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【原创】关于THP-1细胞及其诱导为巨噬细胞&[精华]
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丁香园版主
你的一颦一笑 杨阳hysno1 师姐，又来打扰你了，还有问题没搞懂，我用PMA诱导48h，还没诱导过72h,问题1:24h培养基变黄了后要换含PMA的培养液吗？还是不换液？培养基变黄之后可以换液，不需要再加PMA，完全培养基即可。还有，如果诱导72h,细胞能撑住吗？可以。问题2:THP细胞在诱导成巨噬细胞的过程中还会增值吗？我用的无血清的，有BSA。不会。问题3:我把细胞诱导成巨噬细胞后，再加ox-LDL诱导成泡沫细胞，不知师姐做过没
是的，我做过。师姐，问题1:我没加血清PMA诱导三天，细胞也能撑住？可是我感觉48h后还没贴壁的细胞状态不怎么好了，有的像里面是有空泡，我用的BSA,是不是不加血清营养不够啊?问题2:那所说的诱导24h 或48h或72h难道不是一直用含PMA的培养液吗？师姐，你说的是变黄之后就换不含PMA的培养液，关键是诱导时间还没够吧？这点很疑惑。问题3:你是诱导后换正常培养基然后再加含ox-LDL的培养液吗？我做的时候是弃去诱导液后就加oxLDL。问题4:我的完全培养基是基础培养基加了hepes，碳酸氢钠和丙酮酸钠，还有fbs,双抗，我诱导时候是基础培养基没加hepes,碳酸氢钠和丙酮酸钠，然后加了BSA,双抗，PMA，诱导没加hepes，碳酸氢钠和丙酮酸钠对细胞会不会有影响？问题5:一个比较愚钝的问题，PMA分装成10ul/管，是不是每一小管都得用封口膜封住？我嫌麻烦，就没封。太麻烦师姐了，谢谢你啊问题1:我没加血清PMA诱导三天，细胞也能撑住？可是我感觉48h后还没贴壁的细胞状态不怎么好了，有的像里面是有空泡，我用的BSA,是不是不加血清营养不够啊?建议使用血清。bsa记得滤过，滤过有可能有损失。问题2:那所说的诱导24h 或48h或72h难道不是一直用含PMA的培养液吗？师姐，你说的是变黄之后就换不含PMA的培养液，关键是诱导时间还没够吧？这点很疑惑。诱导一定时间即可，后续不需要再加。问题3:你是诱导后换正常培养基然后再加含ox-LDL的培养液吗？我做的时候是弃去诱导液后就加oxLDL。对。问题4:我的完全培养基是基础培养基加了hepes，碳酸氢钠和丙酮酸钠，还有fbs,双抗，我诱导时候是基础培养基没加hepes,碳酸氢钠和丙酮酸钠，然后加了BSA,双抗，PMA，诱导没加hepes，碳酸氢钠和丙酮酸钠对细胞会不会有影响？不会有什么影响。问题5:一个比较愚钝的问题，PMA分装成10ul/管，是不是每一小管都得用封口膜封住？我嫌麻烦，就没封。太麻烦师姐了，谢谢你啊我都是会封好的。我也见过没封的人。我个人觉得无菌原则最好封口。
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杨阳hysno1 你的一颦一笑 杨阳hysno1 师姐，又来打扰你了，还有问题没搞懂，我用PMA诱导48h，还没诱导过72h,问题1:24h培养基变黄了后要换含PMA的培养液吗？还是不换液？培养基变黄之后可以换液，不需要再加PMA，完全培养基即可。还有，如果诱导72h,细胞能撑住吗？可以。问题2:THP细胞在诱导成巨噬细胞的过程中还会增值吗？我用的无血清的，有BSA。不会。问题3:我把细胞诱导成巨噬细胞后，再加ox-LDL诱导成泡沫细胞，不知师姐做过没
是的，我做过。师姐，问题1:我没加血清PMA诱导三天，细胞也能撑住？可是我感觉48h后还没贴壁的细胞状态不怎么好了，有的像里面是有空泡，我用的BSA,是不是不加血清营养不够啊?问题2:那所说的诱导24h 或48h或72h难道不是一直用含PMA的培养液吗？师姐，你说的是变黄之后就换不含PMA的培养液，关键是诱导时间还没够吧？这点很疑惑。问题3:你是诱导后换正常培养基然后再加含ox-LDL的培养液吗？我做的时候是弃去诱导液后就加oxLDL。问题4:我的完全培养基是基础培养基加了hepes，碳酸氢钠和丙酮酸钠，还有fbs,双抗，我诱导时候是基础培养基没加hepes,碳酸氢钠和丙酮酸钠，然后加了BSA,双抗，PMA，诱导没加hepes，碳酸氢钠和丙酮酸钠对细胞会不会有影响？问题5:一个比较愚钝的问题，PMA分装成10ul/管，是不是每一小管都得用封口膜封住？我嫌麻烦，就没封。太麻烦师姐了，谢谢你啊问题1:我没加血清PMA诱导三天，细胞也能撑住？可是我感觉48h后还没贴壁的细胞状态不怎么好了，有的像里面是有空泡，我用的BSA,是不是不加血清营养不够啊?建议使用血清。bsa记得滤过，滤过有可能有损失。问题2:那所说的诱导24h 或48h或72h难道不是一直用含PMA的培养液吗？师姐，你说的是变黄之后就换不含PMA的培养液，关键是诱导时间还没够吧？这点很疑惑。诱导一定时间即可，后续不需要再加。问题3:你是诱导后换正常培养基然后再加含ox-LDL的培养液吗？我做的时候是弃去诱导液后就加oxLDL。对。问题4:我的完全培养基是基础培养基加了hepes，碳酸氢钠和丙酮酸钠，还有fbs,双抗，我诱导时候是基础培养基没加hepes,碳酸氢钠和丙酮酸钠，然后加了BSA,双抗，PMA，诱导没加hepes，碳酸氢钠和丙酮酸钠对细胞会不会有影响？不会有什么影响。问题5:一个比较愚钝的问题，PMA分装成10ul/管，是不是每一小管都得用封口膜封住？我嫌麻烦，就没封。太麻烦师姐了，谢谢你啊我都是会封好的。我也见过没封的人。我个人觉得无菌原则最好封口。师姐，那加血清诱导的话，也加BSA吗？为什么好多文献是无血清诱导呢？
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你的一颦一笑 杨阳hysno1 你的一颦一笑 杨阳hysno1 师姐，又来打扰你了，还有问题没搞懂，我用PMA诱导48h，还没诱导过72h,问题1:24h培养基变黄了后要换含PMA的培养液吗？还是不换液？培养基变黄之后可以换液，不需要再加PMA，完全培养基即可。还有，如果诱导72h,细胞能撑住吗？可以。问题2:THP细胞在诱导成巨噬细胞的过程中还会增值吗？我用的无血清的，有BSA。不会。问题3:我把细胞诱导成巨噬细胞后，再加ox-LDL诱导成泡沫细胞，不知师姐做过没
是的，我做过。师姐，问题1:我没加血清PMA诱导三天，细胞也能撑住？可是我感觉48h后还没贴壁的细胞状态不怎么好了，有的像里面是有空泡，我用的BSA,是不是不加血清营养不够啊?问题2:那所说的诱导24h 或48h或72h难道不是一直用含PMA的培养液吗？师姐，你说的是变黄之后就换不含PMA的培养液，关键是诱导时间还没够吧？这点很疑惑。问题3:你是诱导后换正常培养基然后再加含ox-LDL的培养液吗？我做的时候是弃去诱导液后就加oxLDL。问题4:我的完全培养基是基础培养基加了hepes，碳酸氢钠和丙酮酸钠，还有fbs,双抗，我诱导时候是基础培养基没加hepes,碳酸氢钠和丙酮酸钠，然后加了BSA,双抗，PMA，诱导没加hepes，碳酸氢钠和丙酮酸钠对细胞会不会有影响？问题5:一个比较愚钝的问题，PMA分装成10ul/管，是不是每一小管都得用封口膜封住？我嫌麻烦，就没封。太麻烦师姐了，谢谢你啊问题1:我没加血清PMA诱导三天，细胞也能撑住？可是我感觉48h后还没贴壁的细胞状态不怎么好了，有的像里面是有空泡，我用的BSA,是不是不加血清营养不够啊?建议使用血清。bsa记得滤过，滤过有可能有损失。问题2:那所说的诱导24h 或48h或72h难道不是一直用含PMA的培养液吗？师姐，你说的是变黄之后就换不含PMA的培养液，关键是诱导时间还没够吧？这点很疑惑。诱导一定时间即可，后续不需要再加。问题3:你是诱导后换正常培养基然后再加含ox-LDL的培养液吗？我做的时候是弃去诱导液后就加oxLDL。对。问题4:我的完全培养基是基础培养基加了hepes，碳酸氢钠和丙酮酸钠，还有fbs,双抗，我诱导时候是基础培养基没加hepes,碳酸氢钠和丙酮酸钠，然后加了BSA,双抗，PMA，诱导没加hepes，碳酸氢钠和丙酮酸钠对细胞会不会有影响？不会有什么影响。问题5:一个比较愚钝的问题，PMA分装成10ul/管，是不是每一小管都得用封口膜封住？我嫌麻烦，就没封。太麻烦师姐了，谢谢你啊我都是会封好的。我也见过没封的人。我个人觉得无菌原则最好封口。师姐，那加血清诱导的话，也加BSA吗？为什么好多文献是无血清诱导呢？加血清就不加bsa了。加脂蛋白可以不加血清。
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杨阳hysno1 vx969cool 你好，我用的PMA是1ng/ML, 10^6THP-1细胞,前面2张图；
PMA是6ng/ML, 10^6THP-1细胞,后面2张图；培养24h后都贴壁了，72h后感觉2种PMA浓度诱导的细胞有伸出伪足的量不多，想麻烦师姐看看哪种浓度算是诱导细胞分化比较成功呢？大概有多少细胞分化了（比例是？）我画圈的地方是没有诱导成功吗（细胞还是圆形的）？没关系的。建议你可以做个流式看看。不过我觉得没问题。诱导成功师姐，谢谢你的建议，我还要将巨噬细胞诱导为M2型巨噬细胞，但是这个THP-1来源的巨噬细胞过了5天就很多颗粒了，似乎状态不好，我可以在加PMA后24h就加IL4及IL13诱导吗？这个时候细胞状态似乎更好。谢谢你。
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vx969cool 杨阳hysno1 vx969cool 你好，我用的PMA是1ng/ML, 10^6THP-1细胞,前面2张图；
PMA是6ng/ML, 10^6THP-1细胞,后面2张图；培养24h后都贴壁了，72h后感觉2种PMA浓度诱导的细胞有伸出伪足的量不多，想麻烦师姐看看哪种浓度算是诱导细胞分化比较成功呢？大概有多少细胞分化了（比例是？）我画圈的地方是没有诱导成功吗（细胞还是圆形的）？没关系的。建议你可以做个流式看看。不过我觉得没问题。诱导成功师姐，谢谢你的建议，我还要将巨噬细胞诱导为M2型巨噬细胞，但是这个THP-1来源的巨噬细胞过了5天就很多颗粒了，似乎状态不好，我可以在加PMA后24h就加IL4及IL13诱导吗？这个时候细胞状态似乎更好。谢谢你。建议摸索时间，36小时-48小时为宜。
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xrz287 杨阳hysno1 最近回答了园子里的战友一些关于THP-1细胞系及其诱导为巨噬细胞的问题，现在说明如下：A.
人THP-1巨噬细胞的培养 人THP-1单核细胞用含有10% 热灭活胎牛血清和10U/mL青霉素、10μg/mL链霉素的RPMI1640培养液，在 37℃、5%CO2培养箱中静置培养，维持细胞数1×108/培养瓶左右。将传代培养的THP-1细胞稀释成1×106/ml，接种于35 mm培养皿中，于含100 ng/ml佛波酯（PMA）、0.3% BSA的无血清RPMI1640培养液中培养72h诱导分化。 通过光镜进行形态学观察，鉴定细胞是否分化为巨噬细胞。附我之前诱导诱导巨噬细胞图片如下：附一张我闲来无事合成的JC-1图片（纯属娱乐）：B.注意事项：1，个人觉得THP-1细胞的状态非常重要，镜下观察细胞形态均一圆形，折光度良好，无颗粒，成对数期生长。换液时间不固定，应根据细胞状态及培养基颜色决定，不可勤换也不可不换。2.PMA我买的是SIGMA公司的，购买后记得离心后进行稀释，分装于200微升或1.5毫升EP管，每管十微升，封口膜封口，保存于负四十度冰箱。3.大家不懂的讨论吧，我个人还是觉得要把THP-1养好。老师您好 我用100ng/ml PMA诱导THP1细胞分化时细胞还是圆的,而且聚团现象很严重,我是在6孔板里诱导的,细胞密度1x10^5/孔 5x10^5/孔 1x10^6/孔都试过了 PMA也换新的了.培养基用的是10%FBS的1640,不知道是哪里出问题了,您能帮我分析一下吗?谢谢了!你好，你的问题解决了吗？我也在做这个，也是THP-1诱导贴壁不成功，想向你请教下
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遇到猫主人 师姐好，请看下我诱导的巨噬细胞，50ng/ml pma刺激48h，六空板铺板密度10*6/ml,图片是40倍显微镜，感觉抱团挺严重的，伸出的伪足也不多，，这是100ng/ml 的PMA刺激的，细胞抱团也很严重，，接下来要转染质粒到巨噬细胞内，不知我的细胞能否使用？你好，THP-1细胞接种到六孔板密度为2乘以10的五次方/ml,每孔2ml,PMA浓度160,200,400ng/ml,含PMA、0.3％BSA的无血清培养基培养，但都不见细胞贴壁，贴的特别少，这是哪里有问题？
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杨阳hysno1 vx969cool 杨阳hysno1 vx969cool 你好，我用的PMA是1ng/ML, 10^6THP-1细胞,前面2张图；
PMA是6ng/ML, 10^6THP-1细胞,后面2张图；培养24h后都贴壁了，72h后感觉2种PMA浓度诱导的细胞有伸出伪足的量不多，想麻烦师姐看看哪种浓度算是诱导细胞分化比较成功呢？大概有多少细胞分化了（比例是？）我画圈的地方是没有诱导成功吗（细胞还是圆形的）？没关系的。建议你可以做个流式看看。不过我觉得没问题。诱导成功师姐，谢谢你的建议，我还要将巨噬细胞诱导为M2型巨噬细胞，但是这个THP-1来源的巨噬细胞过了5天就很多颗粒了，似乎状态不好，我可以在加PMA后24h就加IL4及IL13诱导吗？这个时候细胞状态似乎更好。谢谢你。建议摸索时间，36小时-48小时为宜。师姐，我又来了，我用无血清诱导一直细胞不怎么贴壁，用10%血清诱导有贴壁的，但是不多，贴壁的细胞成梭形，或圆形细胞抱团也严重，PMA为100ng/ml,诱导之后用ox-LDL诱导成泡沫细胞，再染色，染色之后发现梭形的细胞不怎么变红色，圆形的红色还可以。问题1:你用的是10％血清吗？用10％血清诱导72h还是48h比较好？问题2:我是把THP-1细胞诱导成巨噬细胞，然后再用ox-LDL把巨噬细胞诱导成泡沫细胞，用泡沫细胞做实验，测胆固醇，还有其他的一些mRNA表达什么的，用血清诱导会对实验有影响吗？我看的文献是用无血清诱导的，但是我用无血清诱导不能贴壁。麻烦师姐啦
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杨阳hysno1 vx969cool 杨阳hysno1 vx969cool 你好，我用的PMA是1ng/ML, 10^6THP-1细胞,前面2张图；
PMA是6ng/ML, 10^6THP-1细胞,后面2张图；培养24h后都贴壁了，72h后感觉2种PMA浓度诱导的细胞有伸出伪足的量不多，想麻烦师姐看看哪种浓度算是诱导细胞分化比较成功呢？大概有多少细胞分化了（比例是？）我画圈的地方是没有诱导成功吗（细胞还是圆形的）？没关系的。建议你可以做个流式看看。不过我觉得没问题。诱导成功师姐，谢谢你的建议，我还要将巨噬细胞诱导为M2型巨噬细胞，但是这个THP-1来源的巨噬细胞过了5天就很多颗粒了，似乎状态不好，我可以在加PMA后24h就加IL4及IL13诱导吗？这个时候细胞状态似乎更好。谢谢你。建议摸索时间，36小时-48小时为宜。还有怎么解决用血清诱导，细胞抱团严重的问题？抱团不利于贴壁啊
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你的一颦一笑 杨阳hysno1 vx969cool 杨阳hysno1 vx969cool 你好，我用的PMA是1ng/ML, 10^6THP-1细胞,前面2张图；
PMA是6ng/ML, 10^6THP-1细胞,后面2张图；培养24h后都贴壁了，72h后感觉2种PMA浓度诱导的细胞有伸出伪足的量不多，想麻烦师姐看看哪种浓度算是诱导细胞分化比较成功呢？大概有多少细胞分化了（比例是？）我画圈的地方是没有诱导成功吗（细胞还是圆形的）？没关系的。建议你可以做个流式看看。不过我觉得没问题。诱导成功师姐，谢谢你的建议，我还要将巨噬细胞诱导为M2型巨噬细胞，但是这个THP-1来源的巨噬细胞过了5天就很多颗粒了，似乎状态不好，我可以在加PMA后24h就加IL4及IL13诱导吗？这个时候细胞状态似乎更好。谢谢你。建议摸索时间，36小时-48小时为宜。师姐，我又来了，我用无血清诱导一直细胞不怎么贴壁，用10%血清诱导有贴壁的，但是不多，贴壁的细胞成梭形，或圆形细胞抱团也严重，PMA为100ng/ml,诱导之后用ox-LDL诱导成泡沫细胞，再染色，染色之后发现梭形的细胞不怎么变红色，圆形的红色还可以。问题1:你用的是10％血清吗？用10％血清诱导72h还是48h比较好？问题2:我是把THP-1细胞诱导成巨噬细胞，然后再用ox-LDL把巨噬细胞诱导成泡沫细胞，用泡沫细胞做实验，测胆固醇，还有其他的一些mRNA表达什么的，用血清诱导会对实验有影响吗？我看的文献是用无血清诱导的，但是我用无血清诱导不能贴壁。麻烦师姐啦我明天电脑上回复你。安
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PMA是6ng/ML, 10^6THP-1细胞,后面2张图；培养24h后都贴壁了，72h后感觉2种PMA浓度诱导的细胞有伸出伪足的量不多，想麻烦师姐看看哪种浓度算是诱导细胞分化比较成功呢？大概有多少细胞分化了（比例是？）我画圈的地方是没有诱导成功吗（细胞还是圆形的）？没关系的。建议你可以做个流式看看。不过我觉得没问题。诱导成功师姐，谢谢你的建议，我还要将巨噬细胞诱导为M2型巨噬细胞，但是这个THP-1来源的巨噬细胞过了5天就很多颗粒了，似乎状态不好，我可以在加PMA后24h就加IL4及IL13诱导吗？这个时候细胞状态似乎更好。谢谢你。建议摸索时间，36小时-48小时为宜。师姐，我又来了，我用无血清诱导一直细胞不怎么贴壁，用10%血清诱导有贴壁的，但是不多，贴壁的细胞成梭形，或圆形细胞抱团也严重，PMA为100ng/ml,诱导之后用ox-LDL诱导成泡沫细胞，再染色，染色之后发现梭形的细胞不怎么变红色，圆形的红色还可以。问题1:你用的是10％血清吗？用10％血清诱导72h还是48h比较好？问题2:我是把THP-1细胞诱导成巨噬细胞，然后再用ox-LDL把巨噬细胞诱导成泡沫细胞，用泡沫细胞做实验，测胆固醇，还有其他的一些mRNA表达什么的，用血清诱导会对实验有影响吗？我看的文献是用无血清诱导的，但是我用无血清诱导不能贴壁。麻烦师姐啦我明天电脑上回复你。安师姐，你诱导时候用加双抗吗？你有没有试过无血清诱导？诱导和板子牌子有关系吗
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PMA是6ng/ML, 10^6THP-1细胞,后面2张图；培养24h后都贴壁了，72h后感觉2种PMA浓度诱导的细胞有伸出伪足的量不多，想麻烦师姐看看哪种浓度算是诱导细胞分化比较成功呢？大概有多少细胞分化了（比例是？）我画圈的地方是没有诱导成功吗（细胞还是圆形的）？没关系的。建议你可以做个流式看看。不过我觉得没问题。诱导成功师姐，谢谢你的建议，我还要将巨噬细胞诱导为M2型巨噬细胞，但是这个THP-1来源的巨噬细胞过了5天就很多颗粒了，似乎状态不好，我可以在加PMA后24h就加IL4及IL13诱导吗？这个时候细胞状态似乎更好。谢谢你。建议摸索时间，36小时-48小时为宜。师姐，我又来了，我用无血清诱导一直细胞不怎么贴壁，用10%血清诱导有贴壁的，但是不多，贴壁的细胞成梭形，或圆形细胞抱团也严重，PMA为100ng/ml,诱导之后用ox-LDL诱导成泡沫细胞，再染色，染色之后发现梭形的细胞不怎么变红色，圆形的红色还可以。问题1:你用的是10％血清吗？用10％血清诱导72h还是48h比较好？问题2:我是把THP-1细胞诱导成巨噬细胞，然后再用ox-LDL把巨噬细胞诱导成泡沫细胞，用泡沫细胞做实验，测胆固醇，还有其他的一些mRNA表达什么的，用血清诱导会对实验有影响吗？我看的文献是用无血清诱导的，但是我用无血清诱导不能贴壁。麻烦师姐啦我明天电脑上回复你。安师姐，你诱导时候用加双抗吗？你有没有试过无血清诱导？诱导和板子牌子有关系吗一会回复你，刚吃口饭。回去就上网~两点十分之前师姐，还有问题，为什么要在六孔板里做？我后续还要提蛋白RNA,据说六孔板比较方面。细胞加血清诱导抱团太严重，不容易贴壁啊
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你的一颦一笑 杨阳hysno1 你的一颦一笑 杨阳hysno1 你的一颦一笑 杨阳hysno1 vx969cool 杨阳hysno1 vx969cool 你好，我用的PMA是1ng/ML, 10^6THP-1细胞,前面2张图；
PMA是6ng/ML, 10^6THP-1细胞,后面2张图；培养24h后都贴壁了，72h后感觉2种PMA浓度诱导的细胞有伸出伪足的量不多，想麻烦师姐看看哪种浓度算是诱导细胞分化比较成功呢？大概有多少细胞分化了（比例是？）我画圈的地方是没有诱导成功吗（细胞还是圆形的）？没关系的。建议你可以做个流式看看。不过我觉得没问题。诱导成功师姐，谢谢你的建议，我还要将巨噬细胞诱导为M2型巨噬细胞，但是这个THP-1来源的巨噬细胞过了5天就很多颗粒了，似乎状态不好，我可以在加PMA后24h就加IL4及IL13诱导吗？这个时候细胞状态似乎更好。谢谢你。建议摸索时间，36小时-48小时为宜。师姐，我又来了，我用无血清诱导一直细胞不怎么贴壁，用10%血清诱导有贴壁的，但是不多，贴壁的细胞成梭形，或圆形细胞抱团也严重，PMA为100ng/ml,诱导之后用ox-LDL诱导成泡沫细胞，再染色，染色之后发现梭形的细胞不怎么变红色，圆形的红色还可以。问题1:你用的是10％血清吗？用10％血清诱导72h还是48h比较好？问题2:我是把THP-1细胞诱导成巨噬细胞，然后再用ox-LDL把巨噬细胞诱导成泡沫细胞，用泡沫细胞做实验，测胆固醇，还有其他的一些mRNA表达什么的，用血清诱导会对实验有影响吗？我看的文献是用无血清诱导的，但是我用无血清诱导不能贴壁。麻烦师姐啦我明天电脑上回复你。安师姐，你诱导时候用加双抗吗？你有没有试过无血清诱导？诱导和板子牌子有关系吗一会回复你，刚吃口饭。回去就上网~两点十分之前师姐，还有问题，为什么要在六孔板里做？我后续还要提蛋白RNA,据说六孔板比较方面。细胞加血清诱导抱团太严重，不容易贴壁啊我来了稍等，我一个一个来
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师姐，我又来了，我用无血清诱导一直细胞不怎么贴壁，用10%血清诱导有贴壁的，但是不多，贴壁的细胞成梭形，或圆形细胞抱团也严重，PMA为100ng/ml,诱导之后用ox-LDL诱导成泡沫细胞，再染色，染色之后发现梭形的细胞不怎么变红色，圆形的红色还可以。问题1:你用的是10％血清吗？用10％血清诱导72h还是48h比较好？我用的就是百分之十的。我个人觉得48小时足够了，因为后续还要诱导泡沫细胞。问题2:我是把THP-1细胞诱导成巨噬细胞，然后再用ox-LDL把巨噬细胞诱导成泡沫细胞，用泡沫细胞做实验，测胆固醇，还有其他的一些mRNA表达什么的，用血清诱导会对实验有影响吗？我看的文献是用无血清诱导的，但是我用无血清诱导不能贴壁。麻烦师姐啦可能你的实验步骤不对。首先，你要用有血清的完全培养基进行培养细胞，培养THP-1来源的巨噬细胞。48小时后你需要诱导泡沫细胞加入脂蛋白。这一步有无血清都可以，但是我认为没有血清会诱导得更好，巨噬细胞会吞进更多的脂蛋白。
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你的一颦一笑还有怎么解决用血清诱导，细胞抱团严重的问题？抱团不利于贴壁啊明天我跟你说一下我的想法，我不这么想。您好。你所说的抱团是什么时候？你是指THP-1还是巨噬细胞如果你是说THP-1，那是必须的，因为它就是个细胞系，它是一分为二二分为四的，那当然会生长成细胞团啊。个人认为这是正常的；如果你说是巨噬细胞，那只能说明你没有吹开细胞团为单细胞再加入PMA.
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你的一颦一笑 师姐，你诱导时候用加双抗吗？你有没有试过无血清诱导？诱导和板子牌子有关系吗下次就别引用了，引用之前的对话太长了！我是加双抗的。如果你操作没问题也可以不加双抗，但是加了会更安全。诱导巨噬细胞的时候没有试过不加血清，因为我觉得那样的话会让细胞状态不好。
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师姐，还有问题，为什么要在六孔板里做？我后续还要提蛋白RNA,据说六孔板比较方面。细胞加血清诱导抱团太严重，不容易贴壁啊为什么在六孔板做;我没有用过六孔板。我只用过35mm的培养皿，大小和六孔板的一个孔一样大，不过更加方便。我用过12、24、96孔板。我觉得你用的板子是和你的实验有关系的，我做CCK8就会用96孔板。我加了PMA后从来没有出现抱团和不容易贴壁的现象。建议你调整一下THP-1的细胞状态。
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杨阳hysno1 你的一颦一笑还有怎么解决用血清诱导，细胞抱团严重的问题？抱团不利于贴壁啊明天我跟你说一下我的想法，我不这么想。您好。你所说的抱团是什么时候？你是指THP-1还是巨噬细胞如果你是说THP-1，那是必须的，因为它就是个细胞系，它是一分为二二分为四的，那当然会生长成细胞团啊。个人认为这是正常的；如果你说是巨噬细胞，那只能说明你没有吹开细胞团为单细胞再加入PMA.师姐，我说的细胞抱团是指诱导过程中未贴壁的THP-1,正常培养时也抱团，我是觉得抱团不利于贴壁，是这样吗？我的抱团有点严重
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还是不明白啥抱团了
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你的一颦一笑 杨阳hysno1 你的一颦一笑还有怎么解决用血清诱导，细胞抱团严重的问题？抱团不利于贴壁啊明天我跟你说一下我的想法，我不这么想。您好。你所说的抱团是什么时候？你是指THP-1还是巨噬细胞如果你是说THP-1，那是必须的，因为它就是个细胞系，它是一分为二二分为四的，那当然会生长成细胞团啊。个人认为这是正常的；如果你说是巨噬细胞，那只能说明你没有吹开细胞团为单细胞再加入PMA.师姐，我说的细胞抱团是指诱导过程中未贴壁的THP-1,正常培养时也抱团，我是觉得抱团不利于贴壁，是这样吗？我的抱团有点严重回复在楼上
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就是我把THP-1细胞接种到六孔板里，加了血清诱导，然后会发现细胞生长时候抱团，成葡萄串样，一小团一小团的
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你的一颦一笑 就是我把THP-1细胞接种到六孔板里，加了血清诱导，然后会发现细胞生长时候抱团，成葡萄串样，一小团一小团的你是怎么操作的啊，先把细胞放六孔了？养一段时间再加pma？那细胞必然抱团不能帖壁啊！你说说你到底怎么操作的，怎么做的多少小时加pma
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你的一颦一笑 就是我把THP-1细胞接种到六孔板里，加了血清诱导，然后会发现细胞生长时候抱团，成葡萄串样，一小团一小团的你真是w厉害了我的师妹。。。。
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杨阳hysno1 你的一颦一笑 就是我把THP-1细胞接种到六孔板里，加了血清诱导，然后会发现细胞生长时候抱团，成葡萄串样，一小团一小团的你真是w厉害了我的师妹。。。。师姐，我表达太不清楚了，详细说一下，我把细胞离心，然后加含PMA的10%血清培养基，吹悬，计数，然后加到六孔板里，培养48或72h,中间一直不换液，发现培养基都黄的不行了，然后弃去培养基，加含氧化低密度脂蛋白的培养液培养，在pma诱导过程中，发现细胞容易抱团生长，就是所谓的葡萄串样，贴壁比较少，贴壁后的细胞有的为圆形，有的为梭形，但是太少了，是不是因为细胞容易抱团影响贴壁？我把药加进去后进行细胞计数的，如果细胞密度大，就用药液稀释，然后接到板子里，这样会有影响吗？还是稀释好后，再加PMA?师姐，帮我分析下贴壁少的原因，我真是没法了
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你的一颦一笑 杨阳hysno1 你的一颦一笑 就是我把THP-1细胞接种到六孔板里，加了血清诱导，然后会发现细胞生长时候抱团，成葡萄串样，一小团一小团的你真是w厉害了我的师妹。。。。师姐，我表达太不清楚了，详细说一下，我把细胞离心，然后加含PMA的10%血清培养基，吹悬，计数，然后加到六孔板里，培养48或72h,中间一直不换液，发现培养基都黄的不行了，然后弃去培养基，加含氧化低密度脂蛋白的培养液培养，在pma诱导过程中，发现细胞容易抱团生长，就是所谓的葡萄串样，贴壁比较少，贴壁后的细胞有的为圆形，有的为梭形，但是太少了，是不是因为细胞容易抱团影响贴壁？我把药加进去后进行细胞计数的，如果细胞密度大，就用药液稀释，然后接到板子里，这样会有影响吗？还是稀释好后，再加PMA?师姐，帮我分析下贴壁少的原因，我真是没法了你吹开细胞了，最好吹三十下-四十下。吹成单细胞。你确定是单细胞？我建议你先是做好单细胞悬液，再最后加PMA。你先说你确定是吹成单细胞悬液了么
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你的一颦一笑 杨阳hysno1 你的一颦一笑 就是我把THP-1细胞接种到六孔板里，加了血清诱导，然后会发现细胞生长时候抱团，成葡萄串样，一小团一小团的你真是w厉害了我的师妹。。。。师姐，我表达太不清楚了，详细说一下，我把细胞离心，然后加含PMA的10%血清培养基，吹悬，计数，然后加到六孔板里，培养48或72h,中间一直不换液，发现培养基都黄的不行了，然后弃去培养基，加含氧化低密度脂蛋白的培养液培养，在pma诱导过程中，发现细胞容易抱团生长，就是所谓的葡萄串样，贴壁比较少，贴壁后的细胞有的为圆形，有的为梭形，但是太少了，是不是因为细胞容易抱团影响贴壁？我把药加进去后进行细胞计数的，如果细胞密度大，就用药液稀释，然后接到板子里，这样会有影响吗？还是稀释好后，再加PMA?师姐，帮我分析下贴壁少的原因，我真是没法了你的PMA 好用么，多大终浓度？SIGMA的？按道理不可能啊，我从来没有出过你这种情况，怎么可能加了PMA还是抱团呢。前提是PMA好用，细胞是单细胞悬液。【如果细胞密度大，就用药液稀释，然后接到板子里，】这里必须保证PMA的终浓度啊，你要是稀释差个数量级，那估计不会好用的。
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杨阳hysno1 你的一颦一笑 就是我把THP-1细胞接种到六孔板里，加了血清诱导，然后会发现细胞生长时候抱团，成葡萄串样，一小团一小团的你真是w厉害了我的师妹。。。。我的pma是sigma的，之前买的p8139 ，发现大家用的p1585，就买了1585，pma应该没问题吧，我的PMA配置是:10mgPMA用1mlDMSO溶解，得浓度为10mg/ml，然后从中吸取100ul,再加900ulDMSO,得浓度为1mg/ml,然后分装，10ul/管，用时100ml培养基中加10ulpma。
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你好，最近在用PMA诱导THP1，六孔板100万细胞/2ml培养基，用的200ng/ml浓度的PMA，细胞不贴壁啊不知道什么原因，接下来我还要诱导成M1和M2型的巨噬细胞。我加你QQ可以同意一下吗，仔细问您一下，我的是
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请问一下，你加PMA多久之后细胞贴壁阿，贴壁之后再加LPS&IFNr或者IL-4&IL-13诱导成M1或者M2吗，还是怎么啊
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师姐，氧化低密度脂蛋白ox-LDL加入培养基前需要过滤膜吗？会不会有损失？我怀疑ox-LDL污染了，买的是2mg/ml的溶液，共 1ml, 我之前用都没过滤
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巴拉豆 请问一下，你加PMA多久之后细胞贴壁阿，贴壁之后再加LPS&IFNr或者IL-4&IL-13诱导成M1或者M2吗，还是怎么啊24小时就贴了，一般培养到48小时，再加你的刺激因子。
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