dns法测的是纤维素什么酶的活力?
勇哥专属9wka
就是纤维素酶,也就是整个酶系的.因为DNS是与还原糖反应的,所以必须是酶系共同作用,才能将纤维素最终降解成葡萄糖.
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豪哥威武513115
谷物种子萌发时淀粉酶活力的测定 几乎所有植物中都存在淀粉酶.尤其是萌发的禾谷类种子.淀粉酶活性最强.主要是α-淀粉酶和β-淀粉酶.种子萌发时.淀粉酶活性随萌发时间迅速增加.将淀粉分解成小分子糖类.供幼苗生长.α-淀粉酶随机水解淀粉的α-1.4-糖苷键.作为淀粉分解的起始酶而起主要作用,其水解产物为麦芽糖.麦芽三糖.糊精等还原性糖,β-淀粉酶水解非还原端的第二个α-1.4-糖苷键.水解产物为麦芽糖.并能使一部分糊精糖化.本实验以萌发种子为材料.测定其中α-淀粉酶和β-淀粉酶活性的差异.[原理] 两种淀粉酶具有不同理化特性.α-淀粉酶不耐酸.在PH3 6以下迅速钝化,β-淀粉酶不耐热.在70℃下15Min则被钝化.据此.在测定时钝化其中之一.就可以测定出另一种酶的活力.本实验采用加热钝化β-淀粉酶测出α-淀粉酶活力.再与非钝化条件下测得的总淀粉酶活力比较.求出β-淀粉酶活力.淀粉的水解产物麦芽糖及其他还原性糖能与3.5-二硝基水杨酸试剂反应.使其还原生成红色3-氨基-5-硝基水杨酸.在一定范围内.其颜色深浅与淀粉酶水解产物的浓度成正比.可用麦芽糖(或葡萄糖)浓度表示.用比色法测定淀粉生成的还原糖的量.以单位重量样品在一定时间内生成的麦芽糖的量表示酶活力.[仪器与用具] 分光光度计,离心机,恒温水浴器,研钵,具塞刻度试管25Ml 13支.刻度吸管1ml.2ml.5Ml各1支,容量瓶50Ml 2支.[试剂] 麦芽糖标准液(1Mg/Ml):称取100Mg麦芽糖.用蒸馏水溶解并定容至100Ml.DNS试剂(3.5-二硝基水杨酸):精确称取3.5-二硝基水杨酸1g.溶于20Ml 12Mol/L NAOH溶液中.加入50Ml蒸馏水.再加入30g酒石酸钾钠.待溶解后用蒸馏水定容至100Ml.盖紧瓶塞.勿使CO2进入.若溶液混浊.可过滤后使用.0 1Mol/L PH5 6的柠檬酸缓冲液:A液(0 1Mol/L柠檬酸):称取分析纯柠檬酸21 01g.用蒸馏水溶解并定容至1L,B液(0 1Mol/L柠檬酸钠):称取柠檬酸钠29 41g用蒸馏水溶解并定容至1L,取A液55Ml与B液145Ml混匀.即为0 1Mol/L PH5 6的柠檬酸缓冲液.1%淀粉溶液:称取1g淀粉溶于100Ml 0 1Mol/L PH5 6的柠檬酸缓冲液中.[方法] 1.酶液提取称取25℃下萌发3-4天的小麦种子1 0g(芽长1 0-1 5CM).置研钵中.加少量石英砂和2Ml蒸馏水.研磨成匀浆后转入离心管中.用7Ml蒸馏水分次将残渣洗入离心管.提取液在室温下放置提取15-20Min.每隔数分钟搅动1次.使其充分提取.然后在3000r/Min转速下离心10Min.将上清液倒入50Ml容量瓶中.加蒸馏水定容至刻度.摇匀.即为淀粉酶原液.吸取上述淀粉酶原液5Ml.放入50Ml容量瓶中.用蒸馏水定容至刻度摇匀.即为淀粉酶稀释液.2 麦芽糖标准曲线制作取7支干净的具塞刻度试管.编号.按表18-1加入试剂:表18-1制作麦芽糖标准曲线配方表 试剂管号1234567麦芽糖标准液(ml)00.20.40.81.21.62.0蒸馏水(ml)2.01.81.61.20.80.40麦芽糖含量(mg)00.20.40.81.21.62.03.5-二硝基水杨酸(ml)2222222摇匀.置沸水浴中煮沸5Min.取出后流水冷却.加蒸馏水定容至20Ml.以1号管作为空白调零点.在540nM波长下比色测定.以麦芽糖含量为横坐标.吸光度值为纵坐标.绘制标准曲线.3 酶活力的测定取6支干净的具塞刻度试管.编号.按表18-2进行操作.表18-2酶活力的测定配方表 操作项目管号Ⅰ-1Ⅰ-2Ⅰ-3Ⅱ-1Ⅱ-2Ⅱ-3淀粉酶原液(ml)1.01.01.0000钝化β-淀粉酶置70℃水浴中15Min.取出后在流水中冷却淀粉酶稀释液(ml)000111DNS试剂(ml)2.预保温40℃恒温水浴中保温10Min1%淀粉溶液(ml)(40℃)1.01.01.01.01.01.0保温40℃恒温水浴中准确保温5MinDNS试剂(ml)02.02.002.02.0摇匀.置沸水浴中5Min.取出后冷却.加蒸馏水至20Ml.摇匀.在540nM波长下比色.记录测定结果.4 结果计算 用Ⅰ-2.Ⅰ-3吸光度平均值与Ⅰ-1吸光度值之差.在标准曲线上查出相应的麦芽糖含量(Mg).再按下式计算α-淀粉酶的活力(Aα).淀粉酶活性以每克鲜重所含麦芽糖毫克数(Mg/g·Min)表示:Aα=CαVTFW×t×V1(18-1) Ⅱ-2.Ⅱ-3吸光度平均值与Ⅱ-1吸光度值之差.在标准曲线上查出相应的麦芽糖含量(Mg).按式18-1计算(α+β)-淀粉酶的活性AT AT=CT×VTFW×t×V1 式中A:淀粉酶活性.Aα为α-淀粉酶的活性.AT为淀粉酶总活性.主要是α.β-淀粉酶的活性,Cα:α-淀粉酶水解淀粉生成的麦芽糖量(查标准曲线求值.以下同),CT:(α+β)淀粉酶共同水解淀粉生成的麦芽糖量,V1:显色所用酶液体积(Ml),T:酶作用时间(Min),VT:样品稀释液总体积(α-淀粉酶为50Ml.α+β淀粉酶为500Ml),FW:样品鲜重(g).[思考题] 1.萌发种子和干种子α-淀粉酶和β-淀粉酶活力有何差异 这种变化有何生物学意义 2 实验中设置对照的意义何在 3α-淀粉酶和β-淀粉酶性质有何不同 作用特点有何不同
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利用利用DNSDNS法测定法测定αα--淀粉酶活力淀粉酶活力的方法的方法目的要求目的要求了解生物学研究中针对糖含量测定的常用了解生物学研究中针对糖含量测定的常用方法及相关原理。方法及相关原理。掌握一般标准曲线制作的意义及要求。掌握一般标准曲线制作的意义及要求。掌握掌握DNSDNS比色法测定比色法测定αα--淀粉酶活力的原理淀粉酶活力的原理、方法及操作步骤。、方法及操作步骤。掌握利用掌握利用EXCELEXCEL分析工具库数据分析分析工具库数据分析————回归分析,得到回归方程及相关分析结果回归分析,得到回归方程及相关分析结果。。糖的测定方法糖的测定方法大致可分为三类大致可分为三类::1.1.物理法物理法————旋光法旋光法、、折光法折光法、、比重法比重法;;2.2.物理化学法物理化学法————点位法点位法、、极普法极普法、、光度光度法法、、色谱法色谱法;;3.3.化学方法化学方法————斐林氏法斐林氏法、、高锰酸钾法高锰酸钾法、、碘量法碘量法、、铁***化钾法铁***化钾法、、DNSDNS比色法、比色法、蒽蒽******比色法比色法、、咔唑比色法咔唑比色法生物学研究中关于糖测定中常用生物学研究中关于糖测定中常用的方法的方法菲林试剂滴定菲林试剂滴定——...
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标题: 淀粉酶活性的测定
摘要: [淀粉酶活性的测定] 淀粉酶活性的测定植物中的淀粉酶能将贮藏的淀粉水解成麦芽糖。淀粉酶几乎存在于所有植物中，其中以禾谷类种子的淀粉酶活性最强。植物中有α–淀粉酶和β–淀粉酶，其活性因植物的生长发育时期不同而有所变化。通过本实验掌握淀粉酶的提取和测定方法。一、原理α–淀粉酶和β–淀粉酶，各有其一定的特性，如β–淀粉酶不 关键词:[淀粉酶 淀粉 钝化 水杨酸 标准曲线]……
淀粉酶活性的测定
植物中的淀粉酶能将贮藏的淀粉水解成麦芽糖。淀粉酶几乎存在于所有植物中，其中以禾谷类种子的淀粉酶活性最强。植物中有α–淀粉酶和β–淀粉酶，其活性因植物的生长发育时期不同而有所变化。通过本实验掌握淀粉酶的提取和测定方法。
α–淀粉酶和β–淀粉酶，各有其一定的特性，如β–淀粉酶不耐热，在高温下易钝化，而α–淀粉酶不耐酸，在pH3.6以下则发生钝化。通常提取液中同时有两种淀粉酶存在，测定时，可根据它们的特性分别加以处理，钝化其中之一，即可测出另一酶的活性。将提取液加热到70℃维持15 min以钝化β–淀粉酶，便可测定α–淀粉酶的活性。或者将提取液用pH3.6之醋酸在0℃加以处理，钝化α–淀粉酶，以求出β–淀粉酶的活性。
淀粉酶水解淀粉生成的麦芽糖，可用3，5–二硝基水杨酸试剂测定。由于麦芽糖能将后者还原生成3–氨基–5–硝基水杨酸的显色基团，在一定范围内其颜色的深浅与糖的浓度成正比，故可求出麦芽糖的含量。以单位重量样品在一定时间内生成的麦芽糖的量表示酶活力。
二、实验材料、试剂与仪器设备
（一）实验材料
萌发的小麦（芽长1 cm左右）。
（二）试剂
1. 1％淀粉：称取1.0g淀粉溶于100mL 0.1mol/L pH 5.6的柠檬酸缓冲液中。
2. 0.1mol/L pH5.6的柠檬酸缓冲液：A液：称取柠檬酸20.01 g，溶解后稀释至l000 mL；B液：称取柠檬酸钠29.41 g，溶解后稀释至1000 mL。取A液55 mL与B液145 mL混匀，即为pH5.6之缓冲液。
3. 3, 5–二硝基水杨酸溶液：精确称取3, 5–二硝基水杨酸1 g溶于20 mL 2 mol/L氢氧化钠中，加入50 mL蒸馏水，再加入30 g酒石酸钾钠，待溶解后，用蒸馏水稀释至100 mL，盖紧瓶塞，勿使二氧化碳进入。
4. 麦芽糖标准液：称取麦芽糖0.100 g溶于少量蒸馏水中，仔细移入100 mL容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度。
（三）仪器设备
小台秤，研钵，容量瓶100 mL，具塞刻度试管，试管，刻度吸管l mL2 mL10 mL，离心机，恒温水浴，分光光度计。
三、实验步骤
1. 酶液的提取称取1.0 g萌发的小麦种子，置研钵中加2 mL蒸馏水和少量石英砂，研磨成匀浆后转入离心管中，用7mL蒸馏水分次将残渣洗入离心管，提取液在室温下放置提取15～20 min，每隔数分钟搅动1次使其充分提取。然后在3000r/min转速下离心10 min，将上清液倒入50mL容量瓶中加蒸馏水定容至刻度，摇匀，即为淀粉酶原液。吸取上速淀粉酶原液5mL，放入50mL容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度摇匀，即为淀粉酶稀释液。
2．麦芽糖标准曲线制作取7支干净的具塞刻度试管，编号，按表35–1加入试剂：
制作麦芽糖标准曲线配方表
麦芽糖标准液（mL）
蒸馏水（mL）
麦芽糖含量（mg）
3，5-二硝基水杨酸（mL）
摇匀，置于沸水浴中煮沸5 min。取出后流水冷却，加蒸馏水定容至20mL。以1号管作为空白调零点，在540nm波长下比色测定。以麦芽糖含量为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。
3．酶活力的测定取6支干净的具塞刻度试管，编号，按表35–2进行操作。
表35–2 酶活力的测定配方表
操 作 项 目
淀粉酶原液（mL）
钝化β-淀粉酶
置70℃水浴中15 min，取出后在流水中冷却
淀粉酶稀释液（mL）
DNS试剂（mL）
40℃恒温水浴保温10 min
40℃1%淀粉溶液（mL）
40℃恒温水浴中准确保温5 min
DNS试剂（mL）
摇匀，置于水浴中煮沸5 min,取出后流水冷却，加蒸馏水定容至20mL。摇匀，在540nm波长下比色，记录光密度值，从麦芽糖标准曲线中查出麦芽糖含量，用以表示酶活性。
四、结果计算
α–淀粉酶总活性
(α +β)–淀粉酶总活性
式中：A——α–淀粉酶水解淀粉生成的麦芽糖（在标准曲线上查得值），mg。
A′——α–淀粉酶的对照管中麦芽糖量，mg。
B——(α +β)–淀粉酶共同水解淀粉生成的麦芽糖量，mg。
B′——(α +β)–淀粉酶的对照管中麦芽糖量，mg。
V——测定时所用样品液体积，mL。
t——酶作用时间，min。
1.萌发种子和干种子的α-淀粉酶和β-淀粉酶活力有何差异？这种变化有何学意义？
2.α-淀粉酶和β-淀粉酶性质有何不同？作用特点有何不同？
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