smallrna 从前不知道永远是什么接头是什么怎么办

small RNA-Seq生物信息分析 -> 解决方案
smallRNA-Seq生物信息分析
基于高通量测序平台的microRNA测序技术突破了目前研究技术手段上的局限性,使研究人员能够直接对样本中指定的所有microRNA分子进行高通量测序,在无需任何序列信息的前提下研究microRNA的表达谱并在此基础上发现和鉴定新的microRNA分子,并提供了更加灵活和深入的研究分析方法。
SmallRNA预测不仅可以测得数据库中记载的miRNA的表达量,还可以通过颈环结构预测全新的miRNA,以完备miRNA的注释信息。同时分析时还可将非miRNA的序列比对到基因组上并统计它们的位置信息,以此总结不同样本中SmallRNA类型以及它们在基因组上的分布规律,为后续研究提供思路。
1. 标准信息分析
&& a)&&数据产出统计,对原始测序数据去接头,去低质量,去污染
&& b)& 18~30 nt small RNA&的长度分布
&&&c)& 样品间的公共序列和特异序列的分析
&& d)& Small RNA&在选定的参考基因组上的分布(只能选定一个参考基因组)
&& e)& Small RNA&与rRNA、tRNA、snRNA、snoRNA的比对信息
&& f)&& Small RNA&与重复序列的比对信息(需提供选定参考基因组对应的重复序列注释信息)
&& g)& Small RNA&与&exon/intron&的比对信息(需提供选定参考基因组对应的基因注释信息)
&& h)& Small RNA&与&miRBase&中指定范围的已知的&miRNA&的比对
&& i)&& 按照优先级将&small RNA&进行分类注释
&& j)&& 利用Mireap&对没有注释的small RNA&进行预测,预测新的&miRNA,绘制新的miRNA&的二级结构图
&& k)&&已知miRNA&的表达量统计
&& l)&& 已知miRNA&的家族分析(需要提供参考物种拉丁文名称)
2. 高级信息分析
&& a)& 样品间miRNA&差异分析(2个或2个以上样品)和聚类分析(3个或3个以上样品)
&& b)& MiRNA&靶基因预测(需要提供基因编码序列)
&& c)& MiRNA靶基因GO注释和KEGG通路分析
&& d)& MiRNA&的碱基编辑分析(已知miRNA)
根据客户需求,协商确定分析内容
Small RNA测序结果分析
对于得到的实验数据,我们提供专业的数据分析服务,分析包括如下分析项目:
一、基因组定位
1.Reads数目统计及频率分布图,将Reads比对到参考基因、基因组。
2.Reads在所有已知的参考基因中的位置分布情况。
3.不同长度的所有已知的miRNA基因被Reads覆盖的情况。
二、基本分析
1、测序结果分类
将分为microRNA, piRNA, tRNA, snRNA, rRNA, snoRNA 等,最后绘制饼图分布。
2、计算已知 microRNA 的表达量
&对于处理-对照实验设计采用Audic Claverie test筛选两个样本间的差异表达microRNA。
3、MicroRNA的家族、基因座分类
有一些MicroRNA在基因组中成簇(cluster)分布。这些microRNA同步转录。由于转录后成熟过程的调节各异,因此成簇的microRNA成熟体的表达量略有不同。通过对成簇microRNA的分析,可以在cluster的水平考察microRNA的差异表达情况。
4、预测新的 microRNA 基因
我们根据solexa测序得到的未知序列信息,结合基因组提供的序列上下文信息,使用miRDeep预测solexa测序得到的未知序列中可能存在的novel microRNA。
5、进化分析
跨物种比较microRNA 序列的保守性及种子序列的保守性。对于一个物种预测出来的新的microRNA,结果示例(对号表示序列完全一致,灰度升高表示保守性依次降低)。
6、 microRNA 基因簇分析
将新预测的microRNA 在基因组上定位,并寻找可能同时转录的microRNA。
&三、探索性分析
1、microRNA 编辑
microRNA 可能发生部分位置碱基的编辑,导致种子序列改变,从而导致靶基因发生改变。如:5th T-&G。位于seed序列的中间,将直接导致靶基因发生变化。
2、Viral microRNAs
solexa 结果由于测出的序列较多,带有病毒来源的microRNA,可能与病毒感染或共生有关。
3、natural antisense miRNAs
microRNA 是stem-loop 结构。其反义链也是stem-loop 结构。同样也能形成microRNA,这是一类新的microRNA。
而在solexa测序结果中也能测到anti-sense的序列。因此生物体能存在自然反义microRNA,这是一种全新的microRNA种类。
4、Endogenous siRNA
由假基因或基因组重复序列生成。
5、Si-tRNA等
其他种类small-RNA 也正在慢慢的出现。我们也有一些新的证据表明还存在一些其他的small RNA。因此欢迎一起合作和开发。如:tRNA由三叶草型二级结构变为发卡环结构,结果也可以生成microRNA:
6、SNP 分析
包括前体及成熟体中SNP 的寻找,对靶基因影响等。限于人、小鼠等有SNP 数据的生物。如: human miR-146a*的G/C SNP
由于单独的microRNA solexa数据略显单薄,我们同时也提供microRNA solexa与表达谱solexa结合分析、microRNA solexa与蛋白质谱结合分析、microRNA solexa与专业文本挖掘的结合分析、microRNA solexa与microRNA靶基因和转录因子三组分网络的构建与分析等服务。

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