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分光光度法测定脂蛋白相关磷脂酶A2活性的研究
实验背景：
心血管疾病是危害人类健康的严重疾病，它是造成死亡的主要原因之一。2007年，根据我国流行病学调查，近50年来无论在农村或城市，心脑血管疾病的发病率和死亡率均呈上升趋势。根据目前已有的流行病学资料推测，到2020年，人类疾病死因排列顺序将有重大变化，但冠心病和脑卒中仍将是人类死因的第一位和第二位。到那时，估算全球冠心病死亡人数将自1990年的630万增至1100万；脑卒中自440万增至770万。
动脉粥样硬化是心脑血管疾病的病理生理基础，防治动脉粥样硬化是目前医学领域急需解决的一个重要课题。现已证实炎症在动脉粥样硬化斑块的形成和发展中起到关键作用。氧化低密度脂蛋白是一种存在于血浆中的危险因子，能促进炎症发生，引起动脉粥样硬化。脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp—PLA2)也称血浆血小板激活因子乙酰水解酶，是介导氧化低密度脂蛋白引起炎症和动脉粥样硬化的一个关键酶。脂蛋白相关磷脂酶A2是由炎症细胞产生，水解低密度脂蛋白中的氧化修饰磷脂，主要与循环低密度脂蛋白相关。近年来的研究认为脂蛋白相关磷脂酶A2是心血管疾病独立的风险预测因子。因此检测患者血浆Lp—PLA2的活性，应用Lp—PLA2抑制剂对其活性进行调控是一种新的，潜在的，非降脂策略治疗动脉粥样硬化的发展方向。
实验目的：
作为与心血管疾病密切相关的新的炎性标志物，脂蛋白相关磷脂酶A2逐渐成为研究热点。为了进一步更加方便地研究脂蛋白相关磷脂酶A2的生理特性及其在心血管疾病中的病理生理学作用，研究开发一种能检测其活性的试剂盒已成为必要。为此，我们合成了四种含有吸光基团的脂蛋白相关磷脂酶A2底物，为开发一种经济、快速及灵敏的脂蛋白相关磷脂酶A2活性测定试剂盒(分光光度法)做铺垫。
实验方法：
在适宜反应条件下，分别以1-十四酰基—2-氢—3-磷脂酰乙醇胺(1-Myristoy1-2-hydroxy—3-phosphoethanolamine，14-PE)、1-十四酰基—2-氢—3-磷脂酰甘油(1-Myristoy1-2-hydroxy—3-phosphoglycerol，14-PG)、1-十四酰基—2-氢—3-磷酸(1-Myristoy1-2-hydroxy—3-phosphate，14-PA)和1-十四酰基—2-氢—3-磷脂酰胆碱(1-Myristoy1-2-hydroxy—3-phosphocholine，14-PC)为模板，合成1-十四酰基—2-4-对硝基苯酚丁二酸酐—3-磷脂酰乙醇胺(1-Myristoy1-2-(4-nitrophenylsuccinyl) phosphoethanolamine，14-NPE)、1-十四酰基—2-4-对硝基苯酚丁二酸酐—3-磷脂酰甘油(1-Myristoy1-2-(4-nitrophenylsuccinyl) phosphoglycerol，14-NPG)、1-十四酰基—2-4-对硝基苯酚丁二酸酐—3-磷酸(1-Myristoyl—2-(4-nitrophenylsuccinyl) phosphate，14-NPA)和1-十四酰基—2-4-对硝基苯酚丁二酸酐—3-磷脂酰胆碱(1-Myristoy1-2-(4-nitrophenylsuccinyl) phosphocho line，14-NPC)四种含有吸光基团的化合物作为Lp—PLA2活性测定试剂盒的候选底物。然后用酶对不同缓冲液下的底物进行水解，筛选出吸光度变化最灵敏的一个做为Lp—PLA2活性测定试剂盒的候选底物。
实验结果：
1.薄层色谱显示我们已成功地合成了14-NPE、14-NPG、14-NPA和14-NPC。
2.得到Lp—PLA2水解14-NPE、14-NPG、14-NPA和14-NPC的吸光度曲线图．
3.经比较，14-NPA被Lp—PLA2水解的效果好，且吸光度变化最灵敏。
1.成功合成底物；
2.sn—3不同基团对底物吸光度有不同的影响；
3.14-NPA具有成为分光光度法测定Lp—PLA2活性试剂盒底物的可能。
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万方数据电子出版社脂蛋白相关磷脂酶A2的活性及与动脉粥样硬化的关系--《中华医学会第七次全国检验医学学术会议资料汇编》2008年
脂蛋白相关磷脂酶A2的活性及与动脉粥样硬化的关系
【摘要】：最近脂蛋白相关磷脂酶A2(1ipoprotein-associated phospholipase A2,Lp-PLA2)作为新型的炎症标志物在心血管事件的独立预测中被广泛关注。Lp-PLA2又称血小板活化因子乙酰水解酶,是一种炎性细胞分泌的能促使氧化磷脂水解的磷脂酶,相对分子质量为45.4kD(441个氨基酸),编码基因位于染色体的6p21.2-p12。Lp-PLA2的基本功能是催化多种氧化磷脂Sn-2位上酯键水解,产生游离脂肪酸和溶血磷脂。此外,Lp-PLA2还能水解血小板活化因子等致炎因子。Lp-PLA2的酶活性属丝氨酸依赖性,但与其他磷脂酶不同,不需要二价阳离子如钙离子。循环中该酶活性通常据其水解血小板活化因子的能力来测定。其活性与多种因素有关,包括年龄、性别、血脂水平、人种、他汀类药物和雌激素使用以及基因多态性等。此外,也与吸烟与否、受教育时间的长短、罹患过心脏病或中风/糖尿病/高血压与否和肥胖与否等因素存在关联。Lp-PLA2主要以与脂蛋白结合的形式存在,其中约80%通过载脂蛋白B与低密度脂蛋白结合,其余的则通过其他的载脂蛋白与高密度脂蛋白以及极低密度脂蛋白结合。因此既具抗动脉粥样硬化性又具致动脉粥样硬化性。它能通过水解血小板活化因子、氧化磷脂等炎症介质来达到抗动脉硬化的作用,又能通过水解低密度脂蛋白上的氧化卵磷脂产生的溶血卵磷脂和氧化的非酯化游离脂肪酸等促炎物质起到促动脉硬化作用。流行病学研究均显示Lp-PLA2活性升高与心血管疾病独立相关,支持了LD-PLA2的促动脉粥样硬化作用。该酶的特异性抑制剂已被证实具抗动脉硬化活性。已报道的Lp-PLA2抑制剂主要有人工合成的单环β内酰胺类、嘧啶酮类及其衍生物、天然微生物来源的化合物以及最近发现的肟的衍生物类抑制剂,如SB-216477、SB- 219389、SB-21939、SB-222657、SB-43549、SB-253514和SB- 315021等。因此Lp-PLA2正被作为动脉粥样硬化治疗的一个新的靶点而受到广泛关注。
【作者单位】：
【分类号】：R543【正文快照】：
脂蛋白相关磷脂酶A2的活性及与动脉粥样硬化的关系@张春妮$南京军区南京总医院检验科!210002
@刘建辉$南京军区南京总医院检验科!210002最近脂蛋白相关磷脂酶A2(1ipoprotein-associated phospholipase A2,Lp-PLA2)作为新型的炎症标志物在心血管事件的独立预测中被广泛关
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京公网安备75号水稻磷脂酶A活性测定方法的研究--《江西农业大学学报》2011年05期
水稻磷脂酶A活性测定方法的研究
【摘要】：为了优化水稻磷脂酶A活性测定方法,研究了多种因素对水稻磷脂酶A活性的酸碱滴定测定方法的影响。结果表明水稻磷脂酶A活性酸碱滴定法测定的适宜条件为:起始pH8.0,反应温度40℃,20.0 mL底物,4.0 mL酶的粗提液,提取缓冲液的体积与叶片样品重量的比值(mL/g)为2.5,反应时间7 h。
【作者单位】：
【关键词】：
【基金】：
【分类号】：S511【正文快照】：
磷脂酶广泛参与了动、植物的信号转导过程,是由胞外信号到胞内信号过程中的关键性的调节酶。其中,磷脂酶A(Phospholipase A,PLA)在植物激素茉莉酸(Jasmonic acid,JA)生物合成前体物α-亚麻酸(Linolenic acid,LA)的形成中起重要调节作用。植物体在受到外界刺激后,PLA活性提高,
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京公网安备75号[~3H]-油酸标记的大肠杆菌底物测定血清磷脂酶A2活性的方法及评价--《陕西医学检验》2000年04期
[~3H]-油酸标记的大肠杆菌底物测定血清磷脂酶A2活性的方法及评价
【摘要】：目的 :探讨血清磷脂酶 A2 ( PLA2 )活性测定动力学特点并进行方法学评价。方法 :采用 [3 H]-油酸标记大肠杆菌膜为底物 ,观察不同条件下 PLA2的作用特点 ,选择最适反应条件 ,并进行方法学评价试验。结果 :PLA2的最适 p H为 8.0～ 8.5;当 Ca2 + ≤ 8nmol/ L时 ,PLA2活性呈 Ca2 + 浓度依赖性 ;PLA2催化水解大肠杆菌膜磷脂的反应有底物饱和性 ,其表观 Km为 6.0 μmol/ L;血清用量在 2～ 1 4μl内呈线性关系 ( r=0 .92 4 8,P0 .0 5) ;蛇毒 PL A2在 0 .5～ 1 0 ng范围内呈线性 ( r=0 .960 4 ,P0 .0 1 ) ;当血清用量为 1 0 μl,反应在 2 5min内呈线性 ( r=0 .92 99,P0 .0 0 5)。批内 CV为 6.2 % ,批间 CV为 9.3% ,回收率为 92 .6% ;轻度溶血、1 .0 6mmol/ L的 TG及 0 .1 6mmol/ L的 Triton X- 1 0 0对该法无明显干扰 ;48例健康人血清 PLA2活力的 95%可信区间为 461 .9～ 62 3.2 u/ L ( x?± t0 .0 5,v Sx?)。结论 :以 [3 H]-油酸标记的大肠杆菌膜为底物测定血清磷脂酶 A2活力是一种灵敏度极高 ,特异性较强 ,准确度满意的放射化学分析法。该法较为简单、快速、适于临床批量测定以及科学研究
【作者单位】：
【关键词】：
【正文快照】：
磷脂酶 A2 (PLA2 ,EC:3 .1 .1 .4 )是哺乳类动物体内广泛分布的一类水解酶 ,可水解甘油磷脂 Sn-2位酯键产生游离脂肪酸和溶血磷脂。由于这些水解产物既是一些致炎物质的前体 ,又是脂类第二信使 ,PLA2被认为在细胞信号传递、生物膜的稳衡过程、脂蛋白代谢、血流动力和炎症等过
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