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【理论探讨】请教有关caspase3和凋亡的问题
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这个帖子发布于3年零360天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
我是菜鸟一枚，想请教各位老师有关caspase3的问题：我做的课题总体思路是这样的:A药干预后，TUNEL染色发现小鼠脑组织（皮层）凋亡减轻，于是做了关于凋亡的指标--Bax,Bcl2,caspase3，PCR和western blot结果都显示Bax,caspase3下调，Bcl2上调。问题1：我做的是总的caspase3而不是cleaved caspase3(激活型caspase3)可不可以，是不是现在国际上做凋亡都认可cleaved caspase3？问题2：我的实验发现caspase3下调，那么按理论来说cleaved caspase3的趋势是怎样的？我现在不明白cleaved caspase3与caspase3的关系，比如在细胞受损伤后（如缺血），出现了大量细胞凋亡，caspase3表达增加，那么实验所检测到的caspase3都是激活型的caspase3吗？会不会是caspase3里面有一部分是激活型的caspase3，有一部分是无活性的caspase3呢？问题3：假如只做Bax,Bcl2这2个指标，删掉caspase3，对凋亡的说服力足够吗？请各位指点，非常感谢！
不知道邀请谁？试试他们
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bcl2 bax是上游信号 调控线粒体的通透位点改变来调控细胞色素c的释放，线粒体细胞色素C的释放是通过通透性转变气孔（PTP），而Bcl-2家族蛋白直接调节PTP。Bax是前凋亡蛋白，通过影响PTP而消除了线粒体的膜电位，促进细胞色素C的释放。caspase3是执行功能者。Bcl-2和Bax是上游信号，如果它发生变化，也是间接说明问题，即可能会发生凋忘，也有可能信号在下传的过程中被抑制住了，没有发生凋亡。caspase3的检测更能说明问题
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总的caspase-3就是全长 是没有活性的cleaved casp3才是有活性的作为apoptosis指标
当然是cleaved才是指标总cap3再怎么变 没有cleaved-casp3变化 一点意义都没有
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最近要做组织凋亡，受教了
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&活化形式的蛋白凋亡MARKER
如 caspase-3 parp 如何办
活化形式的蛋白凋亡MARKER
如 caspase-3 parp 如何办
作者 2008liulin
如题，其实这个问题已经看过很多解释了，但是现在又面临这个问题，实在不知如何解决为好。
我买的是CST的抗体，PARP CASPASE-3 这两个抗体都是技能显示出总蛋白也能显示出活化形式的蛋白，所以我在PAPER 中显示时所有的FIGURES 中都包含了两个带，活化形式和未活化形式。问题是：
review 说我的凋亡显影不明显（几乎所有），事实上我觉得是明显的，另外一个review 也没有提到这个问题。所以我怀疑这个人是不是只看未活化形式，没有看到剪切形式。（有些条带未活化形式是没有什么改变的，但是活化形式很明显）。现在我想把FIGURE 中所有的未活化形式都去除，只保留活化形式，不知道可以不可以？有师兄说，这样子会让审稿人觉得不好，不赞成这种做法。所以，纠结了，也不想好心改过去结果 被人家误解，直接被拒，现在是大修。主要问题也是处在这个审稿人身上，另外一个问题很少。 所以，怎么办？急求大神！
个人感觉润色或翻译还是很有必要的，不仅学习到很多方法，还可以很大提高发表的成功率。
同事推荐让我去润色的，都是外国人润色的，可以提供润色证明,没有语言问题。润色4篇了，已经发表3篇
国内外期刊都推荐去 润色，他们好像跟plos,bmc等都有合作。
拿去不谢！
关于论文小修，个人感受如下，供大家参考~1、 对于审稿人的建议一定要礼貌地回答；2、不要利用不同审稿人之间的不同意见相互辩驳；3、回答不利的意见，一定要有分度，不能有较真和抵触的想法；4、无论如何都需要对编辑和审稿人致谢。最近一篇文章由小木虫推荐的专业君论文润色了，投稿很顺利，大家可以试试。
是不是你的图上标记的不清楚人没注意到？
1.你现在样品还有，需要重复的实验量不多，可以买个Cleaved Caspase 3抗体重复你的实验，再用个别的方法检测凋亡
2.没法重复试验，选一张和原来文章里面不同的图，只显示活化蛋白，把标记做好，在信里解释清楚，被拒了就果断换杂志
个人觉得找是不错的，回递速度很快，专业的编辑提供及时答疑。编辑对我的手稿做的修改，我很满意。根据目标期刊对我的文章做的格式调整也十分令人满意。我选择的是高级编辑服务，其附赠的免费说明信服务和免费编辑报告对我的帮助很大。所以前些日子我推荐我同学使用专业君论文的翻译润色服务
引用回帖:: Originally posted by ccharlien at
是不是你的图上标记的不清楚人没注意到？
1.你现在样品还有，需要重复的实验量不多，可以买个Cleaved Caspase 3抗体重复你的实验，再用个别的方法检测凋亡
2.没法重复试验，选一张和原来文章里面不同的图，只 ... 我太感谢你了！我的意思也是 我就把原来形式的给切了， 然后只放活化形式，并且在条带下面LABLE，让他能看清楚一下。怕就怕他把我拒了，我六月毕业，来不及了，怕有万一就麻烦了。~~~愁死了~~~ 我再补图，怕那个人还说不清楚，那我就比较郁闷了~~~愁死了，
引用回帖:: Originally posted by 2008liulin at
我太感谢你了！我的意思也是 我就把原来形式的给切了， 然后只放活化形式，并且在条带下面LABLE，让他能看清楚一下。怕就怕他把我拒了，我六月毕业，来不及了，怕有万一就麻烦了。~~~愁死了~~~ 我再补图，怕那个人 ... 不客气哈，一般用两个不同方法检测凋亡就没什么问题了
最好有和之前稿子里差不多质量的不一样的图，省得人看到后觉得你没改找茬，不过要是没有也就算了
把reviewer提到的其他问题都搞定了尽快重新提交，祝好运！
楼主你好！我也在做这两个蛋白，用的抗体和你一样，可是我的切割形式总是不出现，或者是说和我药物浓度不成规律。我想问下你，药物作用细胞的时间点和出现切割条带之间有关系吗？而且对于Caspase-3 (35KD和17KD)和PRAP(116和85)，是在一样的实验条件下，同一张膜上做出来的吗？还是把总蛋白和切割形式的在胶上切开，分别转膜哦？我做这两个蛋白老是做不好，觉得很郁闷，你能不能告诉我一些你的经验哦？
引用回帖:: Originally posted by 乖乖宝贝 at
楼主你好！我也在做这两个蛋白，用的抗体和你一样，可是我的切割形式总是不出现，或者是说和我药物浓度不成规律。我想问下你，药物作用细胞的时间点和出现切割条带之间有关系吗？而且对于Caspase-3 (35KD和17KD)和P ... 你好！1、没有活化形式的带你就找个阳性对照，一定有凋亡的，看看来验证你的样品问题还是抗体问题 2、是在一张膜上做出来的，转完膜箭膜就是了。
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molecular&cell：细胞凋亡关键分子caspase-3&促进癌症发生
日 讯 /BIOON/ --细胞凋亡是多细胞生物细胞死亡的经典途径之一。在早期发育时期，细胞凋亡可以清除那些衰老的，或收到损伤的细胞群体，在后期细胞凋亡可以维持机体的稳态平衡。通常认为细胞凋亡是一类抗癌症的生物过程，因为它会将DNA受损的细胞及时清除。（我们都知道DNA受到损伤是细胞癌变的关键步骤）然而越来越多的证据表明细胞凋亡与癌症发生之间的关系并没有那么简单。一些研究表明细胞凋亡中的关键蛋白能够促进癌症的发生。比如一类叫做Fas的死亡受体，小鼠敲除实验证明缺失了Fas的小鼠其癌化效率变慢了。另外一项研究发现在头颈癌以及患者中caspase-3的表达量异常的高，而内在的原因未知。
最近，来自美国杜克大学医学中心皮肤病科的Chuan-Yuan Li课题组在《mocelular cell》发表了他们对于caspase-3在癌变过程中的作用机制的研究。
首先，作者使用caspase-3 EGFP报告基因转入人源乳腺表皮细胞MCF10A中。之后通过高强度的辐射使这些细胞DNA受损。结果显示，在照射过后的细胞中出现了高强度的GFP表达，标志着caspase-3的表达。之后，作者通过流式分选的方法将细胞爱找GFP表达强度的不同分为高表达组与低表达组。结果显示，在高表达组中，尽管caspase-3的切割以及细胞色素C的释放是非常强的效应，但这部分细胞却并没有出现任何凋亡的表型。这一结果与我们一贯的认识不同。进一步的辐射与流式分析，作者发现根据辐照强度的不断升高，细胞的caspase-表达量也不断上升。以上这些结果说明非致死性的辐照能够引起caspase-3的表达。
以上这一实验结果让作者们不禁要问：究竟辐照后的细胞基因组出现了怎样的变化使得这些细胞对于caspase-3的致死效应不再敏感？作者因此检测了辐照后细胞的基因组变化。结果显示，辐照造成了明显的基因双链断裂（DSB）现象，这这一效应的强度与caspase-3的表达量存在明显的相关性。如果认为将caspase-3的表达量降低后，将会抑制DSB的强度。后续的实验证明了即使在没有凋亡信号存在下，依靠caspase-3的活化也能造成DSB的发生。这些结果共同说明了caspase-3在辐照引起的双链断裂效应中的作用。另外，作者还使用了染色体偏差实验证明了caspase-3介导辐照引起的染色体偏差的效应。
之后，作者利用体外的肿瘤生成模型检测了casapse-3对癌症发生的作用。他们将接受辐照并且流式筛选过的不同强度的MCF10A细胞在软胶上自由生长。结果显示：具有高caspase-3的表达量的细胞群落形成速率要高于低表达量细胞群。后续的实验进一步验证了这一结果。此外，作者将野生型与caspase-3敲低型的MCF10A细胞植入裸鼠体内，结果显示野生型细胞形成肿瘤的概率为60%（6/10），而敲低组中没有一例形成的例子。
由于endo G是caspase-3介导的凋亡信号的关键下游分子。在静息状态下，Endo G停留在线粒体中，而在caspase-3活化后，Endo G进入细胞核执行DNA切割的作用。实验显示，在没有经过辐射时，endo G确实停留在线粒体周围，当收到辐照后，endoG进入细胞核中。而如果认为干涉caspase-3的表达量或活性，将会抑制endoG的入核。后续的shRNA实验证明了endoG对于DSB的重要作用。因此，作者认为endoG可能是caspase-3在发生过程中的重要下游效应分子。（生物谷Bioon.com）
本文系生物谷原创编译整理。欢迎转载！转载请注明来源并附原文链接。更多资讯请下载。
Caspase-3 Promotes Genetic Instability and Carcinogenesis
Xinjian Liu, Yujun He, Fang Li, Qian Huang, Takamitsu A. Kato, Russell P. Hall, and Chuan-Yuan Li
Apoptosis is typically considered an anti-oncogenic process since caspase activation can promote the elimination of genetically unstable or damaged cells. We report that a central effector of apoptosis, caspase-3, facilitates rather than suppresses chemical- and radiation-induced genetic instability and carcinogenesis. We found that a significant fraction of mammalian cells treated with ionizing radiation can survive despite caspase-3 activation. Moreover, this sublethal activation of caspase-3 promoted persistent DNA damage and oncogenic transformation. In addition, chemically induced skin carcinogenesis was significantly reduced in mice genetically deficient in caspase-3. Furthermore, attenuation of EndoG activity significantly reduced radiationinducedDNAdamage
and oncogenic transformation, identifying EndoG as a downstream effector of caspase-3 in this pathway. Our findings suggest that rather than acting as a broad inhibitor of carcinogenesis, caspase-3 activation may contribute to genome instability and play a pivotal role in tumor formation following damage.
关键词：caspase-3,细胞凋亡,癌症
信息来源:生物谷
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关注转化医学的新鲜资讯。需更多信息，也请加入列表。Caspase-3与生精细胞凋亡关系的研究
[目的]探讨Caspase-3与男性原发不育患者睾丸生精细胞凋亡的关系.[方法]采用TUNEL及免疫组化技校.观察168例男性原发不育患者的睾丸组织中生殖细胞凋亡指数和Caspase-3蛋白表达的阳性率.[结果]与正常睾丸生精细胞对比,男性原发不育患者生精细胞凋亡指数明显升高(P＜0.05).不育组Caspase-3蛋白的阳性率为(14.13±1.94)%,正常组为(2.41±0.98)%,二者比较差异有统计学意义(P＜0.01).[结论]生精细胞的凋亡相关基因Caspase-3过高表达与男性原发不育密切相关.
作者单位：
河北华北煤炭医学院病理学教研室,唐山,063000
华北煤炭医学院基础部中心实验室
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10.3969/j.issn.07.02.009
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