提取土壤DNA,如何去除土壤腐殖质层等PCR抑制物

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土壤DNA提取问题
我是分子新手,做有关土壤微生物方面,在提取土壤微生物DNA时采用SDS-高盐提取DNA方法,但是提取后的DNA粗提液中有大量的腐殖质,DNA粗提液呈棕色,请问大家有没有什么能去除腐殖质的办法?
用酚氯仿异戊醇重新抽提的方法我试过了,感觉还是不理想。
那就是前处理的事情了,你试了重新异丙醇/无水乙醇沉淀了么
又是环境微生物学
又是土壤微生物DNA& &PCR&&~~~~~
这个方向啊& &方向啊&&方向啊 研究了 又能弄啥啊 真是的
哥不打击人了& &下面回答你问题
土壤DNA&&确实不好提取 目前在去除腐植酸这块是个很大的瓶颈。建议使用试剂盒提取,国内的不要考虑&&直接买国外的 撑死也就3000 块钱50个样品。&&不过 试剂盒一般都是 过柱子的&&过完柱子 量会损失很大 这就要看个人实验选择了
如果还是坚持需要用手提的方法, 可以配一些相应的缓冲液来清洗土壤,去腐植酸。比如tris0、-edta-氯化钠-PVP等,可以查查相关文章。
前两天看到一篇文章说是在提取DNA前 可以采用Al(NH4)SO4预处理土壤使腐植酸沉淀,这个我还没有实验 不知道行得通不。
试过了,沉淀后再重新抽提沉淀一次,会比之前少些,但是还会存在挺多的腐殖质
那就直接试剂盒吧,不要怕花钱,一分钱一分货,基本上贵的效果都不差!:D反正花钱是花全国劳动人民的纳税的钱,你不花都落老板口袋里了……再说你是做实验,是为人民服务!:victory:
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PCR抑制物清除剂
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&&用​血​液​、​土​壤​、​植​物​、​中​药​材​等​样​品​中​提​取​的​D​N​A​经​常​含​有​会​抑​制​P​C​R​的​产​物​。​华​越​洋​P​C​R​抑​制​物​清​除​剂​专​门​用​于​解​除​这​些​P​C​R​抑​制​剂​的​抑​制​作​用​,​使​D​N​A​能​够​用​于​P​C​R​扩​增​。
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土壤样品(粘土[clay], 沙质土[sandy], 淤泥[silty], 泥煤[peaty], 白垩质土[chalky]和 壤土[loamy soils]),粪便样品,环境水样,废水样品,淤泥样品等环境样品
1. 能有效的处理土壤样品中一些很难处理的组分如: 真细菌孢子(eubacterial spores)、内芽孢(endospores)、格兰仕阳性菌(gram positive bacteria)、酵母(yeast)、线虫(nematodes)、海藻(algea)、真菌(fungi)等。
2. 样品处理过程中使用的 MT Buffer和Sodium Phosphate Buffer可在整个提取过程中有效的保护核酸,并限度的降低RNA污染。
3. 基于硅珠的纯化方法,可有效地去除腐植酸、多元酚等PCR抑制物
4. 纯化所得的DNA可直接用于PCR、酶切等后续实验之中。
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