麻烦大家,提取质粒DNA用NaNo Drop 2000测定结果为负值,曲线也很不规则,为什么?谢谢~~
你大爷SxYf
你把质粒跑个胶看看亮度,算下浓度,如果你的测定过程没问题,就是仪器出问题了.
为您推荐：
其他类似问题
首先，请用ddH2O仔细清洗NaNo Drop的探头。。再测量。。如果还是这样，只能说你在提取过程中可能有步骤出错了，或者是你的菌不是大肠杆菌，结果没有提到质粒DNA。我们实验遇到过菌不是大肠杆菌，在加入P3溶液后，它不形成絮状沉淀，只形成颗粒状的东西， 你可以在提取过程中观察一下。如果有帮助，请采用。。...
1. clean your Nano Probe with water.2. make sure blank it with water or TE.3. apply your plasmid sample to Nano Drop, make sure there is no air bubble, then measure it. If you have made air ...
扫描下载二维码怎样用NanoDrop 1000测量核酸浓度
使用NanoDrop 1000可以直接检测核酸的浓度，要检测核酸样本请在运用模式上选择 NucleicAcid。
1、测量样本需要的体积：1-2ul。
2、检测浓度范围
3、独特的屏幕特征
SampleType：选择所要测量核酸的类型，用户可以选择 DNA-50 来测量双链DNA，RNA-40来测量RNA，ssDNA－33来测量单链DNA，或者 other 来测量其他核酸。默认为DNA-50。如果 other 被选择了，用户可以在15－150之间选择分析常数。
&&and Abs：用户可以选择波长和相应的吸光值。可以通过移动指针或使用波长盒左边的上/下箭头来选择波长。注意：用户选择的波长和吸光值是不运用于任何计算的。
A260：样品在260nm处的吸光值代表的是通常的10mm光程下的吸光值。注意：这值是1mm测量的吸光值的10倍，是0.2mm光程测量的吸光值的50倍。
A280：样品在280nm处的吸光值代表的是通常的10mm光程下的吸光值。注意：这值是1mm测量的吸光值的10倍，是0.2mm光程测量的吸光值的50倍。
260/280：样品260和280吸光值的比值，代表的是DNA和RNA样品的纯度。纯DNA的比值在～1.8，纯RNA的比值在～2.0，如果比值比这值小，表示样本中存在蛋白，酚等杂质存在（它们的吸光值在280左右）。
260/230：样品260和280吸光值的比值，这是检测核酸纯度的第二指标，260/230值要比260/280的值大，通常在1.8-2.2，如果比值降低，表明样本存在杂质。
ng/ul：样品浓度单位，是通过样品在260nm处的吸光值以及选择的分析常数来计算的。
ShowReport：200个样本版式，然而可扩增最多容纳上千个样本。
4、光谱标准化
基线被设定在样本340nm处的吸光值，此值应该非常接近0，所有光谱以这个0值作为参照。
5、光谱覆盖控制
用户使用这个功能可以同时显示多个光谱。当前的样本被显示为粗线，而前面测量的样本被显示为不同的颜色。
文章标签：超微量分光光度计应用NanoDrop1000测量核酸浓度
购买、咨询（仪器设备提交仪器设备信息
发表我的评论
相关热门仪器设备关注今日：7 | 主题：277820
微信扫一扫
扫一扫，下载丁香园 App
即送15丁当
【分享】整理园内一些关于OD260/OD280比值的问题&[精华]
页码直达：
这个帖子发布于7年零207天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
DNA纯度的判断根据OD260/OD280的比值判断，符合要求纯度高的纯化DNA其OD260/OD280在1.6-1.8之间，低于此范围表明蛋白质含量超标，高于此范围表明样品中含有RNA。一般机器给出的比值是分子分母同时减OD320所得,你可以自己算一下OD260/OD280,如果在要求的范围内,说明你的OD320偏高,即可能有有机物污染,比如酒精未充分挥发我要纠正一下，纯DNA的A260/A280应大于1.8，纯的RNA应达到2.0，样品中如果含有蛋白质及苯酚，A260/A280比值会明显下降。对于纯的样品，只要读出260nm的A值即可以算出含量。通常以A值为1相当于50微克/ml双螺旋DNA，或者40微克/ml单链DNA（RNA），或者20微克/ml寡核苷酸计算。OD260／OD280 1.9-2.0 RNA居多 纯度已经很高了纯DNA：OD260/OD280≈1.8(＞1.9,表明有RNA污染；＜1.6，表明有蛋白质、酚等污染）纯RNA：1.7 ＜OD260/OD280＜2.0（＜1.7时表明有蛋白质或酚污染；＞2.0时表明可能有异硫氰酸残存）OD是optical density（光密度）的缩写， OD＝1og（1／trans），其中trans为检测物的透光值。 吸光度 吸光度,absorbance,是指光线通过溶液或某一物质前的入射光强度 与该光线通过溶液或物质后的透射光强度比值的对数，影响它的因素有溶剂、浓度、温度等等 吸光系数与入射光的波长以及被光通过的物质有关。只要光的波长被固定下来，同一种物质，吸光系数就不变。 当一束光通过一个吸光物质（通常为溶液）时，溶质吸收了光能，光的强度减弱。吸光度就是用来衡量光被吸收程度的一个物理量。吸光度用A表示， A＝abc，其中a为吸光系数，单位L/(gocm),b为液层厚度（通常为比色皿的厚度），单位cm ，c为溶液浓度，单位g/L 影响吸光度的因数是b和c。a是与溶质有关的一个常量，温度通过影响c，而影响A。一般来说OD260代表核酸的吸光度,OD280代表蛋白质的吸光度,OD230代表其他杂质(多糖等)的吸光度。 A260/A280与OD260/OD280的意思是一样的。A代表吸光值，而OD是光密度值，一个意思。A260/280比值一度成为判断核酸纯度的唯一通用标准，纯的DNA一般在1.8-2.0之间；后来发现在抽提过程中使用的许多试剂影响 A260 和 A280 读数；同时，对同一样品 10 倍数量级稀释后测定吸光值发现，分光光度计的吸光值仅在一定的区域是线性的。结论是：当 A260 读数处在 0.1-0.5 之间，A200 到 A320 之间的数值构成一条光滑的曲线时， 少量苯酚 (30 ul/ml) 残留使 A230，A260，A280 均变大 (差不多增加一倍)，但 A260/A280 和 A260/A230 均在 2 左右。少量异硫氰酸胍 (132 uM) 残留使 A230 变大，但 A260，A280 几乎不变，所以 A260/A280 仍在 2 左右，而 A260/A230 大大低于 2。大量异硫氰酸胍 (2.4 M) 残留使 A230，A260，A280 均变大，根本就没有办法测定了。PEG (6.25%) 残留使 A230，A260，A280 均变大，但对 A230，A260 影响更大，所以 A260/A280 比 2 大不少，而 A260/A230 仍在 2 左右。核酸抽提中常用的试剂，如 Phenol，Guanidine Isothiocyanate，PEG 都能使 A260 和A280 的值变大，但是却可能使二者的比值与高纯度核酸的比值一致。因为 A260 值几乎是峰值，所以有必要在其两边各取一个：A280 和 A230。干净的核酸 A260/A230 应该在 2 左右。如果有在230nm处的强吸收提示污染有酚盐离子等有机化合物1.蛋白质污染：确保不要吸入中间层及有机相。减少起始样品量，确保裂解完全、彻底。加入氯仿后首先要充分混匀，并且离心分层的离心力和时间要足够。如果所得RNA的OD260/OD280比值偏低，则用氯仿重新抽提一次，再沉淀，溶解。2.苯酚残留：确保不要吸入中间层及有机相。加入氯仿后首先要充分混匀，并且离心分层的离心力和时间要足够。3.多糖或多酚的残留：一些特殊的组织和植物中，多糖、多酚含量较多，这些残留也会导致OD260/OD280比值偏低。因此，从这类材料中提取RNA时，需要注意多糖、多酚杂质的去除。4.设备限制：测定OD260及OD280数值时，要使OD260读数在0.1-0.5之间。此范围线性最好。用水稀释样品：测OD值时，对照及样品稀释液请使用10mM Tris，pH7.5。用水作为稀释液将导致比值偏低。比值低可能有蛋白污染，高了可能有DNA污染，建议你抽提的RNA分三管，两管保存，另一管用来跑胶和测定OD，跑胶是最直观的，1%的胶就可以，抽提后马上跑，一般不会降解很多，所以设备材料不需要去酶处理不会有影响的。你的od比低可能是溶解时用的水的PH值偏酸。可以试着调到8.0左右再测，这样就会上来了。
不知道邀请谁？试试他们
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
收起全部有料回复
污染一般不会只是某一种成分，一般来说有蛋白残留肯定会伴随盐残留，有些盐可以用仪器检测到，比如EDTA和异硫氰酸盐，而很多盐是检测不到的，比如盐酸胍。当然污染不只是蛋白和盐，比如多糖会在220-280出现锯齿状的吸收峰、有些色素会使230吸收值出现负值，酚类LZ说了。检测核酸的纯度和浓度，不只是分光光度计检测，还需要电泳。之前有个实验室的技术员说5ml菌可以提取到100ug质粒，如果能跑一下电泳就不会有这种荒谬的结论了。对后续的实验而言，核酸的纯度是相对的。比如提取的质粒DNA经分光光度计检测，并且电泳验证，1ug核酸中有0.9ug是RNA，那么对大部分后续的实验都会有影响；同样100ug质粒DNA中有0.9ug是RNA，那么对大部分实验不会有影响。
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
原始的DNA中加EDTA至终浓度5mM：其实不只是EDTA，异硫氰酸盐也会出现相同的情况，230出现高吸收峰，这个吸收峰会使260偏高，但不明显影响280，稍有降低；所以260/280比值偏高，260/230比值明显下降。
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
zcldf001 edited on
谢谢楼主，总结得很好。
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
都是总结丁香园内的资料，应该共享
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
很好，谢谢
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
谢谢楼主！受益了！
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
非常有用 ，楼主辛苦了
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
多谢 正需要
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
多谢。。。。
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
谢谢楼主，找到了我想要的东西
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
谢谢楼主，非常受用！！
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
随着nanodrop的普及，再共享一下吧。这是一份相对纯度较高的DNA：因为双链DNA在低盐环境中局部变性，260/280比值高于1.8是正常的；另外260/230比值最理想应该是2.5，这是凝胶回收后检测的，可能是凝胶中的一些成分干扰，这个比值不是很理想。
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
- 在上面检测的DNA中加BSA至0.04%：有蛋白存在的情况下，220-230基线很高，280也增高，所以260/280和260/230比值都下降。
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
zcldf001 edited on
原始的DNA中加EDTA至终浓度5mM：其实不只是EDTA，异硫氰酸盐也会出现相同的情况，230出现高吸收峰，这个吸收峰会使260偏高，但不明显影响280，稍有降低；所以260/280比值偏高，260/230比值明显下降。
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
zcldf001 edited on
污染一般不会只是某一种成分，一般来说有蛋白残留肯定会伴随盐残留，有些盐可以用仪器检测到，比如EDTA和异硫氰酸盐，而很多盐是检测不到的，比如盐酸胍。当然污染不只是蛋白和盐，比如多糖会在220-280出现锯齿状的吸收峰、有些色素会使230吸收值出现负值，酚类LZ说了。检测核酸的纯度和浓度，不只是分光光度计检测，还需要电泳。之前有个实验室的技术员说5ml菌可以提取到100ug质粒，如果能跑一下电泳就不会有这种荒谬的结论了。对后续的实验而言，核酸的纯度是相对的。比如提取的质粒DNA经分光光度计检测，并且电泳验证，1ug核酸中有0.9ug是RNA，那么对大部分后续的实验都会有影响；同样100ug质粒DNA中有0.9ug是RNA，那么对大部分实验不会有影响。
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
谢谢总结！
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
相当的棒啊
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
多谢了，多谢了
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
非常感谢楼主了，很受用！！
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
多谢了，不过我还有一个疑问，不知道大家提RNA的时候，最后是不是用DEPC水溶解，测浓度的时候也是用DEPC水，看到论坛里有人说用Tris溶解，会导致260/280〉2，不知道大家怎么看？
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
溶解RNA可以用去RNA酶处理的超纯水溶解。
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
谢谢楼主整理的资料
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
感谢分享！~
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
受益匪浅，谢谢分享
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
楼主，你的帖子里说A260/A280比值偏低的话，可以用氯仿重新抽提。具体步骤跟前面的一样吗？我刚提取的一批RNA，比值都只有1.6或1.5,而且浓度也很低，只有一百多。重新氯仿提的话，浓度会不会更低呢？
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
我做的是SD大鼠软骨RNA的提取，用的Trizol法抽提，做了4次，测的OD比值均在1左右，用的是去RNA酶超纯水稀释和调零的，不知道什么原因，请教各位高手指点！
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
多谢了，不过我还有一个疑问，不知道大家提RNA的时候，最后是不是用DEPC水溶解，测浓度的时候也是用DEPC水，看到论坛里有人说用Tris溶解，会导致260/280〉2，不知道大家怎么看？
也可以用DEPC灭菌水溶解RNA的
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
不错，谢谢！
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
感谢楼主的分享，果断收藏，学习到了很多知识~楼主辛苦啦~
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
谢谢楼主的总结，对新手太有用了
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
谢谢楼主！
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
谢谢楼主，总结得很好。
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
谢谢楼主，正好要开始试验了
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
楼主好棒啊，太详细了，好开心啊
微信扫一扫
广告宣传推广
政治敏感、违法虚假信息
恶意灌水、重复发帖
违规侵权、站友争执
附件异常、链接失效
关于丁香园如何根据NaNoDrop测出的参数估计DNA浓度值 - 实验交流 - 生物秀
标题: 如何根据NaNoDrop测出的参数估计DNA浓度值
摘要: [如何根据NaNoDrop测出的参数估计DNA浓度值] 各位大侠，我提的DNA，浓度很低。现在用NaNoDrop测了一下浓度,比如得到一组参数：Nucleic Acid Conc ：55 7、A260：1 113、A280：-0 361、260 280:-3 09、260 230:0 30，我该如何根据这些参数估计我的DNA浓度呢？ 关键词:[核酸 酶切 参数估计 嘌呤 紫外光 系数 核苷酸]……
各位大侠，我提的DNA，浓度很低。现在用NaNoDrop测了一下浓度,比如得到一组参数：Nucleic Acid Conc.：55.7、A260：1.113、A280：-0.361、260/280:-3.09、
260/230:0.30，我该如何根据这些参数估计我的DNA浓度呢？回复那个55.7就是核酸的浓度，可以在查查那两个比值的具体含义，一个代表盐污染，一个代表蛋白污染回复这个应该不是提的DNA 或者质粒浓度 倒像是做酶切后产物的浓度回复A280怎么是负值？怀疑blank没有做好。回复我用同一个blank测了多个样品 有的是正值 有的是负值回复
那个55.7就是核酸的浓度，可以在查查那两个比值的具体含义，一个代表盐污染，一个代表蛋白污染 55.7是核酸的浓度，我只是不知道是DNA的浓度，还是样品中DNA和RAN的混合浓度呢？回复
55.7是核酸的浓度，我只是不知道是DNA的浓度，还是样品中DNA和RAN的混合浓度呢？... 正常情况下提完DNA 你样品里的RNA应该都降解掉了吧。。。。回复
55.7是核酸的浓度，我只是不知道是DNA的浓度，还是样品中DNA和RAN的混合浓度呢？... 这个应该是区分不了的，核酸在波长 260 nm处有最高吸收峰。吸收紫外光的性质是嘌呤环和嘧啶环的共轭双键系统所具有的，所以嘌呤和嘧啶以及一切含有它们的物质，不论是核苷、或核酸都有吸收紫外光的特性。但紫外法不能区分和RNA，只能用来鉴定核酸的纯度和含量。在使用的时候选择样品室或RNA，这个只是系统根据你的样品以确定不同的OD值与质量的换算系数。回复
我用同一个blank测了多个样品 有的是正值 有的是负值... 蛋白质和核酸在280nm下都有吸收。260nm下的吸收与核酸浓度在一定范围内有线性关系，但两者的系数不同。如果是纯的DNA或者纯的RNA，A260可以较准确的反映核酸浓度，但是nanodrop对混合样品测出的浓度是不准确的。一般如果要DNA，都是消化掉RNA的，而RNA样品也是消化掉DNA。回复
您好！为什么您觉得像是酶切后产物的浓度呢？能不能解释一下，非常感谢！... 我之前也用过很多次nano drop去测浓度 酶切前260/都很正常但是酶切后 就会出现这种260/都不正常或大或小的状况 怀疑可能是因为含有少量的酶污染 或者因为胶的原因
相关热词：
..........
生物秀是目前国内最具影响力的生物医药门户网站之一，致力于IT技术和BT的跨界融合以及生物医药领域前沿技术和成功商业模式的传播。为生物医药领域研究人员和企业提供最具价值的行业资讯、专业技术、学术交流平台、会议会展、电子商务和求职招聘等一站式服务。
官方微信号：shengwuxiu
电话：021-