从氢过氧自由基离子到羟基自由基怎么转变

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生物实验,植物超氧自由基和过氧根离子的测定方法
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为兴趣而生,贴吧更懂你。或蛋白质聚集可能产生活性氧,如何检测到这个活性氧呢? - 实验交流 - 生物秀
标题: 蛋白质聚集可能产生活性氧,如何检测到这个活性氧呢?
摘要: [蛋白质聚集可能产生活性氧,如何检测到这个活性氧呢?] 文献上有报道蛋白质聚集会产生活性氧物种-过氧化氢,通过加入亚铁离子,产生羟基自由基,在顺磁检测到信号。可是,为什么我做的信号不对,要么连信号都没有。不知道这个顺磁检测的话,具体应该如何操作啊?是不是要很迅速的配好溶液立刻检测,还是等待反应一段时间后再检测?或者有什么更好的证明体系中有活性氧物种存在的 关键词:[活性氧 蛋白质 物种 亚铁离子 自由基 过氧化氢 羟基自由基]……
文献上有报道蛋白质聚集会产生活性氧物种-过氧化氢,通过加入亚铁离子,产生羟基自由基,在顺磁检测到信号。可是,为什么我做的信号不对,要么连信号都没有。不知道这个顺磁检测的话,具体应该如何操作啊?是不是要很迅速的配好溶液立刻检测,还是等待反应一段时间后再检测?或者有什么更好的证明体系中有活性氧物种存在的方法和技术呀?求指教啊!!!回复楼上说的是ESR或者是EPR检测自由基吗?
自由基很容易淬灭,所以buffer要考虑着一点
此外,最好有对照来证明你的EPR操作是正常的回复Aβ40,PrP121-231,PrP106-126,这些蛋白都报道过。培养一段时间,加捕获剂,加亚铁离子,就能检测到。缓冲溶液选什么呢?
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电话:021-自由基定义
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自由基定义&&&&&&&&&&★★★
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自由基定义
世纪初就已被人们所认识,生物体系中的自由基的存在,在20世纪50年代才得以确认。随着分析方法特别是近代生物物理检测技术的发展,许多生命现象的自由基机制逐渐被揭示,目前已形成了自由基医学和自由基生物学等新兴学科。自由基理论已渗入到临床诸多学科,为疾病的病因,发病机制提供了新的理论依据,为许多疾病的诊断与防治开辟了新的途径与前景。
是指能独立存在,含有未成对电子的原子,原子团、分子或离子。如含有不成对电子的氧则称为氧自由基(oxygen free radical,OFR), 占机体内自由基的95%以上,它是人体内氧化过程中释放的一种活泼的有害物质。它在体内肆意掠夺其它分子的电子,破坏了细胞、DNA、RNA和蛋白质的结构,使体内细胞组织、器脏的功能降低、并不能被再修复,使体内的免疫系统功能下降,从而导致各种疾病的发生、甚至死亡。
Peroxyl Radical (ROO.)
Hydroxyl. Radical (OH) Superoxide Radical (O2) Nitric Oxide (NO.)1956
自由基在生物体内普遍存在,按其化学结构自由基可为分为三种类型:①半醌类自由基,如黄素类半醌自由基;②氧中心自由基,简称氧自由基,包括超氧阴离子自由基(O2 )、羟自由基(?OH)、烷氧自由基(RO?)、烷过氧自由基(ROO?)、氢过氧自由基(HOO?)。近年来研究较多的活性氮自由基(NO和NO2-)也可算作氧自由基。③其他碳、氮、硫中心自由基。上述氧自由基及其衍生物H2O2、脂质过氧化物(LOOH)及单线态氧(1O2,singlet oxygen)等统称为活性氧(reactive oxygen species, ROS),它是指氧的某些产物和一些反应的含氧产物,它的特点是含有氧,化学性质较氧活泼。ROS对生物机体可产生一系列的有害作用,其毒害作用称为氧的毒性。种种有害后果与许多疾病的发生密切相关,因此生物体内ROS的生成与清除的平衡对生命过程的正常进行具有重要作用。
自由基的主要种类
一氧化氮(nitric oxide, NO)是20世纪80年代发现的一种自由基,它是体内重要的信使分子和效应分子,是当代医学研究的热点和前沿之一。NO的化学性质活泼,可迅速与O2、O2 、铁、铜、镁等反应,其中与O2 反应可生成过氧亚硝基阴离子(ONOO-),后者是一强氧化剂。在生物体内,与NO有关的自由基和化合物有数十种,NO及其相关产物相互反应,在机体内生成一系列具有重要生物功用的自由基和硝基化合物,即所谓的生物活性氮。&& NO在生物体内主要是由NO合酶(NO synthase, NOS)催化合成与释放的,即NOS催化L-精氨酸和O2为底物生成NO和L-瓜氨酸。根据NO的表达与调节,NOS分成两大型:一是组成型NOS(constitutive NOS, cNOS),其活性依赖于Ca2+和钙调蛋白,可间歇性不断表达,根据存在部位,又分为神经元型和内皮细胞型。二是诱导型NOS(inducible NOS,iNOS), 其活性不依赖于Ca2+和钙调蛋白, 但受细胞因子和特殊的信号分子刺激和诱导,在生理条件下不表达,细胞受刺激时才高表达。主要存在于巨噬细胞、中性粒细胞、成纤维细胞、血管内皮细胞等。& NO可作为信号分子在体内起重要生理作用。它可作用其靶受体---可溶性的鸟苷酸环化酶,激活该酶使GTP环化为cGMP,后者再刺激cGMP依赖的蛋白激酶,调节磷酸二酯酶和离子通道,发挥一系列生物效应:松弛平滑肌、舒张血管,抑制平滑肌细胞增殖,抑制血小板粘附和聚集,保护细胞、增加神经递质释放。NO还可介导炎症时巨噬细胞和中性粒细胞杀灭微生物的作用。除此之外,NO还可作为细胞毒分子,参与多种疾病的病理过程。
在人体内,除上表中各种自由基之外,在体内的各种生化反应过程中,还会形成许多虽然电子是配对的,但极易失去一个电子而转变为自由基的含氧化和物,如下表:
极易转变为自由基的氧化物
过氧化亚硝酸基
四氧化二氮
过氧化亚硝酸
三氧化二氮
氢过氧化物
烷基过氧化亚硝酸
O2-+ H+& T HOO
2 O2-+ 2H+ → H2O2 + O2
O2-+ H2O2 → HO + OH- + O2
&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& HO+ RH& → R + H2O
&&&&&&&&&&&&&R + O2& → ROO-
&&&&&&&&&&&ROO- + RH → ROOH +R
&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& O2 →O2-
1μmol/LPh75s100μm.
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预警 | 重大隐患:饲料添加剂化学物的遗传毒性
重大隐患:饲料添加剂化学物的遗传毒性——吡啶羧酸铬造成的遗传毒性文| 王勇王勇,建明工业(珠海)有限公司产品经理自20世纪40年代AUERBACH等研究证明化学物可以诱发动物和人类遗传物质的突变后,人们开始关注化学物的遗传毒性。随着生命科学的不断发展,对各种生命现象认识及对环境化学物研究的深入,这种关注转变为一种忧虑,甚至一点恐慌。我们的忧虑不止是数量众多的新设计的或重新组合在一起的化学物进入人们的生活空间,给人类可能造成的遗传危害;而且还包括其对生态系统中其他生物的遗传损伤会对自然生态系统造成破坏,进而威胁人类未来的生存空间。1966年美国FDA率先制定了《化学物安全评价》标准,此后世界各国也参照此评价制定了药物或其它化学物的测试指南。到70年代美国学者Wilson提出“发育毒理学”的概念之后,各国政府和科学家对遗传与发育毒性的危害逾加重视,80年代,美国环保局(EPA)和世界卫生组织( WHO)也提出了遗传与发育毒理学的评价原则,使安全评价体系的检测方法更加完善。遗传毒性研究作为药物非临床安全性评价的重要的一部分内容,它与其他毒理学研究尤其是致癌性研究、生殖毒性研究有着密切的联系。1. 吡啶羧酸铬引发的有机铬遗传毒性危机Speetjens JK于1999年在“TheNutritional Supplement Chromium(III) Tris(picolinate) Cleaves DNA ”研究中发现吡啶羧酸铬的安全性受到了质疑,尤其是其能够使染色体断裂。能够强烈的催化生物氧化还原反应生成羟自由基引起DNA损伤。Hepburn DD于2003年在“Nutritionalsupplement chromium picolinate causes sterility and lethal mutations in Drosophila melanogaster”研究中发现吡啶羧酸铬在遗传安全领域是一种声名狼藉的化学产品,低水平的吡啶羧酸铬在生物还原剂的条件下就可以催化生成氧自由基,最近研究表明吡啶羧酸铬会造成大鼠氧化性DNA损伤。同时生理水平的吡啶羧酸铬可以导致黑腹果蝇不育和死亡(化蛹和羽化不成功)。Bagchi D于2002年在“Cytotoxicityand oxidative mechanisms of different forms of chromium”研究中发现通过对比吡啶羧酸铬和烟酸铬的毒性,发现吡啶羧酸铬能够产生更多的氧化应激和DNA损伤。近来研究表明吡啶羧酸铬造成的氧化应激和DNA损伤是由于其配体吡啶甲酸的原因引起的。DIANEM. STEARNS 于1995年在“Chromium(III) picolinate produceschromosome damage in Chinese hamster ovary cells”研究中发现不同浓度的( 0.05, 0.10, 0.50, and 1.0 mM)吡啶羧酸铬与不添加吡啶羧酸铬相比可以造成3-18倍的染色体损伤。同时,相同水平的烟酸、烟酸铬和氯化铬没有其对染色体造成损伤,推测损伤是由于吡啶羧酸引起的。2. 吡啶羧酸铬造成的遗传毒性的原理吡啶羧酸铬在胞内还原剂(维生素C,硫醇等)存在的条件下发生类Fenton反应。在此过程中生成大量对DNA稳定性影响的ROS(活性氧),如超氧离子,过氧离子,羟基自由基,过氧化氢等。ROS的产生,使蛋白质、脂质过氧化生成羰基蛋白、脂质过氧化物等氧化产物,同时使细胞膜通透性、膜流动性降低,细胞脆性升高,细胞完整性遭到破坏。另一方面,ROS产生后降低了Ca2+-ATP酶与钙通道活性,造成Ca超载,从而激活Ca2+-依赖蛋白酶,磷脂酶(PLA2)及核酸内切酶(刘欣等,2001)。PLA2的激活,使膜磷脂降解,磷脂含量降低,导致膜通透性增加,Ca2+易于进入细胞内,使细胞内Ca2+超载,形成恶性循环。核酸内切酶的激活,催化基因组DNA 在核小体间降解;Ca2 +浓度的升高还可激活谷氨酰胺转化酶和蛋白激酶C 等,使细胞骨架断裂,细胞浆蛋白交叉联合,促使凋亡发生(Ui-Tei等,2000)。此外,Ca2+浓度的改变还可激活凋亡相关蛋白激酶与Caspase家族的级联反应,最终导致细胞凋亡。3、遗传毒性对动物生产的危害3.1 致畸影响具有遗传毒性的物质能够直接作用动物的生殖细胞,引起遗传基因突变,影响胚胎发育,使动物繁殖的后代中畸形率、死亡率、弱仔和流产增加,并且产生的这种致畸作用还会被遗传,同时遗传毒性物质还会引起动物生理功能和代谢功能缺失或者不足,严重影响后代的生产潜力的发挥,导致后代的生产性能一代代减退。3.2 对基因的影响遗传毒性物质能够影响动物的染色体使得基因和染色体结构发生改变,引发动物遗传疾病和免疫缺陷,使得动物的免疫力低下,影响动物的健康和生产性能。4. 美国FDA对有机铬的处理意见FDA于2005年要求所有的有机铬生产企业对其产品进行遗传毒性评估,在评估期间禁止饲料中添加使用任何形式的有机铬。当时北美市场上主要有三种有机铬在销售使用:丙酸铬,蛋氨酸铬和吡啶羧酸铬。丙酸铬和吡啶羧酸铬针对遗传毒性进行了FDA要求的相关实验评价,结果是建明工业的丙酸铬顺利的通过遗传毒性的三项评价实验:Ames试验(污染物致突变性检测)、 小鼠淋巴瘤细胞试验、小鼠体内微核试验,成为北美唯一能够在猪和反刍上同时使用的有机铬。吡啶羧酸铬在针对哺乳动物基因突变、生殖毒性评价的试验(小鼠淋巴瘤试验)中没有通过。FDA之前发出的通知要求有机铬生产企业进行毒性研究,但是蛋氨酸铬生产企业没有提交相关的毒性研究报告,所以美国饲料监督协会(AAFCO)在添加剂允许添加目录中将蛋氨酸铬直接撤除,视为不安全成分禁止在所有饲料中添加使用(Withdrawn Ingredients:T57.164 ChromiumL-Methionine Complex (withdrawn))。——END——建明微信公众号版权声明:任何形式的转载,必须保证文章图文完整性,不得删除作者、作者单位及来源信息。建明工业对此保留一切权利。建明(ww),提供“灵感分子解决方案”,为人类和动物的营养和健康而服务。致力于饲料和食品安全,建明的全球顶级生产设施设备,通过约500种特种原料,为全球饲料和食品工业,以及人类健康与营养、个人护理市场,提供完美解决方案。建明是一家美国私人家族拥有和经营的公司,在全球90多个国家拥有近2000名员工,在比利时、巴西、中国、印度、意大利、新加坡、南非和美国拥有生产和研发基地。(某些陈述不一定完全适用于全球所有地区;产品标签和声明根据不同地区而异。)
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[gap=1090]Key words: C N-benzyl
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莱菔多糖还具有很强的羟自由基清除能力,强于VC。
Strongly hydroxyl radical scavenging ability, and higher than VC.
目的建立一项用于反映抗氧化剂或生物组织抗氧化能力的指标——总氧自由基清除能力(TOSC)。
Objective To establish a new marker, total oxyradical scavenging capacity (TOSC), for evaluating the protective potential of antioxidant and bio-tissues.
从麦麸中分离得到的水溶性和水不溶性膳食纤维具有抗氧化活性和·OH自由基清除能力,两者对·OH的清除率分别为80.2%和58.3%。
The antioxidant and ·OH free radical scavenging activities were detected in the water soluble and water insoluble dietary fiber from wheat bran, with ·OH scavenging ratio 80 2% and 58 3% respectively.
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