cas9 mRNA,sgRNA，cas9蛋白_CRISPR/Cas9基因敲除敲入_上海吉荧生物技术有限公司,Shanghai GeneBio Co.,Ltd
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cas9 mRNA,sgRNA，cas9蛋白
提供10ug,15ug,20ug等不同规格体外转录RNA产品，受精卵直接注射，安全性更高，效果更好。建议cas9 mRNA注射浓度100 ng/uL，sgRNA 50 ng/ uL。
1750元/20微升
2000元/15微克
3000元/30微克
1800元/10微克
2400元/20微克
1500元/50U
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体外转录试剂盒 &(联系我们获取产品资料）
一、cas9 体外转录试剂盒
AM1340 & mMESSAGE mMACHINE&& SP6 Kit&25 rxns &
AM1344 & mMESSAGE mMACHINE&& T7 Kit&25 rxns & &
二、cas9 mRNA纯化试剂盒
JY-CAS001 & caspureTM纯化试剂盒 &20次
三、sgRNA体外转录试剂盒
JY-g001 & SgRNAscriptTM& 体外转录试剂盒 & & & & &25次 &
四、gRNA纯化试剂盒
JY-g002 &pureRNA TM 纯化试剂盒 & 30次
mMESSAGE mMACHINE&&Kit
&&&&High Yield&Capped RNA&Transcription Kit
Data from GeneBio , mRNA for injection & transfection
mMESSAGE mMACHINE&&high yield capped RNA转录试剂盒是专门设计用于体外高产量合成帽状RNA（即合成RNA的5端带帽状结构），帽状RNA模拟了大多数真核生物体内发现的mRNA结构。试剂盒内的帽状类似物[m7G(5)ppp(5)G]与4种核苷酸混合在单一溶液内，简化了反应步骤。另外帽状类似物：GTP经优化设计为1:4，最大化转录生成RNA和帽状RNA所占比例。20ul的反应体系加入1&g DNA模板在2h内可以体外合成15-35 &g 7-甲基鸟苷帽状RNA，其产量是传统体外转录反应的10-50倍。
1）一步法直接合成带帽状结构的RNA，其结构与大多数真核生物体内的mRNA结构相同；
2）试剂盒内酶混合液含RNase抑制剂，保护RNA不被降解；
3）试剂盒含对照模板（ Xenopus elongation factor 1a, pTRI Xef），以检测试剂盒的转录效率；
帽状RNA可直接用于下游实验：显微注射入卵母细胞，体外翻译，转染或者其他。
试剂盒成分：（25 reactions）
1.75 ml，&Nuclease-free Water。
50&&L&Enzyme Mix (SP6, T7, or T3)，50%甘油缓冲液含RNA聚合酶、Rnase抑制剂和其他。
50&&L，10X Reaction Buffer (SP6, T7, or T3)&，含盐类、缓冲液、DTT和其他成分。
250&L，2X NTP/CAP (SP6, T7, or T3)，一种中性缓冲液含有ATP/CTP/UTP/GTP/帽状类似物。
100&L GTP，20 mM&in SP6 K&30 mM&in T3 and T7 Kits。
100 &L，TURBO DNase (2 U/&L)。
10 &L，pTRI-Xef, 0.5 mg/mL (Control Template)。
1 ml，Ammonium Acetate Stop Solution。
1.4 mL，Lithium Chloride Precipitation Solution。
1.4 mL，Gel Loading Buffer II。
实验材料（自行准备）：
DNA模板：待转录的DNA序列上游必须带有正确的RNA聚合酶启动位点（T7，T3或SP6）；
标记核苷酸(选择性)：[&-32P] UTP or [&-32P]CTP可加入反应体系用作追踪元素，方便定量检测RNA合成量；
合成RNA纯化试剂（选择性）：缓冲液或饱和酚/氯仿，异丙醇，离心柱；
DNA模板（注意事项）：
（1）试剂盒选择：根据带转录的DNA序列上游带有的RNA聚合酶启动位点（T7，T3或SP6）选择对应的试剂盒；
（2）模板浓度：推荐使用0.5 &g/&L水溶液或TE溶液；
（3）模板大小：最佳长度是0.3-5.0kb，可用于更长或更短的模板，需适当调整反应条件；
（4）模板方向：若合成sense RNA(正义RNA)，使用RNA聚合酶对应的细菌启动子在5端或者蛋白质编码区的N末端；如果模板含有质粒，经多克隆位点内切酶线性化后启动子处于相反位置；若合成antisense RNA（反义RNA），使用RNA聚合酶对应的细菌启动子在3或者蛋白质编码区的C末端；
产品信息：现货供应！
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price（RMB）
mMESSAGE mMACHINE&&SP6 Kit
mMESSAGE mMACHINE&&T7 Kit
参考文献：
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Stoflet ES, Koeberl DD, Sarkar G, and Sommer SS (1988) Genomic amplification with transcript sequencing.&Science&239: 491&494.您所在位置： &
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基于CRISPCas9系统的人胚肾上皮细胞UHRFl基因定向编辑.pdf64页
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独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作。除了文中特
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书 学位论文作者签名：丁 导师签名： 髫漉 日期：01．01I|[．．m占月Z日 日期：多F／牛年二月乡日 ， 目 录 中文摘要…………………………………………………………………………1 英文摘要…………………………………………………………………………3 缩略词表…………………………………………j……………………………．．5
―、L―j一 日U暑i………………………………………………………………………………………………………．．7
第一部分：UHRFl基因靶位点设计及gRNA载体构建…………………．．11 一、材料与方法………………………………………………………………．12
二、实验结果…………………………………………………………………．20
三、讨论…_………………
正在加载中，请稍后...CRISPR-Cas9系统的开发过程中，张锋和Church是如何设计这个可以用来基因组编辑的工具的呢？这个工具又是长什么样？理解其结构才能更好的理解其工作原理。&我们知道在细菌的II型CRISPR系统中，Cas9行使剪切功能需要crRNA，tracrRNA和RNaseIII共同作用。为了让整个系统更高效，张锋和Church做了一个同样的工作，将crRNA和tracrRNA结合到一起构建到载体中，crRNA-tracrRNA就是我们现在常看到的gRNA；同时，构建Cas9的表达载体。根据研究的目的基因序列，设计crRNA（gRNA sequence）并克隆到gRNA载体中。再将这两个载体共转到细胞中，行使基因组编辑功能。（图1）事实证明，这样的系统很高效。图1. 目前常用的Cas9的工具（来自Church的Science文章截图）在这样的系统确定后，结构生物学家么就开始研究Cas9以及其和RNA之间复合物的结构了。在过去几年中，PDB收录的和S. pyogenes中Cas9相关的结构文章有4篇，其中Jennifer A. Doudna2篇，张锋1篇，苏黎世大学的Martin Jinek。找不到文章的可以留言给我email地址。&因为我对于结构了解不多，但是能够明白大概的意思。下面以张锋的文章为例，把相关的图片贴上。&图2. Cas9蛋白不同的结构域组成图图3. sgRNA:targetDNA 复合物示意图图4. Cas9-sgRNA-DNA复合物结构图图5. Cas9在RNA的引导下，剪切DNA的模型图&概括来说，Cas9有2个结构域组成：a recognition (REC) lobe 和 a nuclease (NUC)lobe。REC包含3个区域：长的a 螺旋（BH），REC1和REC2。NUC包括：RuvC，HNH和PAM互作结构域（PI），（图2）&Cas9和sgRNA-DNA形成的复合物结构图参考图4。&整个Cas9识别gRNA并剪切的机制为：Cas9识别PAM相邻的区域和sgRNA上面的Repeat:Anti-Repeat Duplex区域（图3），形成Cas9-sgRNA复合物。这个复合物随后和guideRNA和Target DNA一条链互补结合形成的20 bp的结构结合，形成Cas9-sgRNA-target DNA 二元复合结构。其中，PI结构域识别PAM序列，形成R loop结构。之后，HNH结构域和RuvC结构域分别剪切DNA的2个单链，剪切位点为PAM序列上游3个碱基处。（图5）需要说明的是：PAM位点对于Cas9的识别和剪切都起着非常重要的作用。&CRISPR(gh_8fef821a17e9)　
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CRISPR-Cas9基因敲除小鼠
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&&CRISPR-Cas9转基因导入小鼠,获得特异性基因敲除的手段。
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