟,然后用0.1 %DEPC处理过的水彻底冲洗电泳槽。最好能留出一些玻璃器皿、塑料制品和电泳槽作上特殊标记,存放在指定地点,为RNA实验专用。
(2)研究人员造成的污染 RNA酶最主要的潜在污染源是研究人员的手。因此,在准备分离的和分析RNA的材料和溶液时,主有涉及RNA的一切操作过程中,都应戴一次性手套,接触“胖的”玻璃器皿和其他物品以后,手套就可能沾染上RNA酶,因此进行RNA实验时应勤换手套。
(3)污染的溶液 用高压灭菌的水和RNA研究专用的化学试剂配制溶液,用干烤过的药匙称取试剂,将溶液装入无RNA酶的玻璃器皿。可能的话溶液均应用0.1%DEPC于37℃至少处理12小时,然后于100℃加热15分钟或在15lbf/in2(1.034x105Pa)的高压下蒸气灭菌15分钟。注:DEPC可与胺类迅速发生化学反应,因些不能用来处理含有Tris 一类的缓冲液。可存几瓶新的未开封的Tris晶体以制备无RNA酶的溶液。
(二)RNA酶的抑制剂 下面介绍3种广泛应用的特异性RNA酶抑制剂。 (1)RNA酶的蛋白质抑制剂是 从人胎盘分离的一种蛋白质可与多种RNA酶紧密结合(KI≈3x1010)形成非共价结合的等摩尔复合物,使RNA酶失活。此蛋白质体内可能是血管生成素的抑制剂,血管生成素是氨基酸序列和推测的三级结构与胰RNA酶类似的一种血管生成因子, 几个厂家以不同的商品名出售这种抑制剂,该蛋白质应置于含5mmol/L二硫苏糖醇(DTT)的50%甘油中,贮存于-20℃。抑制剂制品冻融数次后或放置在氧化条件下即应弃之不用,因为上述处理会使蛋白质变性从而释放出所结合的RNA酶。因此,在使用变性剂裂解哺乳动物细胞这一提取RNA的初始步聚中不应使用这种蛋白抑制剂。然而职用更温和的裂解方法时应使用这种抑制剂,并且在后续的所有RNA纯化步骤中均应有此蛋白质存在。由于酚抽提可以除蛋白质抑制剂,故应在纯化过程中补加几次抑制剂。其最大活性的发挥要求巯基试剂,而且它并不干扰反转录或mRNA在无细胞体系中的翻译。
(2)氧钒核糖核苷复合物 这种由氧钒(1V)离子和4种核糖核苷之中的任意一种所形成的复合物,是量种过渡态类似物,它能与多种RNA酶结合并几科能百分之百地抑制RNA酶的活性。这4种氧钒核糖核苷复合物可加入完整细胞中,在RNA提取和纯化的所有过程中,其使用浓度都是10mmol/L。所得到的mRNA可直接在硅卵母细胞中进行翻译, 并能作为某些外酶促反应(如mRNA反转录)的模板。然而氧钒核糖核苷复合物强烈抑制mRNA在无细胞体系中的翻译,因此必须用含0.1 %羟基喹淋的苯酚[ 用0. 01mol/LTris.Cl(pH7.8)平衡]多次抽提以去除之。有几家公司出售氧钒核糖核苷复合物。
(3)Macaloid(硅藻上)Macaloid是一咱粘土,很多年前就发现它能吸附RNA酶,用缓冲液将其制成浆液,以0.015%(W/V)的终浓度溶解细胞。 这种粘土随同它所吸附的RNA酶可在后续的RNA纯化过程中(如酚抽提后)经离心去除。
(三)破碎细胞和灭活RNA酶同步进行的方法 用强烈变性如盐酸胍或硫氰酸胍溶液能迅速溶解蛋白质, 导致细胞结构破碎,核蛋白由于其二级结构的破坏而从核酸上解离下来。RNA酶可耐受多种处理等,因此可联用上述试剂,从组织中,如富含RNA酶的胰腺中,提取完整无损的RNA。下述实验程序系列利用RNA酶抑制剂和(或)能迅速灭活RNA酶的有关方法从组织或细胞培养物中分离总RNA、核内RNA和胞质内RNA。
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