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【求助】请问用于刺激巨噬细胞产生TNF-α的脂多糖（LPS）是sigma的哪一种？
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这个帖子发布于6年零349天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
用于刺激巨噬细胞产生TNF-α的脂多糖（LPS），在sigma网站查到n种，请做过的战友提供个合适的类型，是哪种大肠杆菌产生，由什么方法提取的？最好有货号就好了。十分感谢！
不知道邀请谁？试试他们
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这篇文献用的是：Escherichia coli, strain 055:B5; Difco, Detroit, MI说句题外话，当年我的博士小老板指导我的时候，他让我自己去查。比如说，这个LPS，应该根据自己的实验目的去查，看哪篇文献里使用的是哪个型号的LPS，文献里LPS使用的剂量曲线如何，时效曲线如何。这样，如果自己的实验结果和文献结果一致，说明了方法的可行性；如果不一致，可以找到原因，在哪个方面不一致。在丁香园求助未尝不可。从科学的角度，自己应该身体力行。说得不对的地方请包涵。
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文献中查到的主要有两种，其中一种就是楼上提到的，买了另一种试试，谢谢楼上的！
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以前也有人问过我同样的问题，不过是用ＬＰＳ刺激ＤＣ成熟，我找了几种不同来源Ｇ-,Ｇ+的ＬＰＳ试了一下，没有太大区别，供参考
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脂多糖持续刺激巨噬细胞的免疫学机制初探
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脂多糖刺激单核巨噬细胞培养上清液对成骨细胞成骨特性的影响
优质期刊推荐大众医药网 - 文献资料 - 脂多糖致肺血管内巨噬细胞形态和功能的改变
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- 感染与传染病学
脂多糖致肺血管内巨噬细胞形态和功能的改变
中华结核和呼吸感染 1998年第3期第21卷 论　　著
作者：李胜亮　陈正堂　金敬顺
单位：400037 重庆第三军医大学新桥医院全军呼吸内科研究所(李胜亮现在解放军517医院)
　　关键词： 肺血管内巨噬细胞；急性肺损伤；细胞因子
　　【摘要】　目的　探讨肺血管内巨噬细胞(PIM)在感染性急性肺损伤(ALI)发病中的作用。方法　仿Morton法灌洗肺血管床，贴壁法分离猪PIM，并用光镜、电镜观察鉴定；胸腺细胞增殖法测脂多糖(LPS)刺激前后PIM培养上清白细胞介素1β(IL-1β)活性，酶联免疫吸附试验(ELISA)法测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素8(IL-8)含量。结果　刺激后的PIM伪足增长、增多，溶酶体和吞噬体亦增多；释放TNFα、IL-1β、IL-6、IL-8增多，峰值分别出现在刺激后的1h、2h、4h和6h。与刺激前相比，P＜0.01。结论　改良的Morton法能成功分离猪PIM；LPS刺激后的PIM吞噬分泌功能活跃，其中TNFα、IL-1β升高最早，提示其在ALI发病早期起重要作用；而IL-6、IL-8升高较晚，可能在ALI发病后期起重要作用。
The morphological and functional changes of pulmonary intravascular macrophages induced by LPS
Li Shengliang, Chen Zhengtang, Jin Jingshun. Institute of Respiratory Diseases, Xingqiao Hospital, Third Military Medical University, Chongqing 400037
　　【Abstract】　Objective　To study the roles of pulmonary intravascular macrophages (PIMs) on infective acute lung injury (ALI).Method　Porcine pulmonary blood vessels were flushed by modified Morton′s method, PIMs were isolated by adhesion method and identified with the features at both light and electron microscopic level. The activity of IL-1β, and content of IL-6, IL-8 and TNFα in the culture supernatants were measured by thymocyte proliferation or ELISA, respectively.Result　Enlarged and increased pseudopods, and increased amount of lysosomes and phagosomes were found in the PIM stimulated with lipopolysaccharide (LPS, 10 μg/ml); the releases of TNFα, IL-1β, IL-6 and IL-8 were increased significantly as compared with the level of pre-stimulation of LPS (P＜0.01), and reaching their peaks at 1h、2h、4h and 6h after LPS stimulation, respectively.Conclusion　The isolation of porcine PIMs can be completed with modified Morton′ the phagocytosis and secretion of PIMs are more active after LPS stimulation. In the pathogenesis of ALI, TNFα and IL-1β may play an important rol however, the IL-6 and IL-8 may be associated with the pathophysiological changes at the later stage of ALI.
　　【Key words】　Pulmonary intravascular macrophages　　Acute lung injury　　Cytokines
　　肺血管内巨噬细胞(pulmonary intravascular macrophages, PIM)是肺巨噬细胞亚群之一。因其部位特殊，在急性肺损伤(ALI)中的作用尤为引人注目。国内尚未见有关PIM的报道。我们在成功分离、培养猪PIM的基础上，本实验观察脂多糖(LPS)刺激后PIM的形态学改变，及其培养液上清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素8(IL-8)的含量或活性的变化，以探讨其在ALI中的作用。
材料与方法
　　1.PIM的分离、培养及鉴定：按我所改良的Morton法分离、培养猪PIM［1］(另文发表)。用贴壁法获得粘附的PIM。台盼蓝染色计数判断活力；瑞氏染色、非特异性脂酶染色及氧化钠抑制试验鉴定PIM并计算纯度。加LPS(Sigma，10 μg/ml)于培养基中，取刺激前及刺激后5、30 min，1、2、4、6、8 h的培养液上清，测TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8的含量或活性。取刺激前后的PIM，并取未经灌洗的肺组织，修成1 mm×1 mm×1 mm大小，经2.5%戊二
附表　PIM受LPS刺激前后释放几种细胞因子比较
TNFα(ng/ml)
0.68±0.08
0.72±0.12
0.89±0.12
3.32±0.15△
0.94±0.15
0.85±0.12
0.82±0.11
0.72±0.05
IL-6(ng/ml)
0.27±0.12
0.33±0.11
0.35±0.11
0.41±0.13
0.63±0.15
0.80±0.36△
0.51±0.16
IL-8(ng/ml)
1.84±0.53
1.99±0.51
2.51±0.76
2.86±0.77
2.92±0.46
3.79±0.75*
4.94±1.19△
4.20±0.80△
　　△P＜0.01，*P＜0.05，每分钟闪烁计数醛固定后，PIM以四氧化锇电子染色，肺组织块再用四氧化锇后固定，醋酸铀-枸橼酸铅电子染色，JEM-2000 Ex型透射电镜观察。
　　2.TNF-α及IL-6、IL-8含量测定：酶联免疫吸附试验(ELISA)。试剂盒购自四军医大免疫学教研室。
　　3.IL-1β活性测定：鼠胸腺细胞增殖法［2］。
　　4.统计分计：实验数据以均数±标准差(±s)表示，用单因素方差分析程序处理。
　　一、PIM刺激前后的形态特点
　　光镜和电镜观察，刺激前的PIM具有单核-巨噬细胞的一般结构特征(图1)，唯电镜下可在其质膜下方见到管状微饮液作用蠕虫样结构(tubular micropinocytosis vermiformis structures, TMVS)(图2)，并见其通过细胞间粘附斑块(intercellular adhesion plaques, ICAP)(图3)与肺泡毛细血管内皮细胞粘附，是其特点。LPS刺激后，PIM伪足明显增多、增长，吞噬体和溶酶体亦增多，并可见PIM伸出伪足，包抄微粒，做吞噬状(图4)。
　　二、PIM刺激前后细胞因子含量变化
　　PIM受LPS刺激前后释放TNF-α、IL-1β、6、8的对比见附表。
　　附表可见TNF-α含量刺激后逐渐升高，1h达峰值，为3.32±0.15 ng/ml(P＜0.01)。刺激后2h IL-1β活性(闪烁计数)每分钟每106细胞为1，较刺激前(213±85)显著升高(P＜0.01)。4 h开始下降，8h降至刺激前水平。IL-6含量刺激后4h升至刺激前的3倍，(P＜0.01)。IL-8与刺激前水平1.84±0.53 ng/ml相比，刺激后4～8 h持续升高，6 h达峰值，为4.94±1.19 ng/ml(P＜0.05～0.01)。
　　一、PIM结构特征、LPS刺激后的改变及意义
　　本实验观察到，PIM除具备单核-巨噬细胞的形态和结构特征外，在质膜下方尚可见到蠕虫样结构(TMVS)，并见其与血管内皮细胞形成细胞间粘附斑块(ICAP)。文献报道，TMVS和ICAP是识别PIM的重要特征［1，3］。前者的意义在于加强受体介导的细胞内吞作用，提示其较一般单核-巨噬细胞吞噬作用更强、更广泛；而ICAP则是PIM区别于肺泡巨噬细胞和外周血单核细胞的特征，因为后二种细胞均无ICAP形成能力［3］。PIM通过ICAP与肺毛细血管内皮细胞粘附，可能有助于其定位于肺脏，发挥生理甚或病理效应。
　　刺激后PIM伪足明显增多、增长，溶酶体及吞噬体亦增多，表明受LPS刺激后PIM吞噬功能更加活跃。由于PIM与血流有广泛的接触面积，微生物及其它异物进入肺循环后，PIM便首当其冲地施展其吞噬功能，从而保护血流下游的临危器官免受损害。因此，PIM在机体防御免疫中有重要作用。然而，PIM吞噬细菌或内毒素后亦被活化，释放大量炎症介质，可能是ALI发病的重要因素之一。
　　二、PIM释放的几种细胞因子在ALI中的作用
　　本实验表明，PIM分泌TNFα、IL-1β在LPS刺激后的1 h即显著升高，表明它们是ALI时最早诱生的细胞因子，在ALI发病的早期起重要作用，故称之为前炎症细胞因子(proinflammatory cytokines)。TNF-α和IL-1β可作用于多核白细胞(PMN)，使之脱颗粒，产生氧自由基和蛋白水解酶等炎症介质；还可上调内皮细胞白细胞粘附分子-1及细胞间粘附分子1［4］，从而促进PMN与内皮细胞粘附，进而向肺内浸润，释放炎症介质，导致肺损伤。
　　IL-6在刺激4 h显著升高，提示其亦是PIM释放的主要介质之一。据报道，IL-6既可激活PMN，亦可刺激肝细胞产生急性期蛋白，从而在ALI等急性炎症反应中起重要作用［5］。
　　IL-8在PIM受LPS刺激后4～8 h持续升高，虽较TNF-α、IL-1β晚，但持续时间长。IL-8虽亦为PMN趋化剂和活化剂，但不似C5a等能被血清灭活，却可在肺局部积聚，对PMN发挥持续趋化和激活效应，且作用强于C5a。IL-8还可增加L-选择素白细胞粘附分子-1表达，促进整合素介导的PMN与内皮细胞粘附及PMN跨内皮向肺内浸润，导致ALI。故IL-8可能在ALI发病期有更为重要的作用。
　　进一步分析上述细胞因子之间的关系，还发现当IL-6升高达峰值时，TNF-α和IL-1β却从峰值急剧下降，提示IL-6对TNF-α和IL-1β的释放有抑制作用［5］；此外还报道TNF-α和IL-1β可诱导IL-6、8的释放［6］。表明细胞因子间存在相互诱生、相互制约的关系。一旦平衡被打破，可发生细胞因子失控性释放，形成全身炎症反应综合征，在肺部则为急性呼吸窘迫综合征(ARDS)或ALI。由于革兰阴性(G-)菌是ARDS首要原发疾患或诱发因素，加之PIM在肺血管腔内的特殊部位，提示在G-菌脓毒血症时，LPS首先激活PIM，使之释放TNF-α和IL-1β、6、8等细胞因子；通过这些细胞因子直接和相互作用，在ALI或ARDS发病中可能有重要始动作用。
　　课题受国家自然科学基金资助(编号)
脂多糖致肺血管内巨噬细胞形态和功能的改变
　　图1　未刺激的PIM，细胞核(N)有凹陷，偏于一侧，染色质细密，伪足(Pr)短而少(EM　×12 000)
　　图2　PIM质膜下见管状微饮液作用蠕虫样结构(▲)，Mi为线粒体(EM　×25 000)
　　图3　PIM与肺泡毛细血管内皮细胞(E)形成细胞间粘附斑块(▲)(EM　×15 000)
　　图4　LPS刺激后的PIM伪足明显增多、增长，有的包绕微粒，呈吞噬状(▲)(EM　×15 000)
　　1　Morton D, Bertram TA. Isolation and preliminary in vitro character ization of the porcine pulmonary intravascular macrophage. J Leukoc Biol, -410.
　　2　徐剑铖，毛宝龄，郭先健，等.犬呼吸窘迫综合征时肺泡巨噬细胞分泌IL-1及TNF的变化.中国病理生理杂志，5-497.
　　3　李胜亮，陈正堂，毛宝龄.肺血管内巨噬细胞与急性肺损伤.国外医学呼吸系统分册，7-199.
　　4　Conroy DM, Francischi JN, Sirois P. Effect of tumor necrosis factor receptor binding protein on cell infiltration induced by lipopolysaccharide and sephadex beads in guinea pig lung. Inflammation, -243.
　　5　Aderka D, Maor Y, Novick D, et al. Interleukin-6 inhibits the proliferation of B-chronic lymphocytic leukemia cells that is induced by tumor necrosis factor. Blood, 6-2084.
　　6　Matsukawa A, Yoshimura T, Maeds T, et al. Neutrophil accumulation and activiation by homologous IL-8 in rabbits: IL-8 induces destruction of cartilage and production of IL-1 and IL-1 receptor antagonist in vivo. J Immunol, 18-5425.
(收稿：　　修回：)
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