柑橘黄龙病菌DNA两种提取方法的比较
章松柏（讲师）范国成（研究员）
文献综述,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,Ⅰ 中文摘要,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,Ⅱ 外文摘要,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,Ⅲ
1.前言……………………………………………………………………1
2.材料与方法,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,2
2.1供试材料,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,2
2.2试剂及仪器,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,,,,,,2
2.2.1主要试剂,,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,,2
2.2.2主要仪器,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,2
2.3实验方法,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,2
2.3.1病害样品的采集,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,2
2.3.2CTAB法提取样品DNA,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,2
2.3.3碱裂/醇沉法提取样品总DNA,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,2
2.3.4紫外分光光度计测定样品总DNA浓度的测定,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,2
2.3.5样品总DNA完整性检测,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,2 3结果与分析,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,3
3.1抽提样品DNA浓度和纯度,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,3
3.2柑橘总DNA的检测结果,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,3
3.3 PCR检测结果,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,3 4结论与讨论,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,4 参考文献,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,5 致谢,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,6
[摘 要]：本文综述了柑桔黄龙病的分布、发生情况、病原菌的分类、流行条件、
检测与诊断、以及黄龙病的综合防控技术。
[关键词]：柑橘黄龙病；木虱；研究进展
柑橘黄龙病(citrus Huanglon ing，HLB)是由柑橘黄龙病相关病原菌引起的毁灭性病害。该病在不同国家(地区)曾有不同的名称，在中国大陆称为黄龙病，在我国台湾称为立枯病(1ikubin)，在菲律宾称为叶斑驳病(1eaf mottle)，在印度称为梢枯病(dieback)，在南非称为青果病(greening)，在印度尼西亚称为叶脉韧皮部退化病(vein phloemdegeneration)。由于黄龙病的嫁接传染性最先由林孔湘教授确认，1995年在中国福建省福州市召开的第l3届国际柑橘病毒学家组织(IOCV)会议商定以黄龙病作为该病害的统一名称[1]。由于尚未找到好的防治药剂， 染病后只有挖除，所以俗称柑橘上的癌症。柑橘黄龙病的出现和蔓延，引起各柑橘种植国家的广泛关注。为了深入开展相关研究，更好地开展防治工作，本文对该病的发生与分布情况、病原菌分类、流行条件、检测与诊断、及防治技术等的研究成果进行了概述。
2 黄龙病的分布、发生情况
到目前为止，黄龙病主要分布于亚洲、非洲和美洲的4O多个国家和地区[2-3]；其中，巴西、美国、古巴和伊朗近几年才报道发生，伊朗2008年才首次报道。90年代末,美国对柑橘黄龙病普查中发现了该病的传病媒介柑橘木虱,但未发现柑橘黄龙病。2005年9月,在美国佛罗里达州南部发现黄龙病,严重威胁着佛罗里达州达90万hm2早的柑橘生产[4]。
我国柑橘黄龙病最早发生在广东省汕头地区,长期以来,该病在广东、广西、福建、台湾发生严重。全国组织的柑橘黄龙病普查中,发现浙江、云南、四川、江西、湖南等省有柑橘黄龙病和柑橘木虱发生,但均属零星分布[5]。近年来,由于全球气温持续变暖,柑橘木虱活动范围扩大,柑橘种质资源的频繁调运,柑橘黄龙病的发生在我国有逐渐扩大的趋势。年,贵州省28个县(市)进行了柑橘黄龙病调查和鉴定,结果表明发生柑橘黄龙病的县(市)有12个,较80年代新增3个,柑橘黄龙
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项目名称：2016年中央柑桔黄龙病防治补助资金项目农药采购项目项目编号：609-0&一、项目联系方式：项目联系人：邓先生项目联系电话：&二、原公告名称及地址时间等：首次公告日期：日本次变更日期：日原公告项目名称：2016年中央柑桔黄龙病防治补助资金项目农药采购项目原公告地址：http://ncpms./GS6/BidInfo/preview2?bidId=2caf01e4b2658&三、更正事项、内容：一、应澄清/更正事项：（1）谈判文件第一部分《报 价 邀 请 函》P1-2页&二、（合格的报价人）&中的：1、报价人具有独立承担民事责任能力的在中华人民共和国境内注册的法人或其他组织，具有从事本项目的经营范围和能力；（具有农资销售经营资格，提供相关证明文件）2、提供报价人住所地或者业务发生地人民检察院出具的无行贿犯罪档案查询结果告知函【自出具之日起前3年内无行贿犯罪档案记录，若报价人自成立之日起不足3年的，则出具自成立之日起至出具之日无行贿犯罪档案纪录。无行贿犯罪档案查询结果告知函有效期自出具之日2个月内有效，开标时间必须在有效期内，报名时提供复印件并加盖公章，原件核查。投标时提供原件。】3、符合《政府采购法》第二十二条规定；4、本项目不接受联合体投标。符合以上资格要求的供应商，谈判小组将以公开报名方式确定其报价资格。（2）谈判文件第一部分《报 价 邀 请 函》P1-3页&四、报价截止时间、谈判时间及地点&中的：1、递交报价文件时间：日下午14：30-15:00（北京时间）2、报价截止时间：日下午15:00（北京时间）3、谈判时间：日下午15:00（北京时间）4、谈判地点：广东省云浮市城中路110号(即果留香楼上三楼)请各报价人授权代表及技术人员务必到场参与谈判。&二、具体澄清更正内容：（1）谈判文件第一部分《报 价 邀 请 函》P1-2页&二、供应商资格要求（合格的报价人）&中的：1、报价人具有独立承担民事责任能力的在中华人民共和国境内注册的法人或其他组织，具有从事本项目的经营范围和能力；（具有农资销售经营资格，提供相关证明文件）2、投标人若不是本次投标产品的制造商，需提供制造商的销售授权证明材料复印件，并加盖公章。3、合格报价人选用药剂需提供三证（农药登记证、农药生产许可证或农药生产批准文件、农药标准证），复印件并加盖生产厂家公章。4、提供报价人住所地或者业务发生地人民检察院出具的无行贿犯罪档案查询结果告知函【自出具之日起前3年内无行贿犯罪档案记录，若报价人自成立之日起不足3年的，则出具自成立之日起至出具之日无行贿犯罪档案纪录。无行贿犯罪档案查询结果告知函有效期自出具之日2个月内有效，开标时间必须在有效期内，报名时提供复印件并加盖公章，原件核查。投标时提供原件。】5、符合《政府采购法》第二十二条规定；6、本项目不接受联合体投标。符合以上资格要求的供应商，谈判小组将以公开报名方式确定其报价资格。&（2）谈判文件第一部分《报 价 邀 请 函》P1-3页&四、报价截止时间、谈判时间及地点&中的：1、递交报价文件时间：日上午08：30-09:00（北京时间）2、报价截止时间：日上午09:00（北京时间）3、谈判时间：日上午09:00（北京时间）4、谈判地点：广东省云浮市城中路110号(即果留香楼上三楼)请各报价人授权代表及技术人员务必到场参与谈判。&四、其它补充事宜：&五、联系方式：采购单位名称：云浮市云城区农业局采购单位地址：云浮市云城区园林路8号采购单位联系方式：张先生
采购代理机构全称：广东晓君招标采购代理有限公司采购代理机构地址：广东省云浮市城中路110号(即果留香楼上三楼)采购代理机构联系方式：邓先生
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　　眼下正是金柚秋梢抽发期，也是黄龙病的传播媒介桔柑木虱的高发期，为了有效控制柑桔木虱传播黄龙病病源，近日，区农业局在金柚专业镇石扇镇开展了飞机统一施药防治工作。
飞机施药是2017年梅县区金柚黄龙病防控补助实施方案的一部分，通过这个计划可将项目区金柚木虱虫口密度减退70%以上，将目标区金柚黄龙病病株率降低1个百分点以上，或控制在3%以内。
　　记者：佳娜 正华
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& 黄龙病的相关知识及防治措施
黄龙病的相关知识及防治措施
发布时间： 10:23 浏览次数：178
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　　病原 黄龙病病原为一种类革兰氏阴性细菌，属韧皮杆菌。
　　传播途径
　　本病主要以柑橘木虱为传播媒介，还可借助嫁接、菟丝子传播，有效控制果园柑橘木虱数量即可控制果园黄龙病爆发。带病苗木或带病接穗是远距离传病的主因，往往使无病的新区变成病区。可传染黄龙病的柑橘木虱
　　发病条件
　　1、果园或果园附近存在病源，即黄龙病病树。
　　2、果园或果园附近有传毒媒介，即柑橘木虱。
　　3、柑橘木虱在病树取食累计5个小时，即可带毒。
　　4、果园内发生不整齐，随时有嫩梢发生，可吸引柑橘木虱前来取食、传毒。
　　黄龙病防治方法
　　（1）严格检疫制度，杜绝病苗、病穗传入无病区和新种植区。
　　（2）培育无病苗木。
　　①苗圃地应选择在无病区或隔离条件好的地方，或用塑料网棚封闭式育苗。
　　②建立柑橘无病毒繁育体系。凡经选出的良种株系，必须通过指示植物或聚合酶链式反应（PCR）检测。通过茎尖嫁接脱毒技术获取茎尖苗木，按无病毒规程操作繁育无病苗木。
　　③&体系&未建立时，砧木种子应采自无病树的果实，种子用50～52℃热水浸泡5分钟，预热后再浸泡在55～56℃的热水中，恒温达50分钟。接穗应采自经鉴定的无病母树，并用1 000倍盐酸四环素液浸泡2小时，后即用清水冲洗干净嫁接。
　　④加强苗圃的管理制度。
　　（3）防治柑橘木虱。
　　①加强栽培管理，每次新梢抽发整齐，统一喷药防治。在萌芽期即要喷第一次农药，防治成虫产卵在芽隙处。农药以有机磷为主，可选用水胺硫磷、氧化乐果或机油乳剂等。
　　②加强冬季清园喷药，消灭越冬期活动力差的柑橘木虱，是全年防治的关键。
　　③调整果树品种结构，在柑橘产区内不种植黄皮、九里香等芸香科植物，杜绝柑橘木虱转移寄主。
　　（4）预防为主，综合防治。坚持每次新梢转绿后全面检查黄龙病株，发现一株挖除一株，不留残桩 。当今，利用物理及生物综合方法，包括采用低温等离子复合制剂在防治方面有较好的效果。
　　（5）病区重建柑橘园。
　　①应整片挖除病、老树，清理环境，先种植一年短期作物后再行种柑橘。
　　②采用隔离种植。
　　（6）以产业化经营方式发展柑橘生产，做到发展规模统一规划，园区内统一品种，生产上统一措施，技术上统一指导，管理上统一规程。能有效控制发病率。
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