在使用液相高效色谱时，加标回收率为什么会高于100%？ - 知乎4被浏览1010分享邀请回答21 条评论分享收藏感谢收起0添加评论分享收藏感谢收起乳制品中三聚氰胺的含量的测定(高效液相色谱法)实验报告_百度文库
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乳制品中三聚氰胺的含量的测定(高效液相色谱法)实验报告
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下载所得到的文件列表高效液相法检测复杂基质样品中的防腐剂.pdf
文档介绍：
高效液相法检测复杂基质样品中的防腐剂.PDF高效液相法检测复杂基质样品中的防腐剂李雪芳,戴绚丽杭州娃哈哈集团有限公司质量监控部,杭州310018摘要:复杂基质样品中由于干扰因素多,且干扰物质难于去除,因此很难准确测定其中防腐剂的含量。本研究采用蒸馏法,用BUCHI自动蒸馏仪在酸性条件下将防腐剂苯甲酸、山梨酸能同水蒸气一起蒸馏出来。利用高效液相色谱对收集所得蒸馏液进行测定。研究结果表明用该方法处理的食品样品净化完全,无干扰。测定结果具有良好的准确度和重现性,非常适合酱油、酱包、乳酸链球菌素等复杂基质样品中防腐剂的测定。关键词:蒸馏法;BUCHI自动蒸馏仪;防腐剂;复杂基质样品;高效液相色谱Determination of Preservatives plex Matrix Samples by High Performance Liquid Chromatography Abstract: Determination of preservatives was often very difficult plex matrix samples, for the presences of various interferents. In this study, a distilling method was proposed to co-distill benzoic acid and sorbic acid with water plex matrix samples in acidic condition by BUCHI distillation unit.. Then the distilled liquid was determined by high performance liquid chromatograph. The results showed that the samples could be purified entirely and there were no interference in the distilled liquid. The proposed method is rapid, accurate and suitable for determined preservatives plex matrix samples, such as soy sauce, seasoning bags, nisin and so on. Key words: BUCHI co high performance liquid chromatography 高效液相色谱法作为食品中防腐剂检测的标准方法,广泛地用于各种饮料,食品以及各种原辅料的质量控制中[1, 2, 3 ]。但是对于基质较为复杂的样品,如酱油、酱包、桂圆肉、乳酸链球菌素等,我们以往的预处理方法是:对于酱包/浓缩汁,用水稀释后,加热超声萃取,离心去除油层后上过滤,再进样分析。对于酱油样品,稀释过滤后直接进样分析。对于乳酸链球菌素,用水稀释,超声,离心过滤后进样分析。该预处理方法简单,但是由于样品中存在色素,蛋白质,脂肪等多种干扰物质,上述预处理方法无法将干扰物质去除干净,使得苯甲酸和山梨酸与存在的多种干扰物质在色谱柱很难分离,因此很难获得满意的检测结果。同时,大量的杂质对色谱柱会造成污染,严重影响色谱柱的性能[4, 5]。为此我们根据苯甲酸和山梨酸在酸性条件下能同水蒸气一起蒸馏出来的特点[6],采用水蒸气蒸馏法,用BUCHI自动定氮仪对样品进行预处理,探讨了不同蒸馏条件下对检测结果的影响,建立了一种对复杂基质食品中防腐剂适用的简单、快捷的前处理方法。1 实验部分1.1 试剂与仪器1.1.1 主要试剂甲醇,乙***为色谱纯乙酸铵溶液(0.02mol/L):称取1.54g乙酸铵(优级纯),加水至1000ml,溶解,经滤膜(0.45μm)过滤。苯甲酸标准工作液:将1mg/ml苯甲酸储备液稀释1000倍作为工作液。山梨酸标准工作液:将1mg/ml山梨酸储备液稀释1000倍作为工作液。1.1.2 主要仪器Wat ers高效液相色谱仪BUCHI自动蒸馏仪1.2 色谱条件色谱柱:Aglient Zorbax Eclipse XDB-C18 4.6x150流动相:乙酸铵溶液:甲醇=90:10
流速:1.0ml/min 检测器:二极管阵列检测器进样量:20μL 检测波长:苯甲酸230nm
山梨酸254nm 1.3 色谱条件准确称取10.00g均匀样品,置于蒸馏管内,加磷酸1ml,无水硫酸钠20g,水15ml,在接受瓶中加入320μL1mol/L氢氧化钠,加入少量蒸馏水。BUCHI自动蒸馏仪蒸馏强度100%蒸馏5min,收集馏出液,用水定容到200ml,馏份经0.45μm滤膜过滤后进样。1.4定量方法根据保留时间定性,外标峰面积法定量。2 结果与分析2.1不同前处理方法检测结果的比较图1(a)和1(b)为不同前处理方法对酱包样品处理后所得的色谱图。图2(a)和1(b)为不同前处理方法对乳酸链球菌素样品处理后所得的色谱图。图1(a)和图2(a)的预处理方法为我们以往使用的预处理方法。图1(b)和图2(b)的预处理方法为本文提出的水蒸气蒸馏法。从图中可以看出,用以前的超声萃取方法检测酱包中的苯甲酸时,由于其基质复杂,干扰成分较多、黏度较高,造成了进样后杂质峰过多,色谱峰分离度无法满足要求,即使用200mm色谱柱,用梯度洗脱,也无法将防腐剂与污染物质完全分离。而采用水蒸气蒸馏处理后,样品能完全被净化,基本无基质干扰,因此用150mm色谱柱,5min内就可将苯甲酸和山梨酸完全分离,因此可以满足大批量样品的快速测定。另一方面,由于蒸馏后上机测试的样品较干净,因此在实际的分析测试中,可以加大进样量,进一步降低方法的检测限。图1(a)酱包超声萃取处理后样品的色谱图图1(b)酱包水蒸气蒸馏处理后样品的色谱图图2(a)乳酸链球菌超声萃取处理后样品的色谱图图2(b)乳酸链球菌水蒸气蒸馏处理后样品的色谱图2.2前处理条件的优化2.2.1 蒸馏强度的选择蒸馏强度对苯甲酸和山梨酸的蒸发程度存在一定影响,本实验考察了不同蒸馏强度对苯甲酸和山梨酸回收率的影响,结果如表1。表1. 蒸馏强度对回收率的影响蒸馏强度(%) 80
100 苯甲酸回收率(%)63 72 85 山梨酸回收率(%)77 87 89 随着蒸馏强度的增大,苯甲酸和山梨酸的蒸出率不断增大。因此,选择选择蒸馏强度100%。2.2.2
无水硫酸钠加入量的影响加入无水硫酸钠的目的是使样品溶液的沸点升高,从而使苯甲酸和山梨酸尽可能蒸馏出来。加入不同量的无水硫酸钠做加标回收试验,结果见表2。表2. 无水硫酸钠加入量对回收率的影响无水硫酸钠加入量(g) 1 5 10 20 25 苯甲酸回收率(%1
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主题：【讨论】加标回收率到底怎么做，希望大家提点建议
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发表于： 23:32:25
加标回收率到底怎么做？添加量高中低浓度该怎么选？比如我做的标准曲线范围是从0.5，1,5,10,20,50,80,100ug/ml，相关系数都是4个9以上，但是用这个标准曲线再来验证下自己配的一系列标准样品时发现测得的值也会有高有底，那么要是想做空白样品加标回收的话，完全可以用标准样品来替代了（提取剂要和标准样溶剂相同的情况下）要是把自己配的标准样在验证一下可不可以说成是标准溶液的误差呢？或者该怎么说呢？像我这个应该怎么设添加量呢，我要把样品定容到50ml的，标准曲线测得的值都是ug/ml，那假设我要最终算得的添加量为1ug/ml，那乘以定容体积50，就是添加50ug了？具体就是我把我自己配的50ug/ml的标准样品吸取1ml与样品加在一起进行前处理，但是我要最终算得的添加量为80ug/ml，那乘以定容体积50，就是添加4000ug了，我有配的单标是2000ug/ml的，那就是添加2ml了。我这个是3中混合物质，最后加标的体积为6ml，定容体积50ml，我这样的加标体积算大吗？好困惑啊
八毛的老公
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看的我都晕了。。。。
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原文由 我是新生(hhhlll) 发表:加标回收率到底怎么做？添加量高中低浓度该怎么选？比如我做的标准曲线范围是从0.5，1,5,10,20,50,80,100ug/ml，相关系数都是4个9以上，但是用这个标准曲线再来验证下自己配的一系列标准样品时发现测得的值也会有高有底，那么要是想做空白样品加标回收的话，完全可以用标准样品来替代了（提取剂要和标准样溶剂相同的情况下）要是把自己配的标准样在验证一下可不可以说成是标准溶液的误差呢？或者该怎么说呢？像我这个应该怎么设添加量呢，我要把样品定容到50ml的，标准曲线测得的值都是ug/ml，那假设我要最终算得的添加量为1ug/ml，那乘以定容体积50，就是添加50ug了？具体就是我把我自己配的50ug/ml的标准样品吸取1ml与样品加在一起进行前处理，但是我要最终算得的添加量为80ug/ml，那乘以定容体积50，就是添加4000ug了，我有配的单标是2000ug/ml的，那就是添加2ml了。我这个是3中混合物质，最后加标的体积为6ml，定容体积50ml，我这样的加标体积算大吗？好困惑啊不知道您做的项目是什么，就一般的加标回收来说，只要让最终定容液中加标物的浓度落在标准曲线中间就可以。最初加标的浓度要根据您前处理的浓缩倍数来计算。举个例子农残检测以0.01mg/kg来算，称样10g，前处理过程无分液，定容1ml，最终定容液里的标物浓度为0.1mg/kg。如果有分液那么定容液里标准品浓度就会降低。
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/view/1918830.htm楼主可以参考下
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楼主搞的这么复杂，直接选择曲线的中间点也就是20ug/ml作为含量测定用浓度，加标回收处理方法按样品含量测定方法，高中低（120%、100%、80%）是相对于含量测定浓度20ug/ml而言的，中浓度可以直接选择为20ug/ml，高低分别为24ug/ml和16ug/ml。
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上边给的资料o力，很全面很具体
石头底下的蛐蛐
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ID：shitoudixiadequ
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加标回收和加样回收一样吗？
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谢谢大家的讨论还是有点小困惑，老感觉加标不能反映前处理的好坏，提取的机理都不一样了