高二生物动物细胞培养和核移植技术测试题
动物细胞培养和核移植技术1．(2011年广州检测)用于动物细胞培养的细胞，最好选用(　　)A．任何个体的细胞B．成熟个体的体细胞C．动物的受精卵D．胚胎或幼龄动物的器官和组织细胞解析：选D。失去分裂的、高度分化的动物细胞是不能进行培养的；胚胎或幼龄动物的器官和组织细胞分化程度低，分裂强，适于进行细胞培养。2．下列动物细胞培养过程中属于原代培养的是(　　)A．用胰蛋白酶使组织分散成单个细胞的过程B．从机体取得细胞后立即进行培养的过程C．出现接触抑制现象后取下的细胞的培养过程D．哺乳动物细胞在培养基中的悬浮生长过程解析：选B。原代培养是最初的细胞培养，即还没有分瓶培养前的细胞培养。3．动物细胞培养的特点是(　　)①细胞贴壁　②有丝分裂　③分散生长　④接触抑制⑤减数分裂A．①②④　　　　　　　　 B．②④⑤C．①③④ D．③④⑤解析：选A。动物细胞培养的过程是细胞有丝分裂的过程，在动物细胞培养的过程中存在细胞贴壁、接触抑制等特点，需要用胰蛋白酶处理，使细胞分散成单个。4．用动、植物成体的体细胞进行离体培养，下列叙述正确的是(　　)A．都需用CO2培养箱B．都须用液体培养基C．都要在无菌条件下进行D．都可体现细胞的全能性解析：选C。用动、植物成体的体细胞进行离体培养都必须在无菌条件下进行。用植物成体的体细胞进行离体培养获得新个体体现的是细胞的全能性，而动物体细胞离体培养主要是获得细胞或其代谢产物。5．乙马的卵细胞核被甲马的体细胞核置换后，这个卵细胞经过多次分裂发育成重组胚胎，再植入丙马的子宫内发育，结果产下一只小马。下列叙述正确的是(　　)A．直接在体外对甲马的体细胞进行诱导也能培养出胚胎来B．小马的性状完全与甲马相同C．此项技术可用于保护濒危物种D．该过程可以很好地证明动物细胞的全能性解析：选C。克隆过程中细胞质遗传物质来自一方，而细胞核中遗传物质来自另一方，所以小马的性状与甲马不完全一致，该过程只能说明动物细胞核具有全能性，而动物细胞全能性的体现目前还没。6．(2011年广东汕头检测)如图所示为动物细胞培养的基本过程示意图，请据此图回答下列问题。(1)容器A中放置的是动物器官或组织，它一般取自_______________________________________________________________________________________________________________________。(2)容器A中的动物器官或组织首先要进行的处理是________，然后用________酶处理，这是为了使细胞分散开来。这样做的目的是________________________________________________________________________。(3)培育首先在B瓶中进行，瓶中的培养基成分有________________________________等。在此瓶中培养一段时间后，有许多细胞衰老死亡，这时培养到________代，到此时的培养称为________________。(4)为了把B瓶中的细胞分装到C瓶中，用________处理，然后配置成________，再分装。(5)在C瓶中正常培养了一段时间后，发现细胞全部死亡，原因是____________________。解析：(1)培养的动物细胞一般取自动物胚胎或幼龄动物的器官或组织的原因是这部分细胞的分化程度低，增殖能力强，更易于培养。(2)在进行培养时应尽量分散成单个细胞，便于与培养液充分接触进行物质交换，使其分散需要用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理。(3)动物细胞培养过程中尽量使培养基成分与体内基本相同，所以需要添加糖、氨基酸、无机盐、动物血清、促生长因子和微量元素等。培养的过程分为原代培养和传代培养两大阶段，当培养到第10代左右，出现许多细胞衰老死亡的现象，这时的培养为原代培养。(4)到第10代左右需要用胰蛋白酶处理，使细胞分散，从玻璃瓶壁上脱离下来，配制成细胞悬浮液继续培养。(5)在C瓶中的培养属于传代培养，在传代培养过程中到第10～50代细胞死亡，有些细胞可能发生遗传物质的改变能继续增殖即发生癌变。如果无此现象则说明细胞遗传物质没有改变，无癌变的特点。答案：(1)动物胚胎或幼龄动物的器官或组织(2)剪碎　胰蛋白　使细胞与培养液充分接触(3)糖、氨基酸、无机盐、动物血清、促生长因子和微量元素　10　原代培养(4)胰蛋白酶　细胞悬浮液(5)细胞没有发生癌变(紧扣教材，思考感悟)【旁栏思考】1．进行动物细胞传代培养时用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要是什么成分？用胃蛋白酶行吗？(教材P44)答案：用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要是蛋白质。胃蛋白酶作用的适宜pH约为2，当pH大于6时，胃蛋白酶就会失去活性。胰蛋白酶作用的适宜环境pH为7.2～8.4。多数动物细胞培养的适宜pH为7.2～7.4，胃蛋白酶在此环境中没有活性，而胰蛋白酶在此环境中活性较高，因此胰蛋白酶适合用于细胞培养时的消化。2．为什么对动物细胞进行培养时通常要添加血清？(教材P46)答案：血清中含有蛋白质、氨基酸、葡萄糖、激素等，其中蛋白质主要为白蛋白和球蛋白。氨基酸有多种，是细胞合成蛋白质的基本成分，其中有些氨基酸动物细胞本身不能合成(称为必需氨基酸)，必须由培养液提供。血清激素有胰岛素、生长激素等及多种生长因子(如表皮生长因子、成纤维细胞生长因子、类胰岛素生长因子等)，血清中还含有多种未知的促细胞生长因子、促贴附因子及其他活性物质，能促进细胞的生长、增殖和贴附。因此，细胞培养时要保证细胞能够顺利生长和增殖，一般需添加10%～20%的血清。【寻根问底】胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗？为什么？(教材P44)答案：胰蛋白酶除了可以消化细胞间的蛋白外，长时间的作用也会消化细胞膜蛋白，对细胞有损伤作用，因此必须控制好胰蛋白酶作用的时间。1．动物细胞工程常用的技术手段中，最基础的是(　　)A．动物细胞培养　　　　　　 B．动物细胞融合C．单克隆抗体 D．胚胎细胞核移植答案：A2．动物细胞培养过程的顺序是 (　　)①原代培养　②传代培养　③用胰蛋白酶处理组织，形成分散的细胞悬液A．①②③ B．①③②C．②①③ D．③①②答案：D3．(2011年北京西城区高二检测)下列关于动物细胞培养的叙述中，正确的是(　　)A．动物细胞培养的目的就是为获得细胞分泌蛋白B．动物细胞培养前要用胰蛋白酶处理使细胞分散开C．动物细胞培养通常不会出现接触抑制现象D．可以通过细胞培养技术获得完整的动物个体答案：B4．一般来说，动物细胞体外培养需要满足以下条件(　　)①无毒的环境　②无菌的环境　③合成培养基需加血浆④温度与动物体温相近　⑤需要O2，不需要CO2 　⑥CO2能调节培养液pHA．①②③④⑤⑥ B．①②③④C．①③④⑤⑥ D．①②③④⑥解析：选D。一般来说，动物细胞体外培养需要满足以下条件：无菌、无毒的环境，与体内培养相同的营养，适宜的温度和pH，还要有适量的CO2。5．在动物细胞培养过程中，出现遗传物质改变的细胞是(　　)A．细胞系 B．细胞株C．原代细胞 D．传代细胞解析：选A。细胞株是一些分裂能力较强的正常细胞，其遗传物质没有发生变化；而细胞系则是一些具有癌变特征的细胞，具有无限增殖的能力。6．动物细胞培养技术的用途有(　　)①生产有价值的制品，如病毒疫苗、干扰素等　②生产基因工程技术中所用的受体细胞　③可以用于检测有毒物质　④培养的各种细胞可直接用于生理、病理、药理等方面的研究A．①② B．①②③C．②③④ D．①②③④解析：选D。通过动物细胞培养可以生产生物制品如病毒疫苗、干扰素等，可以培养皮肤移植的材料，还可以检测有毒物质，用于生理、病理、药理等方面的研究。7．动物细胞体外培养时，通常要在培养基中补充一定浓度的某些物质。如图是血清对正常细胞和癌细胞培养影响的实验结果。下列从该图提供的信息获得的结论中不正确的是(　　)A．正常细胞与癌细胞的增殖速率相同B．有无血清对正常细胞与癌细胞培养的影响不同C．培养基中补充血清有助于正常细胞的培养D．培养基中是否补充血清对癌细胞的培养影响不大解析：选A。动物细胞培养时通常要在培养基中加入血清、血浆等物质。从图示中可看出癌细胞与正常细胞的增殖速率不同。有血清时正常细胞增殖快。而有无血清对癌细胞的培养影响不大。8．(2011年宣武高二检测)下列与动物细胞培养有关的表述中，不正确的是(　　)A．动物细胞培养需要无菌、营养、适宜的温度和pH等条件B．用胰蛋白酶作用于离体的动物组织，使其分散成单个细胞C．放入CO2培养箱中培养动物细胞的主要目的是为了满足细胞对CO2的需求D．细胞株一般具有恒定的染色体组型、生化特性等解析：选C。解答本题的关键是知道动物细胞培养的条件、过程，能准确识别细胞株与细胞系的异同，CO2培养箱中CO2的作用是维持培养液pH的相对稳定。9．用于核移植的供体细胞一般都选用(　　)A．受精卵B．传代培养10代以内的细胞C．传代培养10～50代以内的细胞D．处于减数第二次分裂中期的次级卵母细胞解析：选B。10代以内的细胞遗传物质没有发生改变。10．一只羊的卵细胞核被另一只羊的体细胞核置换后，该重组细胞经过多次分裂，再植入第三只羊的子宫内发育，结果产下一只羊羔。这种克隆技术具有多种用途。但是不能(　　)A．有选择地繁殖某一性别的家畜B．繁殖家畜中的优良个体C．用于保存物种D．改变动物的基因型解析：选D。克隆技术的优势在于能够完全保留亲本的优良性状、实现有针对性的繁育和保存物种。基因型的改变只能通过基因突变、基因重组、染色体变异来实现。克隆本身不一定导致基因突变，更不会发生基因重组与染色体变异，因此，克隆不能改变动物的基因型。11．回答下列有关动物细胞培养的问题：(1)在动物细胞培养过程中，当贴壁细胞分裂生长到细胞表面________时，细胞会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的________。此时，瓶壁上形成的细胞层数是______。要使贴壁的细胞从瓶壁上分离下来，需要用酶处理，可用的酶是________。(2)随着细胞传代次数的增多，绝大部分细胞分裂停止，进而出现____________________的现象；但极少数细胞可以连续增殖，其中有些细胞会因遗传物质发生改变而变成________细胞，该种细胞的黏着性__________，细胞膜表面蛋白质(糖蛋白)的量________。(3)在细胞培养过程中，通常在________条件下保存细胞。因为在这种条件下，细胞中________的活性降低，细胞________的速率降低。(4)给患者移植经细胞培养形成的皮肤组织后，发生了排斥现象， 这是因为机体把移植的皮肤组织当做________进行攻击。解析：(1)动物细胞培养过程中具有贴壁生长和接触抑制的特点，若要传代培养应先用胰蛋白酶处理，使其从瓶壁上分离下来。(2)在传代培养过程中，随着传代次数的增多，绝大多数细胞停止分裂，进而出现衰老甚至死亡，极少数细胞遗传物质发生改变，克服细胞寿命的自然极限，获得不死性，这种细胞黏着性降低，细胞膜表面的糖蛋白减少。(3)低温可以抑制酶的活性，从而降低细胞的新陈代谢速率。(4)皮肤移植后发生排斥反应，是因为机体把移植的皮肤组织当作抗原进行攻击。答案：(1)相互接触　接触抑制　单层(或一层)　胰蛋白酶　(2)衰老甚至死亡　不死性　降低　减少　(3)冷冻(或超低温、液氮)　酶　新陈代谢　(4)抗原12．现有A和B两个肉牛品种，A品种牛的细胞组成可表示为A细胞核、A细胞质，B品种牛则为B细胞核、B细胞质。(1)如果要获得一头克隆牛，使其细胞由A细胞核和B细胞质组成，基本步骤是：从A品种牛体内取出体细胞，进行体外培养，然后再从培养细胞中取出________注入B品种牛的________卵母细胞，经过某些刺激和培养后，可形成胚胎，该胚胎被称为________，将该胚胎移入代孕母牛的________中，通过培育可达到目的。(2)上述过程中运用了动物细胞工程的哪些技术？_____________________________________________________________________________________________________。(3)克隆牛的产生说明________具有全能性。由A、B两品种杂交得到的牛与克隆牛相比，杂交牛细胞核的遗传物质来自________个亲本，细胞质来自________性亲本，克隆牛和杂交牛的遗传物质组成________(相同，不同)。(4)请举一例，说明克隆牛培育成功的实际意义。____________________________________________________________________________________________________。解析：动物的克隆所用的是核移植，也就是把动物体细胞的细胞核移入去核的卵母细胞中，然后经过某些刺激和培养后形成重组胚胎，再移入代孕动物的子宫中继续发育，从而获得克隆个体。克隆动物的成功说明了动物体细胞核具有全能性，克隆动物的遗传特性与提供细胞核的个体基本一致。在体细胞克隆动物中不仅用到了核移植，还用到了动物细胞培养。答案：(1)细胞核　去核　重组胚胎　子宫(2)动物细胞核移植和动物细胞培养(3)动物体细胞核　两　雌　不同(4)保存濒危物种，繁育优良品种，医学上克隆器官等13．(2011年清华附中高二检测)世界上第一只克隆绵羊&多利&的培育程序如下图所示。(1)请写出①、②所指的细胞工程名称：① ____________，②________。(2)图中实施细胞工程①时，所需的受体细胞大多采用动物卵细胞的原因是________________________________________________________________________。(3)小羊的性状与母绵羊________一样，原因是______________________________________________________________________________________________________。(4)继植物组织培养之后，克隆绵羊的培育成功证明动物细胞也具有____________。(5)从分子水平上看，克隆技术实际上是______________________________________。答案：(1)细胞核移植　胚胎移植　(2)卵细胞体积大，易操作 ，成熟促进因子的活性高，核移植成功率高　(3)B　&多利&的全部细胞核基因来自母羊B　(4)全能性(5)遗传信息的全部复制
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下列关于动物细胞培养的叙述，不正确的是（北京四中网校－〉名师答疑－〉高二－〉生物）　
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　　动物细胞培养
下列关于动物细胞培养的叙述，不正确的是
　　下列关于动物细胞培养的叙述，不正确的是
A用胰蛋白酶处理剪碎的组织可以获得细胞悬浮液
B动物细胞培养时用CO2培养箱维持适宜的温度和PH
C把细胞从一个培养瓶封装到多个培养瓶成为传代培养
D胚胎干细胞培养时加饲养层细胞促进干细胞分化
瑾年醉流苏
　　动物细胞培养
　　6526821
A BCO2PH C D
pHHCO3-HCO3-PH细胞培养_百度百科
细胞培养也叫细胞，在生物学中的正规名词为细胞培养技术。不论对于整个，还是其中之一的来说，细胞培养都是一个必不可少的过程，细胞培养本身就是细胞的大规模克隆。细胞培养技术可以由一个细胞经过大量培养成为简单的单细胞或极少分化的，这是克隆技术必不可少的环节，而且细胞培养本身就是细胞的克隆。通过细胞培养得到大量的细胞或其代谢产物。因为生物产品都是从细胞得来，所以可以说细胞培养技术是生物技术中最、最基础的。
细胞培养基本概述
96孔细胞培养 吸液
细胞的生长需要营养环境，用于维持的营养基质称为培养基。培养基按其物理状态可分为和。液体培养基用于大规模的工业生产以及生理等基本理论的研究工作。液体培养基中加入一定的凝固剂（如）或固体培养物（如麸皮、大米等）便成为固体培养基。固体培养基为细胞的生长提供了一个营养及通气的表面，在这样一个营养表面上生产的细胞可形成单个。因此，固体培养基在细胞的、鉴定、计数等方面起着相当重要的作用。从中分离所需要细胞和扩增获得的细胞以及对细胞进行体外改造，观察，必须解决细胞离体培养问题，同微生物细胞培养的难易相比，比较困难的是来自多细胞生物的，特别是的培养。细胞培养泛指所有，其含义是指从动物体内取出组织，于模拟体内等特定的体内条件下，进行孵育培养，使之生存并生长。细胞培养工作现已广泛应用于生物学、、新药研发等各个领域，成为最重要的基础科学之一。[1]
细胞培养设施器材
设施：超净台、恒温培养箱、、液氮储存罐、电热鼓风、冰柜、电子、恒温水浴槽、离心机、蒸汽消毒器。
培养皿、滴流瓶、刻度吸管、、培养瓶、、、三角烧瓶
二、塑料器材
多孔培养板、培养皿、
三、橡皮器材
橡皮制品（最好是硅制品）做各种瓶或试管的、盖子。
四、金属器材
、镊子、、解剖刀、、组织镊、眼科镊及各种型号针头
五、其他物品
纱布、和针头
细胞培养培养基
几种常用细胞培养基产品
⒈ BME（basal medium eagle）基础伊格培养基
⒌ RPMI-1640
⒎ Mccoy's 5A
⒏ F10\ F12 \DMEM混合F12（三）几种常用细胞培养配套试剂的配置（缓冲液、平衡盐溶液等）
1、无钙、镁、离子溶液（1000ml)
氯化钠（NaCl)8g磷酸二氢钠、（NaH2PO4H20）0.05g、氯化钾（KCl)0.2g、碳酸氢钠（NaHCO3）1g、(Na3C6H5O7,H20）1g、葡萄糖1g、加或双蒸水至1000mL
2、PBS（Phosphate-Buffered saline）
甲液：0.2mol/L磷酸氢二钠溶液、磷酸氢二钠（无水）28.4g、氯化钠8.77g加去离子水或双蒸水至1000mL
乙液：0.2mol/L磷酸二氢钠溶液、磷酸二氢钠（无水）2.4g、氯化钠8.77g加去离子水或双蒸水至1000mL
甲、乙液于4℃保存，使用时按表3-2所示比例，配制成所需pH浓度，高压后室温保存。
3、Hanks液（Hank‘s Balanced salt solution)
⑴母液甲（20x）配法
①NaCl(A.R)160g、KCl(A.R)8g、MgSO4.7H2O（A.R)2g、MgCl.6H2O(A.R)2g依次溶于800mL双蒸水中，前一物质溶后再加后一种。
②CaCl2(A.R)2.8g溶于100mL双蒸水中，溶时不断搅拌（此液应单配，单溶）。
待上述两溶液中的“溶质”全溶后，将它们混合，再用双蒸水补至1000mL，向其中加2mL作为，置4℃保存。
⑵母液乙（20×）配法
①Na2HPO4.12H2O(A.R)3.04g、KH2PO4(A.R)1.20g、（A.R)20.0g溶于800ml双蒸水中。
②0.4%酚红液0.4g酚红放在玻璃后加0.01N、NaOH11.28mL，直到全部，移入100mL容量瓶中，加水至100mL，过滤，pH为7.4，4℃保存。
待上述各“溶质”完全溶解后，用补至1000mL,其中加氯仿2mL作防腐剂，置40℃保存。
3）使用液（1×）配法
取母液甲和母液乙各一份，加双蒸水18份，分装后，塞好，挂上标志。以115℃高压灭菌25分钟（以免葡萄糖破坏），置室温后4℃保存，可使用几个月。临用前，用7.5%NaHCO3调至所需pH。
4、Eagle's液（EBSSEagle's Balanced salt solution)
是一种在二氧化碳（CO2）环境中短期维持细胞活性的平衡盐溶液，可用于细胞解离前的清洗、细胞或组织的运输、细胞计数时、溶液的配置等。
生物缓冲液，化学性质稳定，在PH7.2~7.6范围内，比NaHCO3缓冲液的缓冲能力更强。
常规缓冲体系的一部分，但是不稳定，易受空气中CO2的含量而改变PH值，影响缓冲效果。
细胞培养具体步骤
一、复苏[1]
1.把冻存管从中取出来，立即投入37℃水浴锅中，轻微摇动（注意防止盖子不紧致使液体进入冻存管）。液体都融化后(大概1-1.5分钟)，拿出来喷点酒精放到超净工作台里。
2.把上述细胞悬液吸到装10ml培养基的15ml的离心管中(用培养基把冻存管洗一遍，把粘在壁上的细胞都洗下来)，1000转离心5分钟。
3.把上清液倒掉，加1ml培养基把细胞起来。吸到装有10ml培养基的10cm培养皿中前后左右轻轻摇动，使培养皿中的细胞均匀分布。
4.标好细胞种类和日期、培养人名字等，放到37℃的5%CO2培养箱中培养，细胞贴壁后换培养基。
5.根据细胞增长速度2-3天换一次培养基。
1.培养皿中的细胞覆盖率达到80%-90%时要传代。
2.把原有培养基吸掉。
3.加适当的(能覆盖细胞就行)，消化1-2分钟。
4.细胞都变圆后加入等体积的含血清的培养基终止消化。
5.用移液枪吹打细胞，让细胞悬浮起来。
6.把细胞吸到10ml或15ml的离心管中，1000转离心5分钟。
7.倒掉上清液，加1-2ml培养基，把细胞都吹起来。
8.根据细胞种类把细胞传到几个培养皿中。一般，癌细胞分5个，正常细胞传3个。继续培养。
把细胞消化下来并离心(同上)。用配好的冻存液把细胞悬浮起来，分装到灭菌的冻存管中，静止几分钟，写明细胞种类，冻存日期。4℃30min，-20℃30min，-80℃过夜，然后放到液氮灌中保存。
冻存液的配制：70%的完全培养基+20%FBS+10%DMSO.DMSO要慢慢滴加，边滴边摇。
细胞培养一般过程
一、准备工作
准备工作对开展细胞培养异常重要，工作量也较大，应给予足够的重视，准备工作中某一环节的疏忽可导致实验失败或无法进行。准备工作的内容包括器皿的清洗、干燥与消毒，培养基与其他试剂的配制、分装及灭菌，无菌室或超净台的清洁与消毒，培养箱及其他仪器的检查与调试，具体内容可参阅有关文献。
在无菌环境下从机体取出某种组织细胞（视实验目的而定），经过一定的处理（如消化分散细胞、分离等）后接入培养器皿中，这一过程称为取材。如是细胞株的扩大培养则无取材这一过程。机体取出的组织细胞的首次培养称为。理论上讲各种动物和人体内的所有组织都可以用于培养，实际上幼体组织（尤其是胚胎组织）比成年个体的组织容易培养，分化程度低的组织比分化高的容易培养，肿瘤组织比正常组织容易培养。取材后应立即处理，尽快培养，因故不能马上培养时，可将组织块切成黄豆般大的小块，置4℃的培养液中保存。取组织时应严格保持，同时也要避免接触其他的有害物质。取病理组织和皮肤及消化道上皮细胞时容易带菌，为减少污染可用抗菌素处理。由组织并分离分散细胞的方法可参阅有关文献。
将取得的组织细胞接入培养瓶或培养板中的过程称为培养。如系组织块培养，则直接将组织块接入培养器皿底部，几个小时后组织块可贴牢在底部，再加入培养基。如系细胞培养，一般应在接入培养器皿之前进行细胞计数，按要求以一定的量（以每毫升细胞数表示）接入培养器皿并直接加入培养基。细胞进入培养器皿后，立即放入培养箱中，使细胞尽早进入生长状态。正在培养中的细胞应每隔一定时间观察一次，观察的内容包括细胞是否生长良好，形态是否正常，有无污染，培养基的PH是否太酸或太碱（由指示），此外对培养温度和CO2浓度也要定时检查。一般进入培养后有一段潜伏期（数小时到数十天不等），在潜伏期细胞一般不分裂，但可贴壁和游走。过了潜伏期后细胞进入旺盛的分裂生长期。细胞长满瓶底后要进行，将一瓶中的细胞消化悬浮后分至两到三瓶继续培养。每一次称为“一代”。二倍体细胞一般只能传几十代，而或细胞株则可无限地传代下去。可能具有恶性性质，也可能仅有不死性（Immortality）而无恶性。培养正在生长中的细胞是进行各种生物医学实验的良好材料。
四、冻存及复苏
为了保存细胞，特别是不易获得的突变型细胞或细胞株，要将细胞冻存。冻存的温度一般用的温度—－196℃，将细胞收集至冻存管中加入含保护剂（一般为二甲亚砜或甘油）的培养基，以一定的冷却速度冻存，最终保存于液氮中。在极低的温度下，细胞保存的时间几乎是无限的。复苏一般采用快融方法，即从液氮中取出冻存管后，立即放入37℃水中，使之在一分钟内迅速融解。然后将细胞转入培养器皿中进行培养。冻存过程中保护剂的选用、细胞密度、降温速度及复苏时温度、融化速度等都对有影响。[2]
细胞培养一般条件
简言之，即细胞需要什么就提供什么，道理是如此，真正能做到这点尚需时日，人们至今对细胞的控制机理认识不足，癌细胞虽然也来自正常细胞，但至今不知道究竟为什么癌细胞很难停止已经启动的有害分裂，尽管如此，人们长期的研究结果表明，离体细胞培养需要的基本条件就是下列细胞生理条件。
细胞培养⑴温度
温度过低时细胞生长缓慢甚至不生长。利用冷冻保藏细胞可保持细胞的原有分裂。温度过高导致。这主要是由酶和蛋白质所需要的最适温度决定的。多数遇到高温后容易导致空间结构改变或者丧失（变性）。细胞膜遇到高温后容易。在自然界，既有耐高温的
恒温培养箱
细胞，也有耐低温的细胞。在极端情况下生长的生物对付的机制研究在和农业、环保、发酵工业中意义重大。
细胞培养⑵pH
过酸或过碱可导致细胞死亡。这主要与蛋白质的变性和细胞膜的结构受损有关。
细胞培养⑶渗透压
细胞内外可溶于水的物质比例和种类决定细胞的膨胀与收缩程度，因为细胞膜是，只允许对自己有利的物质通过。同一物质在细胞内外的分布的数量不同，当某一种极溶于水的物质在细胞外浓度过大时，有可能导致细胞干瘪死亡，这些物质在细胞内过多时导致细胞过量吸水。细胞膜调节渗透压的能力是有限的。
细胞培养⑷营养物
营养物和水一起，又叫细胞培养液，培养液中含有和生长所需要的各种物质。营养物包括：N 源、C源，这些物质与提供能量有关；无机盐、维生素、激素，这些物质与控制有关。细胞培养液的设计一直是细胞离体培养技术的关键。理想的细胞培养液可以同时解决细胞离体培养所需要的pH、渗透压、营养物、调节物质的全部需要。在干研究与应用中，关键是找到一种使分化成为所需细胞和组织的营养液。相同的人干细胞，放在不同的营养液中分化培养出人的各种脏器，这个昔日的梦想已经开始成为现实。的已经基本完善配套。名贵花卉、中草药、脱毒马铃薯、莲菜苗等植物细胞与组织培养技术的不断完善，特别是由于组织培养液的商品化已经被广大农民普遍接受。
细胞培养⑸水
水是细胞需要数量最大的物质，不同的物种、不同部位、不同生长期的细胞含水量差别相当大。干旱植物细胞的含水量高达90%。水的需求量一般随同细胞培养液一起。
细胞培养⑹无菌条件
体外细胞培养仅仅是对所需的细胞进行培养，但环境中（如空气）有各种其他，必须对所需细胞进行无杂菌的隔离培养。无菌条件是细胞离体培养最基本的条件。
细胞培养⑺光
和少数细菌需要利用光进行光合作用。
细胞培养⑻气体
动物细胞需要不断供给和排除二氧化碳，植物细胞与此相反。
二氧化碳的作用：调节pH，有缓冲作用，没有刺激呼吸的功能[2]
细胞培养培养条件
细胞培养动物细胞培养
在所有的细胞离体培养中，最困难的是。下面是它所需要的特殊条件。
⑴血清：动物细胞离体培养常常需要血清。最常用的是小牛血清。血清提供生长必需因子，如激素、微量元素、矿物质和脂肪。有一天人们真正学会了配制和血清一样的培养液，那时血清才可被取代。在这里，血清等于是动物细胞离体培养的天然营养液。
⑵支持物：大多数动物细胞有贴壁生长的习惯。离体培养常用玻璃，
高速冷冻离心机
塑料等作为支持物。
⑶气体交换：二氧化碳和氧气的比例要在细胞培养过程中不断进行调节，不断维持所需要的气体条件，每一次开箱操作后的快速恢复对设备的要求可想而知有多难？由此决定了动物细胞离体培养设备要求高、投资大。
细胞培养植物细胞培养
⑴光照：离体培养的植物细胞对光照条件不甚严格，因为细胞生长所需要的物质主要是靠培养基供给的。但光照不但与光合作用有关，而且与细胞分化有关，例如光周期可对性细胞分化和开花调控作用，所以以获得植株为目的的早期过程中，光照条件特别重要。以植物细胞离体培养方式获得重要物质，如药物的过程，植物细胞大多是在中。
⑵激素：植物细胞的分裂和生长特别需要的调节，促进生长的生长素和促进的分裂素是最基本的激素。植物细胞的分裂，生长，分化和个体生长周期都有相应的激素参与调节。和动物细胞相比，植物细胞离体培养对激素要求的原理已经了解，其应用技术也已相当成熟，已经有一套广泛作为商品使用的培养液。同时解决了植物细胞对水、营养物、激素、、酸碱度、微量元素等的需求。
细胞培养微生物细胞培养
微生物多为单细胞生物，野生生存条件比较简单。所以微生物人工培养的条件比动植物细胞简单得多。其中培养比好氧微生物复杂，因为严格厌氧需要维持二氧化碳等非氧的惰性气体浓度，而好氧微生物则只需要通过不断搅拌提供无菌氧气。微生物对培养条件要求不如动植物细胞那样苛刻，、、麦芽汁、酵母膏等成为良好的微生物。对于一些特殊微生物的营养条件要求，可以在这些天然培养基的基础上额外添加。
细胞培养注意事项
1、实验进行前，及无菌操作台（laminarflow）以照射30-60分钟灭菌，以70%乙醇擦拭无菌操作台面，并开启无菌操作台风扇运转10分钟后，才开始实验操作。每次操作只处理一株细胞株，且即使培养基相同亦不共享培养基，以避免失误混淆或细胞间污染。实验完毕后，将实验物品带出工作台，以70%ethanol擦拭无菌操作台面。操作间隔应让无菌操作台运转10分钟以上后，再进行下一个细胞株的操作。
2、无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞，必要物品，例如架、吸取器或吸管盒等可以暂时放置，其它实验用品用完即应移出，以利于气流之流通。实验用品以70%ethanol擦拭后才带入无菌操作台内。实验操作应在台面之中央无菌区域，勿在边缘之非无菌区域操作。
3、小心取用无菌之实验物品，避免造成污染。勿碰触吸管尖头部或是容器瓶口，亦不要在打开的容器正上方操作实验。容器打开后，以手夹住瓶盖并握住瓶身，倾斜约45°角取用，尽量勿将瓶盖盖口朝上放置桌面。
4、工作人员应注意自身之安全，须穿戴实验衣及手套后才进行实验。对于来自人类或是病毒感染之细胞株应特别小心操作，并选择适当等级之无菌操作台（至少ClassⅡ）。操作过程中，应避免引起aerosol之产生，小心毒性药品，例如DMSO及TPA等，并避免尖锐之伤害等。
5、定期检测下列项目：5.1CO2钢瓶之CO2压力5.2CO2培养箱之CO2浓度、温度、及水盘是否有污染（水盘的水用无菌水，每周更换）。5.3.无菌操作台内之airflow压力，定期更换紫外线灯管及HEPA，预滤网（300小时/预滤网，3000小时/HEPA）。6.水槽可添加(Zephrin1:750），定期更换水槽的水
6、粉末培养基配制好后（加了血清），一般在4度尽量不要超过1个月，如在-20度存放时间可长一些，但最好也不要超过3-4个月，可能对于永生化来说要求不是太高，细胞娇弱，放置时间不宜过长。
7、开紫外线照射台的时候，就将培养基、酶、DHANKS液那到室外让它自然升温。这样40分钟后，温度也升上来了。有很多人将其放到37度里加热。一定要注意水浴锅的卫生，有的常年不清洗，里面很脏，容易在外面瓶身上吸附大量细菌。因此用时也一定要勤换水。从水浴锅拿出后，最好找个毛巾擦干上面的水。
细胞培养意义
⒈可以进行植物体外受精及 植物发育过程研究。
⒉可以进行植物生长发育有关的重要基因或影响因素的研究。
⒊可以方便地通过实验手段培育植物新品种。
细胞培养方式
细胞培养群体培养
大量细胞置于同一培养瓶中进行贴壁或悬浮培养。
细胞培养克隆培养
挑选单个细胞或单一集落（克隆）于体外进行培养。常用于化（纯化），建立细胞株，长期。
细胞培养优点
1、能长期传代，保持活性，便于监控检测结构功能和生命活动。
2、培养条件可以人为的控制便于研究细胞代谢、物理、化学、生物的影响
3、可用于各种观察和手段研究活细胞的变化（变异、分化）。可从细胞水平开展亚和代谢分子的表达。
4、研究范围和细胞来源广泛，选择性广。
5、不同代次细胞可长期保存，既可开展同代次不同条件和方法研究，又可观察不同代次的动态变化。
6、耗资少、、成本低、可大量培养，利于生物制品的生产。
细胞培养不足
细胞或组织生长在人工环境中，与体内环境存在差异，细胞或组织的形态或功能会发生不同程度的改变。
．网易[引用日期]
．丁香通[引用日期]