食品常规理化分析
主题：【原创】测定α-淀粉酶活性的两种方法的比较研究
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发表于： 09:59:04
α-淀粉酶活性是衡量小麦穗发芽的一个生理指标，为此提出了对小麦α-淀粉酶活性的快速测定方法的研究。α-淀粉酶活性的测定方法有多种，本文仅探讨了常用的3，5-二硝基水杨酸法和凝胶扩散法。结果表明，两种方法的测定结果差异不显著，而且两者呈显著正相关；从变异系数上看，后者的变异程度较低，其精度较高；从误差来源上看，前者引起误差的因素较后者多；后者较为简便快速，准确度较高，重复性较好，可用于大批量样品的分析。关键词: 小麦, α-淀粉酶活性, 3，5-二硝基水杨酸法，凝胶扩散法1 材料和方法1.1 材料和试剂(1)萌芽的小麦：取当年小麦种子，按小麦萌发试验培养，两天后用于测验.(2)1%淀粉溶液.(3)0.4N NaOH.(4)pH5.6的柠檬酸缓冲液：A. 称取柠檬酸20.01克，溶解后稀释至1升；B.称取柠檬酸钠29.41克，溶解后稀释至1升。取A液13.7毫升与B液26.3毫升混匀，即为pH5.6的缓冲液.(5)3,5-二硝基水杨酸: 精确称取3,5-二硝基水杨酸1克溶于20毫升1N氢氧化钠中，加入50毫升蒸馏水，再加入30克酒石酸钾钠，待溶解后，用蒸馏水稀释至100毫升，盖紧瓶塞，勿使二氧化碳进入.(6)麦芽糖标准液：称取麦芽糖0.100克溶于少量蒸馏水中，仔细移入100ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度.(7)α_淀粉酶提取缓冲液:20mmol/L醋酸钠（2.7216g/L）,1mmol/L氯化钙（0.11099g/L）,pH 5.5.(8)%5（V/V）碘―碘化钾溶液：1.95gKI+0.65gI2溶解在100毫升蒸馏水中.(9)α_淀粉酶36.18u/mg (Sigma公司)：逐级稀释10, 2.5，0.625 ,0.06, 0.009765mg/mL系列标准液.(10)20%冰乙酸，琼脂糖，可溶性淀粉.1.2& 方法1.2.1& 3.5一二硝基水杨酸测定法酶液提取从五个培养皿的发芽小麦中，各随机称取1克于研钵中，加少许α_淀粉酶提取缓冲液，研磨至匀浆，倒入离心杯中，于4000rpm离心10分钟,取上清液并并定容至25ml，即为酶提取液，备用。α_淀粉酶活性测定(1)取试管，注明对照管，测定器，每样品三个重复.(2)于每试管中各加酶液1ml，加70℃恒温水浴中加热15分钟，此期间β_淀粉酶受热钝化(3)每管中各加入1毫升pH5.06的柠檬酸缓冲液.(4)对照管中加入4毫升0.4NnaOH.(5)测定管与对照管置40℃水浴中保温10分钟，再向各管加入40℃下预热的淀粉溶液2毫升摇匀，立即放入40℃水浴中准确保温5分钟取出，向各测定管迅速加入4毫升0.4N的氢氧化钠，以终止酶活动.麦芽糖测定取以上各管中酶作用后的溶液及对照管中溶液各2毫升，分别放入25毫升试管中，再加2毫升3，5-二硝基水杨酸，混匀，置水浴中5分钟，冷却后定容至25毫升，混匀，用分光光度计在520nm波长下进行比色记录消光值，取麦芽糖标准液(1ml/mg)0，0.2，0.6 ，1.0，1.4，1.8，2.0ml。按上述同样方法比色后，将测得的消光值与麦芽糖标准液进行直线回归后，代入求得样品的麦芽糖含量，并换算成每克种子α_淀粉酶的活力单位。1.2.2& 凝胶扩散测定法凝胶板制备取一长方形优质玻璃，除一宽边外，其余三边边缘各边一条透明胶片，再在上面盖一同等大小玻璃，两块玻璃两侧用夹子固定，放温箱中预热50-60℃，取三角烧杯，加30毫升α-淀粉酶提取缓冲液，0.36克琼脂糖和0.30克可溶性淀粉（作反应底物），在电炉上加热煮沸至透明后，冷却至70℃左右，将预热的玻璃胶片框架斜放在桌面上30℃，用预热的移液管吸取凝胶液，从玻璃架高一端空隙中均匀注入，直至其流遍整个胶片表面为止，不能有气泡。用量约25毫升冷却后形成凝胶板，贮存在4℃冰箱备用。α_淀粉酶活性测定取出预制冷藏的凝胶板，揭开上面一块玻璃，用塑料打孔器在凝胶板上每隔一定距离打一个1.33毫米的孔，用微量移释管向每孔内注入提取液。上述1.2.1制得的酶液于70℃水浴加热15分钟后钝化β-淀粉酶后备用。同时，在每块凝胶板孔中加入淀粉酶系列标准液（重复两次）。将凝胶板置10℃恒温箱中反应24小时后，取出，将胶板浸入I-KI溶液中染色5min,加入冰乙酸酸化终止反应。用蒸馏水淋洗3min，洗净染色液，由于加α_淀粉酶孔周围淀粉被分解，因而染色后出现未能染色的圆。未与α-淀粉酶反应的呈蓝色，用直径测量仪测圆直径。用α_淀粉酶标准液浓度对数与褪色圈直径直线回归，计算每克样品含α-淀粉酶活力单位数。2&
结果和分析2.1& 两种方法标准曲线2.1.1& 麦芽糖标准曲线麦芽糖标准液含量越高，比色后记录的OD值越大，麦芽糖标准液比色后，测得的OD值（ｘ）与麦芽糖浓度（ｙ）进行直线回归，结果为：ｙ=1.0240ｘ+0.0897，r=0.9998，相关系数极显著，表明麦芽糖标准液含量与消光值呈直线关系，通过此直线方程可进一步测得酶活性；即将各样品的消光值代入回归方程，求得样品麦芽糖含量，然后计算可得每克种子的α_淀粉酶活力。2.1.2& α-淀粉酶标准曲线α_淀粉酶标准液浓度越高，其褪色圈直径越大，5个样品的褪色圈直径也有明显差异。将α-淀粉酶标样所测得褪色圈直径（ｘ）与α-淀粉酶浓度对数（ｙ）进行直线回归。结果为：ｙ=2.4， r=0.9860，相关系数极显著，表明褪色圈直径与淀粉酶标准液的浓度对数呈直线关系，通过此直线方程可进一步测得酶活性，即将各样品的褪色圈直径代入回归方程，求得各样品的α_淀粉酶浓度，然后换算成每克种子中α_淀粉酶的活力单位。2.2& 两种方法测定结果比较对5个样品的淀粉酶活性，用两种方法测定，并记录了测定结果（表1）。表1
3，5-二硝基水杨酸法和凝胶扩散法结果 & 样品3，5-二硝基水杨酸法凝胶扩散法消光值& & &
酶活性& （u/g）直径& & & &
酶活性(cm)& & & &
（u/g）10.1010& & & & 2.191.20& & & & 4.0320.1580& & & & 6.701.35& & & & 6.7230.1460& & & & 5.241.27& & & & 5.0640.1667& & &
6.961.45& & & & 7.1450.1477& & &
5.481.28& & & & 5.86对两组样本进行t测验，测定结果为：t=1.2855, t0.05=2.0776,｜t｜&t0.05说明两种方法测得结果差异不显著，即不存在本质差异，而仅仅会由于取样误差引起较不显著差异。对两组数据进行相关性分析，即3，5一二硝基水杨酸法测得样品酶活性（ｘ）与对应凝胶扩散法测得酶活性（ｙ）进行直线回归，得ｙ=0.6216ｘ+2.4588，r=0.9391，r&r0.05,表明两种结果相关系数显著,即两种方法从其中之一测定结果可以推算出另一方法的测定结果。2.3& 两种方法的精度比较表2 两种方法变异数分析结果 方法平均数（u/g）标准差(u/g)变异系数CV(%)3，5-二硝基水杨酸法5.3140.5980.598/5.314=11.253凝胶扩散法5.7620.6100.610/5.762=10.586两种方法测得的α_淀粉酶活性的平均数，标准差，变异系数（表2），若只从标准差看，凝胶扩散法比3，5-二硝基水杨酸法变异度大；但由于平均数不同 ，就无法用标准差直接比较，只有算出变异系数后，才能看出3，5-二硝基水杨酸法变异程度大，而凝胶扩散法精度较高。& & 从误差来源分析，3，5-二硝基水杨酸法，由于其需要多步操作，且实验过程中的温度，时间，以及消光值的测定等，均容易产生的误差；凝胶扩散法中，仅在测量褪色圈直径时，也可能引起误差，但相比之下，后者误差来源较少，适合对大量样品的α_淀粉酶活性的进行快速测定。3讨论凝胶扩散法的变异程度较3，5―二硝基水杨酸低，测定结果较可靠，可用于小麦穗发芽的抗性鉴定中α_淀粉酶活性的测定，因此认为凝胶扩散法较为简便快速，准确度较高，重复性较好,可用于大批量样品的分析；而有资料认为，凝胶扩散法与3，5-二硝基水杨酸法测定α_淀粉酶活力需要经过酶提取等操作，所以种子发芽过程中α_淀粉酶很少时很难或不能检测出来。如凝胶扩散法检测不到小麦发芽第一天的α_淀粉酶活性，即使第2天检测到的α_淀粉酶活性也很低。本实验测定的是发芽第二天的小麦，测得酶活性却相对较高，因此认为此说法还有待进一步研究。吴颖等（2002年）的研究显示，凝胶扩散法测定中，标样α_淀粉酶和小麦样品的α_ 淀粉酶经此法测定后，在凝胶孔的周围均出现明显褪色圈，样品与标样褪色圈有明显不同。标样测定中只出现一个褪色彻底的白圈，而样品在测定过程中出现两个褪色圈，在其外有一个比底色稍淡的大褪色圈，色不明显，且各样品大褪色圈直径几乎相等；本文的凝胶扩散法测定过程中也出现上述类似的现象，一定程度上表明此法中这种现象是常见的。其原因可能是由于在小麦种子中存在多种淀粉酶，其中α_淀粉酶-1占总α_淀粉酶浓度的84%，α_淀粉酶-1的浓度可能造成紧靠加样孔的明显褪色，而其它α_淀粉酶由于分子量与α_淀粉酶-1不同，扩散速率不同，因其浓度低所以造成比底色略淡的褪色圈α_淀粉酶。略淡的褪色圈不能代表样品淀粉酶的大小，在测量褪色圈直径时，应先测定明显褪色圈直径，以此计算种子中α_淀粉酶浓度。后熟α_淀粉酶是籽粒在临近成熟时合成的一类α_淀粉酶同工酶，如果其含量水平较高，容易引起小麦穗发芽，于是为研究穗发芽的原因及抗性问题，许多学者展开了对后熟α_淀粉酶活性测定方法的研究，有资料显示，酶联免疫吸附测定法是鉴定后熟α_淀粉酶和测定其活性的一种较理想的方法，适合大量样品的测定；欧阳西荣等报道显示，凝胶扩散法是用于测定后熟α-淀粉酶活性，效果也较理想；3，5-二硝基水杨酸法多用于测定萌发种子的α-淀粉酶活性，其能否用于后熟α-淀粉酶活性测定未见报道，有待于研究，另外用此法测定萌发的α-淀粉酶活性与后熟α-淀粉酶活性是否存在一定的关系还需要作进一步探讨。参考文献： 肖世和.小麦穗发芽研究.中国农业科学技术出版社，何瑞锋.小麦穗发芽抗性及其鉴定方法.湖北农业科学，-6无公害农产品生产理论与检测技术.中国广播电视出版社，2004 中国食品工业标准汇编. 中国标准出版社，2003
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可以当论文去发表。
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这篇文章写的不错，就是原创性差点
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是一篇成型的论文，应该给予表扬
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国标采用哪种方法？
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楼主经常使用哪个方法检测？
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文章写得还是可以的。不过讨论是否可以加入更多自己的元素呢？
荆棘鸟fiona
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有版友举报，本作品与一篇2006年发表的论文基本一致：网上搜索贴地址：论文数据几乎完全一样，取消原创作品资格，请楼主注意哦~~
荆棘鸟fiona
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原文由 zyl3367898(zyl3367898) 发表:可以当论文去发表。 这位版主的多篇原创作品被举报为非原创了。。。。。
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原文由 荆棘鸟fiona(v2648817) 发表: 这位版主的多篇原创作品被举报为非原创了。。。。。 哎，原创，可以实验过程中的小改动，加上数据证明就应该可以了
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论文还是不错的君，已阅读到文档的结尾了呢~~
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淀粉酶活性测定
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& >&专注数码产品20年 爱国者A500评测
专注数码产品20年 爱国者智能手机A500评测yesky 13:54
1爱国者首款智能手机A500评测前言＆硬件参数
　　说起数码品牌，相信广大的网友并不会陌生。爱国者作为国产数码产品的领军企业之一，消费类产品涵盖外设、存储、数码、网络、新事业等多个领域，拥有众多出色的产品。而现在，爱国者也终于开始进军智能市场，推出首款智能手机――爱国者A500。爱国者A500搭载了5英寸大屏及高速四核处理器，以及在中国消费者中非常受欢迎的双卡双待功能。目前笔者也拿到了这款爱国者A500的标准版机型，下面就带大家来一下这款爱国者A500。
爱国者A500
分辨率(像素)
WCDMA/GSM双卡双待 支持HSPA＋
MT6589四核处理器 主频1.2GHz
操作系统版本
Android 4.2.2
1GB RAM+4GB ROM
摄像头像素
后置800万 前置200万
电池容量(mAh)
　　爱国者总裁李银修之前也曾经在微博上透露，这款四核双待的A500手机在价格方面也将会很有竞争力，所以我们可以猜测爱国者此次针对手机产品的布局，将会非常务实：一方面针对产品本身，利用在数码领域20年的深耕细作，配置、设计将非常到位，而另一方面针对市场，将采取平实的价格策略。最终爱国者A500的定价为1199元，拥有非常高的性价比。
2包装及外观：简约包装 矩形圆角设计
　　包装及外观：简约包装 矩形圆角设计
　　爱国者A500的包装比较简洁，整体大小与相差不大，这也符合时下流行的环保理念。不过小包装并没有使得配件方面有任何的缩水，、充电器等配件一应俱全。
▲配件一应俱全
　　从整体外观设计来看，爱国者A500采用了目前手机市场上比较流行的“圆角矩形”的设计，这也和手机图标的设计理念一致。手机虽然比较方正，但是对于握持来说没有任何问题。
　　手机的正面仍然采用了有实体按键的设计，按键的设计风格也与原生按键有所不同，从左往右依次是菜单键、home键以及返回键。之所以现在很多手机厂商仍然坚持使用实体按键而不是Android系统自带的虚拟按键，主要也是考虑到中国消费者实际上能接受虚拟按键的群体并不多，大家都不希望虚拟按键占用宝贵的屏幕空间。
▲正面顶部的前置及感应器
▲底部的三个实体按键
　　手机的周围边框采用了金属材质，包裹在手机前面板的四周，同时待机按键以及音量调节按键也是使用了金属材质。边框的下面就是一整块的手机背盖，标准版A500背盖没有任何附加功能，而在背壳触控版A500中，手机背壳将附带背壳触控功能，这在目前的手机领域还是一项非常超前的设计。
▲音量调节按键位于手机左侧
▲待机按键、mini USB接口以及耳机接口都位于手机顶端
　　在后盖方面我们可以到，在底部区域印有“with”的字样。那Transphone是什么呢？Transphone是一家手机厂商，之前推出的产品是手机与的套件，组合在一起可以作为平板使用，而手机也可以单独拿出来使用。此次与Transphone合作，自然也是为A500配备了一款平板基座。
▲熟悉的爱国者logo
▲与TransPhone合作推出，可变平板、笔记本
　　打开后盖我们可以看到这款爱国者A500使用了双卡双待的设计，支持 3G与 2G，支持联通HSPA+高速网络，使用标准SIM卡，为用户省去了剪卡的麻烦。在方面也是使用了符合中国用户口味的设计，可更换为2000mAh，觉得不够用的用户可以自己再购买一块电池备用。
▲可更换电池设计
▲双卡双待深受中国消费者欢迎
3屏幕显示效果：IPS屏幕效果不错
　　屏幕显示效果：IPS屏幕效果不错
　　爱国者A500搭载了一块5英寸的主屏，从大小和分辨率来说都是目前中端的主流配置。屏幕供应商为台湾友达，而友达也是的供应商。在方面，爱国者A500也使用了目前市面上主流的IPS屏幕，不仅在屏幕显示效果和颜色方面比较出色，同时还拥有很好的可视角度。
▲爱国者A500显示效果实拍
▲可视角度极佳
4系统界面：基本沿用原生Android系统配置
　　系统界面：基本沿用原生系统配置
　　爱国者A500搭载了Android..2系统，基本沿用了原生系统的各类设置，Android系统的老用户可以轻松上手。而对于第一次接触Android系统的用户来说，爱国者A500在开机时会有一个简单的教程，帮助用户轻松上手。值得一提的是，系统内部含有服务框架，可以使用一般国内所不能使用的Google play等功能。
　　另外值得一提的是，爱国者A500的mini USB接口可以支持MHL连接使用，同时也可以使用线连接、等外设产品。
5硬件配置：四核处理器性能强劲
　　硬件配置：处理器性能强劲
　　爱国者A500搭载了MT6589四核处理器，主频为1.2GHz，搭配1GB的RAM以及4GB ROM，支持SD卡扩展到32GB。MT6589四核处理器采用28nm工艺，最新超低功耗Cortex-架构，是世界第一个整合W+G/TD+G/W+TD双通功能的处理器，支持丰富多媒体功能，包括支持 30fps/30fps 低功耗视频播放与录制，13MP，高达的全高清(FHD)LCD显示屏以及数字(DTV)等级的图像处理功能。相比与之前高端使用的高通处理器来说，MT6589在性价比上更胜一筹，使得手机能以相对更低的售价来展示给消费者。
　　为了实际检验这枚处理器的性能，我们使用的量化成绩作为参考。安兔兔评测是一个给手机、进行性能评测、跑分的软件，它能一键运行完整项目，通过“性能”、“整数性能”，“CPU浮点性能”、“2D、3D绘图性能”、“数据库IO”、“SD卡读、写速度” 8项性能测试，对手机的硬件性能做一个整体评分。在这项测试中，爱国者A500得到了10703分，达到了一般四核手机的标准。
　　随后我们使用了最近登陆手机平台的系统评测软件――对手机进行一个跑分。鲁大师版是一款给安卓手机、平板进行性能评测、跑分的软件。通过八大测试，可以使用户对手机有一个更全面的了解。并且除了手机硬件性能以外，还可以对手机进行HTML5浏览器测试。最后，爱国者A500在硬件方面得分为17535分，浏览器方面得分为13513分，均处于目前手机跑分排名的中等偏上水平。
　　之后我们又使用了一款专业性能3DMark的手机版对两款手机进行了跑分。测试的项目为图形测试和硬件物理测试，共有两种测试模式：Ice Storm和Ice Storm Extreme，前者测试时播放的是的动画，而后者则是1080P的动画，并且画面的精细程度要超过前者，可以说是一款挑战CPU处理性能的极限的测试软件。在这项挑战极限的测试中，爱国者A500的分别为3137以及1559分，这个分数在目前的国产四核手机中处在一个中等的位置。
6摄像头：800万像素 搭载Ultra-photonic技术
　　： 搭载Ultra-photonic技术
　　爱国者A500搭载了800万像素摄像头，搭载了背照式CMOS传感器，搭载了Ultra-photonic技术，使聚焦效果出众并且照片有更高对比度以及更艳丽色彩。同时支持多种拍摄模式以及多种照片调节功能，光圈最大为F2.，支持最多40张连拍。在传统CMOS感光元件中，感光二极管位于电路晶体管后方，进光量会因遮挡受到影响。所谓背照式CMOS就是将它掉转方向，让光线首先进入感光二极管，从而增大感光量，显著提高低光照条件下的拍摄效果。
　　下面我们就通过样张来实际看一下爱国者A500的拍摄效果。
▲％放大效果
7爱国者A500评测总结
　　爱国者A500评测总结
　　作为进入市场上的首款手机，爱国者A500的表现中规中矩，在手机配置方面可以跟得上主流，在相比其他手机厂商的第一款手机来说，起点要高了不少。并且同时拥有背壳触控版，爱国者A500在科技含量方面提升了不仅是一个档次。加上其1199元的售价，也秉承了爱国者“让消费者能以最实惠的价格买到最实用的产品”的理念。
（作者：佚名责任编辑：江逸斐）
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测定淀粉酶活性时为何要在45摄氏度下水解淀粉
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你用的是什么淀粉酶?
用什么温度看你用什么酶
问到现在你就的回答最有水平，是测小麦里面的淀粉酶活力，有αβ淀粉酶，还有异淀粉酶
40°淀粉酶活性最大 温度到70度b淀粉酶会钝化
淀粉酶一般都含有a淀粉酶b淀粉酶
你注意看实验原理他并不是提取出a淀粉酶或者b淀粉酶 而是钝化其中一个
至于你说的45度你的实验目的有没有一个探究温度对活性的影响?
没有，只是问为何在45度下实验，难道是最适温度吗
那你就写是最适温度吧
但是温度又差了5度 应该不会那么多
难道你那个问题是好几年前的。。。。
你们老师讲了没有
答案是什么
还没呢，讲了的话我跟你说噶
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高温会使淀粉酶失活不要纠结是45度一般出题都会告诉你实验温度。楼下那位不全面酶可以是由蛋白质也可以是rRNA亲，对我的回答满意的话，就给个好评吧。如果还有不清楚的地方，可以跟我继续交流哦。那你怎么不说低温也会使酶活性失去呢，还有，α淀粉酶和β淀粉酶的最适温度都大于50摄氏度，为何要在45度下面测验呢酶的耐受温度不一样不同的酶...
一般出题都会告诉你实验温度。
楼下那位不全面
酶可以是由蛋白质也可以是rRNA
亲，对我的回答满意的话，就给个好评吧。如果还有不清楚的地方，可以跟我继续交流哦。
那你怎么不说低温也会使酶活性失去呢，还有，α淀粉酶和β淀粉酶的最适温度都大于50摄氏度，为何要在45度下面测验呢
酶的耐受温度不一样
高温会使酶变性失活
温度过高会破会酶的空间结构，使酶失去活性
44度为什么不行呢，，，，，，，，也不会失活啊
在44是淀粉酶活性最高
，，，，，，，，，，，，，，，，，，麻烦你看清楚我的问题，谢谢
高温会使酶无法发挥作用
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