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来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2016-09-19 14:53 标签： 请帮忙确认一下 英文
& [求助]做CCK-8时几个小疑问，请高手帮忙解答一下
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[求助]做CCK-8时几个小疑问，请高手帮忙解答一下
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[求助]做CCK-8时几个小疑问，请高手帮忙解答一下
我刚开始做实验，都不是很熟练，遇到几个问题，请大家帮忙看一下，先谢过了：
1.每次加药就10ul，感觉就一点点，手抖得厉害，一不小心就挂在壁上了。请问有什么方法可以帮我一下吗？
2.因为操作不熟练，所以加药的时间特别长，不知道对最后的测量值有没有影响。
3.说明书上写OD值在1-2之间比较可靠，请问这在实际中是不是对各种细胞都是适用的。
非常感谢！
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1，拿水和废板子练一下手，10微升还是很多的，我们还要1ul加药呢。挂到壁上可以轻轻拍拍，晃一下，不过不要晃出来了。加的时候不要加入气泡。
2，影响应该有，但是不至于太大，加完放到37度开始脱氢酶的反映才会很快。一般一个板子5分钟以内加完就好了。最好不要长过10分钟。
3，各种细胞都适用，实际每种细胞最好摸一下种板密度（/96板孔）。读数大小和cc-8反映时间成正比，有的细胞加入进去1小时就值很高了，有的需要4个小时甚至更长时间。具体视实际情况。一般在1.2-1.5比较好。在0.9-2之间都还可以吧。因为空白培养基都可能0.2-0.3之间。
非高手，用cck-8也不久，初级者回答初级者的问题也许更详细，希望对你有用。这个cck-8我也刚刚用了几个月，很快你就熟了。
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非常感谢！说实话，我前面做的这个试验挺惨烈的。加CCK加到一半枪还坏了！郁闷死人！我们开始做的是5000，结果出来的IC50根本不行，于是做，加上我的笨鸟技术，孔里基本上就没剩下几个细胞了。。。。。。
多谢回答，我再勤加练习吧！谢谢！：）
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请问一下，您的细胞是贴壁细胞还是悬浮细胞啊，悬浮细胞一般多长时间测比较合适啊？我第一次做这个，谢谢你
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我也是 第一次做，遇到了和楼主一样的问题
我的OD值普遍在1.5-2.5之间，有时还 到3.0多，密度摸了几次好像都差不多，我现在种的是5000/well,是悬浮细胞，但结果很糟糕~
还有就是CCK-8真的好贵哦，一枪下去2元钱呢 ~~~~~~
请各位大侠指导
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请问做CCK8是一定要用490nm的波长吗？
我么实验室是590的，而且我不知道怎么调啊？
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CCK-8要用450的波长啊，说明书上写得很清楚啊，同时参比波长要设到600或以上。seaky_2001910，你不要告诉大家你做CCK-8都是用490测的。。。。。。
说明书上还讲OD值在1-2之间是最好的，超过2可能大了些，也许是你培养的时间太长了吧。我种的是PANC-1，摸了好几次觉得4000的最好，不过结果还没给老板看，等他看了再说吧。是挺贵的，我第一次没有细胞还加了结果被老板训了一顿，郁闷了一晚上。
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我前几天做了一下，结果不太好，有几个问题想问一下：
1、说明书上：I do not have a 450 nm filter. What other filters
can I use? You can use filters with the absorbance between 450
and 490 nm, even though 450 nm filter gives the best
sensitivity.我们实验室没有450NM，我只能用490的，郁闷哪。
2、一定要有参比波长吗？为什么呀？
3，我加完药之后一段时间，发现孔内中心的细胞都死好多，但是边上的细胞还是特别多，是不是加药加的均匀啊？怎么样才能加均匀呢？
4、我的是悬浮细胞，密度是10的5次方每孔，好像有点大了一样，不知道你的是什么细胞啊？
谢谢，祝大家试验都顺利！
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参比波长是为了去除其它颜色物质的影响，感觉做cck或者elisa这种不用参比波长可能结果不会差异太大。
悬浮没做过 呵呵 我做贴壁细胞
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1，一般是450nm测，650nm参考，以450-650作为真实值。原因就是diving战友说的去除其他物质的影响。
2， 我做的主要是贴壁细胞，同实验室的有做悬浮细胞，也有panc-1，貌似是5000/孔。
3，刚开始加96孔板的时候，细胞比较容易贴到孔周围，后来发现这种现象减轻了，可能是操作更熟练的缘故，自己也可以再摸索一下方式。孔周围总是比中间多，这是正常。
3，加药后可以用抢轻轻混匀，刚开始我也不敢吹，怕把贴壁细胞吹起来。后来发现没事。不过，最终我还是采取横竖方向各轻轻拍板50-100次，用枪头又浪费又慢。完全不吹不晃的话，加入的1-2微升DMSO容易沉到底下，造成一小片细胞死亡。
4，关于怕浪费不起cck-8的问题，我们新手可以这样克服：如果显微镜下看见你的细胞长的过满，或者肉眼无见明显梯度死亡（本来有用的药，比如对照药反而无效或者杀死过多等）或者预感结果不太好（不符合预期），可以用mtt或者mts（这个是490测值，楼上那位不妨考虑下，就是要避光，数值不如cck-8稳定）等代替测，实在不行，拍照数数活细胞也可以考虑。如果肉眼观察都不满意，何苦浪费试剂（可惜我是浪费了很多之后才知道这句话，知道了这句话时候我也无需浪费了，哈哈）。
5，做之前，最好摸一下细胞密度（一般细胞5000就ok，我有些细胞长4天才满，所以用了10000，后来都改成5000了），值偏大时可以减少种板细胞数，也可以减少cck-8作用时间，如我们的细胞中有的要加cck-84个小时做，有的一个小时值就老高了。刚开始如果不知道什么时候测合适，就一个小时测一次，快点测完后拿回去。一般熟练后肉眼看颜色就知道值大概有多少了。各种细胞不同，不可一概而论。
祝各位尽早获得好结果~日期：0.16
2、只列式，不计算。
（1）40占50的几分之几？（2）50是40的百分之几？
（3）5比8少百分之几？（4）8比5多百分之几？
二、知识梳理
1、百分数和分数在意义上有什么不同？百分数写法有什么特点？
2、说一说百分数和小数互化的方法，百分数和分数互化的方法？
3、求一个数是另一个数的百分之几的应用题用什么方法解答？
如：甲数是200，乙数是150。
（1）甲数是乙数的百分之几，算式：_____________，把________看作单位&1&。
（2）乙数是甲数的百分...<b style="color:#aa少百分之几的相关内容日期：求一个数是另一个数的百分之几应用题 bgcolor= #FFFFFF > 教学目的 1．通过知识迁移使学生掌握求一个数是另一个数的百分之几应用题的结构特征及解题规律。 2．正确列式，掌握计算方法，准确计算。 教学重点 明确单位“1”，会列关系式。 教学难点 能够根据题中...日期：求一个数比另一个数多（或少）百分之几 教学目的 1．使学生初步掌握 “求一个数比另一个数多（或少）百分之几”的应用题的分析方法，并能正确解答此类应用题． 2．进一步提高分析、比较、解答应用题的能力，培养认真审题的好习惯． 教学重点 掌握“求一...日期：求一个数是另一个数的百分之几的应用题 教学目的 1．使学生理解和掌握求一个数是另一个数的百分之几的应用题的解题思路和方法． 2．理解百分数的含义，掌握有关百分率的计算方法． 3．通过应用题的教学，渗透爱国主义的思想教育． 教学...日期：一个数比另一个数多百分之几 教学目的 1．使学生初步掌握 求一个数比另一个数多（或少）百分之几 的应用题的分析方法，并能正确解答此类应用题． 2．进一步提高分析、比较、解答应用题...日期：求一个数比另一个数多（少）百分之几 课一开始，我并没有按照通常的教学模式先复习求一个数是另一个数的百分之几的应用题，再引到新例题，而是用学生感兴趣的北京中办奥运会的话题导人新课。 师:同学们，你们知道2008年奥运会在哪里举行吗? 生:(齐声)知道，...日期：求一个数的百分之几是多少稍复杂的应用题 教学内容：人教版数学第十一册第93页例3。 教学目标： 1、理解并掌握 求一个数的百分之几是多少 的数量关系，正确解答 求一个数的百分之几是多少 的实际问题。 2、正确分析题目中的数量关系，提高解决实际问题的能力。 3、使学生感日期：第六课时：求一个数是另一个数的百分之几的实际问题（2） 教学内容：练习二十一第4-10题 教学目标：1、进一步理解求一个数是另一数的百分数问题的含义，掌握解答的方法。 2、通过解决生活中简单的实际问题，培养学生数学的应用意识。提高应用数学知识方法解决问题的能力。
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