荧光显微镜可以用于检测自噬检测方法么

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2017-05-15 02:10 标签： 自噬检测方法
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细胞自噬检测
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毒胡萝卜素诱导肝癌HepG2细胞凋亡与自噬及调控机制
【摘要】：目的本实验旨在探讨毒胡萝卜素(TG)对人肝癌lepG2细胞凋亡与自噬的影响及其调控机制。方法体外培养肝癌HepG2细胞,经不同浓度TG干预24 h,分别用Hochest33342染色和罗丹明123检测细胞凋亡形态和线粒体膜电位的变化。生长对数期用TG 1μmol·L~(-1)分别处理24,36,48和60 h和不同浓度TG(1,2,4和8μmol·L~(-1))处理24 h诱导HepG2细胞,流式细胞术检测TG引起的HepG2细胞凋亡的变化。Western blot检测凋亡相关蛋白胱天蛋白酶3,Bcl-2,Bax,以及线粒体通路相关蛋白胱天蛋白酶9,细胞色素c(Cyt C)和内质网通路相关蛋白胱天蛋白酶12的表达情况。体外培养肝癌细胞HepG2细胞,经不同浓度TG(1,2,4和8μmol·L~(-1))作用24 h和0.5μmol·L~(-1)的TG分别处理24,36,48和60 h后,采用MDC染色,荧光显微镜观察自噬囊泡,流式细胞术检测其荧光强度。pGFP-LC3质粒瞬时转染HepG2细胞,TG处理24 h后,荧光显微镜检测自噬。Western blot检测自噬相关蛋白LC3Ⅱ/I,Beclin1,DAPK1的表达情况。结果 TG作用24 h后,HepG2细胞呈典型的凋亡细胞形态。与空白对照组相比,线粒体膜电位显著下降,且呈浓度依赖性。TG作用HepG2细胞后,细胞凋亡率均明显升高,且在一定范围内呈浓度和时间依赖性。免疫印迹法结果显示,凋亡相关蛋白胱天蛋白酶3,胱天蛋白酶9均发生了剪切表达量下降,抑凋亡蛋白Bcl-2表达减少,促凋亡蛋白Bax和Cyt C表达增加,同时内质网应激相关蛋白胱天蛋白酶12表达量也显著上升,且在一定范围内呈浓度和时间依赖性。经不同浓度TG作用24 h和同一浓度不同时间处理的HepG2肝癌细胞在细胞质可见明显聚集的点状MDC阳性荧光颗粒,且流式细胞术结果显示,自噬发生率在一定的范围内呈时间和浓度依赖性。GFP-LC3在攻毒细胞组中出现明显点状聚集,其数量呈时间依赖性增加。免疫印迹法结果显示,LC3Ⅱ/I表达量比值呈时间、剂量依赖性增加,Be-clin1和DAPK1的蛋白表达水平随处理时间和浓度的增加,表达量也逐渐增加。结论 TG可诱导人肝癌lepG2细胞发生凋亡,其机制可能与线粒体通路和内质网应激有关。同时通过激活Beclin1引起HepG2细胞发生自噬。
【作者单位】：
【关键词】：
【分类号】：R735.7【正文快照】：
毒胡萝卜素诱导肝癌HepG2细胞凋亡与自噬及调控机制@王丛丛$中国农业大学动物医学院!北京 100193
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索拉非尼抑制肝癌细胞增殖中自噬的作用及其机制的用户评论
12345678910& 自噬增强结肠癌CD133~＋细胞对5-FU的化疗抵抗
自噬增强结肠癌CD133~＋细胞对5-FU的化疗抵抗
摘 要：目的对5-FU诱导结肠癌CD133＋细胞发生自噬的过程进行观察,初步探讨自噬对化疗的影响。方法用MTT法检测细胞增殖抑制率及IC50;用免疫磁珠分选CD133＋细胞;用透射电子显微镜（TEM）观察细胞
【题　名】自噬增强结肠癌CD133~＋细胞对5-FU的化疗抵抗
【作　者】司晓丽 刘伟 杨爱军 王晨昱 李敏
【机　构】兰州大学基础医学院病理学研究所 甘肃省新药临床前研究重点实验室 甘肃兰州730000
【刊　名】《基础医学与临床》2011年 第7期 814-819页　共6页
【关键词】自噬 5-FU 结肠癌 CD133 磁珠细胞分选技术
【文　摘】目的对5-FU诱导结肠癌CD133＋细胞发生自噬的过程进行观察,初步探讨自噬对化疗的影响。方法用MTT法检测细胞增殖抑制率及IC50;用免疫磁珠分选CD133＋细胞;用透射电子显微镜（TEM）观察细胞的超微结构,用MDC染色,荧光显微镜观察自噬囊泡;联合应用细胞活性实验、集落形成实验研究自噬对化疗的影响。结果不同浓度5-FU处理后,人结肠癌SW480细胞活性明显受到抑制,其半数抑制浓度IC50为（1.09±0.18）μg/mL。CD133＋胞质出现大量的自噬体及自噬囊泡;相比较单独给予5-FU,联合给予5-FU及3-MA,CD133＋细胞活性由（81.8±4.6）%下降到（56.3±5.5）%（P〈0.05）,集落形成率由（81.1±3.4）%下降（64.4±4.8）%（P〈0.05）。结论 5-FU可诱导结肠癌CD133＋细胞发生自噬;自噬的抑制能够增强5-FU对结肠癌CD133＋细胞的细胞毒效应。
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自噬,5-FU,结肠癌,CD133,磁珠细胞分选技术
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