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openresty/1.11.2.4& 过量表达大叶补血草LgSOS1基因对拟南芥耐盐性的影响
过量表达大叶补血草LgSOS1基因对拟南芥耐盐性的影响
摘 要：将从盐生植物大叶补血草（Limonium.gmelinii（Willd.）Kuntze）中分离的质膜型Na＋/H＋逆向转运蛋白基因LgSOS1构建到pCAMBIA1301植物表达载体的CaMV35S启
【题　名】过量表达大叶补血草LgSOS1基因对拟南芥耐盐性的影响
【作　者】周玲玲 祝建波 王爱英
【机　构】石河子大学生命科学学院 石河子832003
【刊　名】《石河子大学学报:自然科学版》2011年 第6期 731-736页　共6页
【关键词】LgSOS1基因 质膜Na＋/H＋逆向转运蛋白 拟南芥 耐盐性
【文　摘】将从盐生植物大叶补血草（Limonium.gmelinii（Willd.）Kuntze）中分离的质膜型Na＋/H＋逆向转运蛋白基因LgSOS1构建到pCAMBIA1301植物表达载体的CaMV35S启动子下游上,转化拟南芥,获得抗潮霉素的转基因植株。对该植株的PCR和RT-PCR检测表明,LgSOS1已整合到拟南芥基因组中并过量表达。对转化植株的耐盐性实验结果表明：盐胁迫下转基因植株长势明显好于对照;盐分测定表明,转基因植株地上部分的Na＋积累显著低于野生型的,K＋含量则显著高于野生型的。这表明LgSOS1过量表达提高了拟南芥植株的耐盐性。
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LgSOS1基因,质膜Na＋/H＋逆向转运蛋白,拟南芥,耐盐性
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拟南芥cb甩基因启动子缺失载体的构建及转化迥
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拟南芥cb甩基因启动子缺失载体的构建及转化迥
关注微信公众号优秀研究生学位论文题录展示玉米根系蛋白磷酸酶基因ZmPP2C功能分析及遗传转化研究专　业: 植物学关键词: 玉米 蛋白磷酸酶 ZmPP2C 遗传转化 逆境胁迫 基因表达 功能分析分类号: S513形　态: 共 115 页　约 75,325 个字　约 3.603 M内容阅　读: 内容摘要ZmPP2C(AY621066)是本实验室从玉米根系中分离的一个蛋白磷酸酶基因,其编码区长度为873 bp,编码含有290个氨基酸残基的蛋白质。为了研究ZmPP2C功能,我们首先将ZmPP2C与GFP在洋葱表皮内融合表达,发现该基因是在核内表达；然后又利用花序浸染法转化拟南芥,通过基因组PCR、半定量RT-PCR以及Western blot分析证实,该基因已经成功转入拟南芥染色体中并在蛋白质水平上表达。我们对获得的T3代转基因拟南芥纯合体,在逆境胁迫处理下,进行种子萌发、根的伸长以及各种生理指标的测定。并将该基因成功转化玉米。主要结果如下：
1.玉米中ZmPP2C基因与拟南芥等其他植物中的同源性比较
利用Invitrogen软件包中的alignX软件,对分别来自于所有拟南芥中蛋白磷酸酶,以及与拟南芥、玉米、大麦、水稻、苜蓿等已经研究过的PP2C蛋白进行了分子聚类分析,分别构建了ZmPP2C蛋白的系统进化树。进化树分析表明,ZmPP2C与冰叶日中花植物中的MPC9同源性较高。与拟南芥中PP2C类蛋白的F类同源性较高。
2.玉米ZmPP2C基因的表达分析
对玉米幼苗进行甘露醇模拟干旱和高盐胁迫处理,提取根系总RNA进行Northern杂交,结果表明,干旱和高盐胁迫均对ZmPP2C基因的表达影响不明显,且表达水平随着胁迫时间延长略微下降；而在逆境恢复阶段,基因表达量又逐渐恢复到正常水平。
3.玉米ZmPP2C基因的亚细胞定位
构建表达载体pBI121-ZmPP2C-GFP,将ZmPP2C-GFP在洋葱表皮细胞内融合蛋白表达。在洋葱表皮细胞的细胞核上观察到绿色荧光,表明ZmPP2C定位于细胞核。而在对照细胞中的细胞膜、细胞质和细胞核中都有表达。这与TMpred软件对ZmPP2C跨膜结构分析一致。
4.转ZmPP2C基因拟南芥的鉴定
构建表达载体pBI121-ZmPP2C,利用花絮浸染法转化野生型拟南芥(Col-0)。通过半定量RT-PCR和Western blot方法,在转录和蛋白质表达水平上鉴定了5株高表达的T3代转化植株(L1～L5)。
5.过量表达ZmPP2C基因抑制拟南芥在胁迫下的萌发率和根的伸长
将转基因植株和野生型拟南芥播种在含有不同浓度的氯化钠和甘露醇的MS培养基上进行萌发试验。7天后,过量表达ZmPP2C基因的拟南芥相对于野生型其萌发率和根的伸长都受到抑制。而在对照状态下其萌发率和根的伸长没有明显差别。
6.转ZmPP2C基因拟南芥在逆境胁迫条件下的生理变化
为了检测转ZmPP2C基因拟南芥在胁迫条件下的变化,我们测定了一系列和植物逆境胁迫有密切关系的生理指标,包括净光合速率,游离脯氨酸的积累,MDA含量,膜透性以及失水速率等。结果表明,未处理的转基因和野生型拟南芥的这些指标没有明显变化。但是胁迫处理后,不管是野生型还是转基因植株净光合速率都下降,但野生型拟南芥下降的更明显；转基因拟南芥中Pro积累的量远远低于野生型；而转基因植株中MDA含量和失水速率均高于野生型。这些结果表明,过量表达ZmPP2C基因降低了转基因拟南芥对逆境胁迫的抗性。
7.逆境胁迫相关基因的RT-PCR分析
为了检测盐胁迫和干旱胁迫下转基因和野生型拟南芥胁迫相关基因的表达情况,选取胁迫相关基因RD29A,RD29B,P5CS1,P5C82,ABI1和ABI2用于研究。结果表明,相对于野生型拟南芥,在高盐或干旱胁迫12到24小时内,转基因拟南芥中RD29A,RD29B,PSCS1,P5CS2表达量降低或较慢。在高盐胁迫条件下,ABI1和ABI2的表达量明显降低。在干旱胁迫下,ABI1的表达量基本不变,而ABI2表达量明显降低。
8.转基因拟南芥植株降低了对ABA的敏感性
在对照培养基上,转基因拟南芥和野生型拟南芥发芽率没有明显差别,几乎都是100%萌发,而在含有ABA的培养基上,转基因拟南芥的萌发率明显高于野生型,即转基因拟南芥对ABA的敏感性降低,根的伸长也是如此。
9.过量表达ZmPP2C基因降低了转基因玉米的抗旱性
构建表达载体pCAMBIA1301-ZmPP2C,以农杆菌介导法和基因枪法同源转化玉米齐319和18-599(红)自交系。PCR结果表明,ZmPP2C cDNA已经插入转基因玉米基因组中。RT-PCR结果也表明ZmPP2C已经在转基因玉米中表达。通过对T1代转基因玉米幼苗浇灌盐溶液和甘露醇溶液试验发现,在胁迫下转基因玉米幼苗地上部受胁迫症状较为严重..……全文目录论文说明：英文缩写符号及中英文对照表中文摘要英文摘要1引言1.1逆境胁迫与植物细胞信号转导1.1.1细胞信号转导系统1.1.2细胞信号转导途径1.2蛋白磷酸酶的研究1.2.1蛋白磷酸酶的发现1.2.2蛋白磷酸酶的分类、结构及生化特性1.2.3植物细胞内PP2C的调控1.2.4植物PP2C的生理功能1.3本课题研究的目的及意义2材料和方法2.1实验材料2.2菌株与质粒2.3 PCR引物2.4培养基2.4.1母液配制2.4.2培养基类型2.5实验方法2.5.1植物基因组DNA提取2.5.2植物材料总RNA的提取2.5.3提取的DNA(RNA)的浓度检测2.5.4反转录cDNA第一链的合成2.5.5 PCR扩增2.5.6连接反应2.5.7大肠杆菌感受态细胞的制备2.5.8大肠杆菌感受态细胞的转化2.5.9碱法小量质粒DNA的提取2.5.10 DNA序列测定2.5.11 Northern杂交分析2.5.12原核表达玉米根系蛋白磷酸酶ZmPP2C蛋白2.5.13 Western blot检测蛋白表达2.5.14 pBI121-ZmPP2C-GFP表达载体的构建2.5.15拟南芥的无土栽培、转化及分析2.5.16野生型与转基因拟南芥植株在培养基上萌发及生长情况2.5.17 ZmPP2C基因转拟南芥正义表达载体的构建2.5.18电泳目的基因片段的回收2.5.19根癌农杆菌LBA4404感受态细胞的制备及转化2.5.20拟南芥生理指标的测定2.5.21农杆菌介导法转化玉米的研究3结果与分析3.1玉米ZmPP2C与其他植物中的PP2C类蛋白同源性比较3.2 ZmPP2C在玉米中的表达分析3.3.ZmPP2C的跨膜结构分析3.4 ZmPP2C的亚细胞定位3.5 ZmPP2C的原核表达及抗体制备3.5.1原核表达载体的构建3.5.2目的蛋白的表达3.5.3目的蛋白的纯化、免疫及效价3.6 ZmPP2C转化拟南芥研究3.6.1 ZmPP2C基因的扩增3.6.2克隆载体和表达载体的构建3.7转基因拟南芥筛选3.7.1转基因拟南芥的PCR检测3.7.2转基因拟南芥的半定量RT-PCR鉴定3.7.3转基因拟南芥的Western blot鉴定3.8转基因和野生型拟南芥在萌发和根伸长过程中对高盐和干旱的响应3.9转基因和野生型拟南芥在逆境胁迫条件下生理指标的变化3.9.1转基因和野生型拟南芥净光合速率的变化3.9.2转基因和野生型拟南芥脯氨酸含量的变化3.9.3转基因和野生型拟南芥MDA含量的变化3.9.4转基因和野生型拟南芥相对电导率(RMP)的变化3.9.5转基因和野生型拟南芥失水速率的变化3.10转基因和野生型拟南芥胁迫相关基因的表达分析3.11转基因和野生型拟南芥在萌发和根生长过程中对ABA的响应3.12农杆菌介导的ZmPP2C转化玉米的研究3.12.1建立农杆菌介导的玉米遗传转化体系3.12.2 ZmPP2C基因转化玉米3.12.3过量表达ZmPP2C的玉米抗旱分析4讨论4.1 ZmPP2C基因参与植物的逆境信号转导4.2玉米ZmPP2C基因表达模式和调控作用4.3过量表达ZmPP2C基因对转基因拟南芥抗逆性的影响4.4玉米ZmPP2C基因可能的信号转导机制5结论参考文献附图：高盐和干旱胁迫下相关基因在转基因和野生型拟南芥中的表达分析电泳量化图相似论文,39
页,S513.04,50页,S513.062,36页,S513,116页,S513.032,64页,S513,100页,S513,41页,S513,55页,S513.01
S334.5,57页,S513,50页,S511,60页,S513,106页,S511.01,114页,S512.1
Q943.2,60页,S511.035 Q943.2,65页,S512.101 Q945.11,35页,S511.02,129页,S511,64页,S511,58页,S511,71页,S511中图分类:
> <font color=@3 > 农业科学 > 农作物 > 禾谷类作物 > 玉米（玉蜀黍）
& 2012 book.EUI在拟南芥发育和逆境调控中的作用以及锌指蛋白WX1调控开花时间的初步探讨—硕士毕业论文下载
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EUI在拟南芥发育和逆境调控中的作用以及锌指蛋白WX1调控开花时间的初步探讨
[硕士毕业论文]论文目录&摘要第1-5页 Abstract第5-10页 1 引言第10-23页 　　· 植物中GA 的生物合成第10-14页 　　　　· GA 生物合成前体的形成第10-11页 　　　　· GA 生物合成途径第11页 　　　　· 内根-贝壳杉烯(ent-kaurene)的合成第11-12页 　　　　· 内根－贝壳杉烯合成GA12 醛第12页 　　　　· GA12 醛到活性GA 分子的合成第12-14页 　　· 植物中GA 的代谢第14-15页 　　　　· 活性 GA 分子到非活性GA 分子的代谢第14-15页 　　· 活性GA 与植物生长发育第15-16页 　　　　· 活性GA 与植物发育之间的关系第15页 　　　　· 活性GA 与种子发育第15页 　　　　· 活性GA 与茎叶生长第15-16页 　　　　· 活性GA 与开花第16页 　　　　· 活性GA 与果实生长发育第16页 　　· 活性GA 与其它激素之间的关系第16-18页 　　　　· 生长素对GA 的调控第17页 　　　　· 乙烯对GA 的调控第17页 　　　　· ABA 对 GA 的调控第17-18页 　　· 植物激素与逆境之间的关系第18-19页 　　　　· ABA 与逆境第18页 　　　　· GA 与逆境第18-19页 　　　　· 乙烯与逆境第19页 　　　　· 多胺与逆境第19页 　　· 锌指蛋白研究进展(第二部分)第19-20页 　　· 锌指蛋白的结构第20页 　　· 锌指蛋白的分类第20-21页 　　· 锌指蛋白的作用方式第21-23页 　　　　· 识别DNA第21页 　　　　· 识别RNA第21-22页 　　　　· 锌指蛋白的相互作用第22-23页 2 材料与方法第23-31页 　　· 实验材料(第一部分)第23页 　　· 实验方法第23-24页 　　　　· 转基因植株下胚轴的固定、包埋及切割第23-24页 　　　　· 转基因植株下胚轴细胞大小观察第24页 　　· 基因表达分析第24-25页 　　　　· 拟南芥总RNA 抽提方法第24页 　　　　· RNA 浓度及纯度的鉴定第24-25页 　　　　· RT-PCR 检测第25页 　　· ABA 敏感性实验第25页 　　· 抗逆性实验第25页 　　　　· 土壤干旱与盐分处理第25页 　　　　· 抗高温处理第25页 　　· 菌种和质粒载体（第二部分）第25页 　　· 试剂与仪器第25-26页 　　· 大肠杆菌感受态细胞制备、转化及鉴定第26页 　　· 农杆菌感受态细胞制备、转化及鉴定第26-27页 　　· 质粒DNA 的小量提取(碱裂解法)：参照≤分子克隆实验指南≥(SAMBROOK 等，1989)第27页 　　· DNA 片段的回收第27-28页 　　· 体构建(P355:: WX1 载体构建)第28页 　　· 拟南芥种植、转化、杂交及筛选第28-29页 　　· 亚细胞定位(PCAMBIAN-WX1-CFP)载体构建第29页 　　· 基因枪转化第29-30页 　　· 激光共聚焦荧光显微镜（LSCM）观察第30-31页 3 结果与分析第31-44页 　　· EUI-OE 对植物发育的影响（第一部分）第31-35页 　　　　· EUI-OE 导致植株严重矮化第31-32页 　　　　· EUI-OE 植株叶片的细胞学分析第32-33页 　　　　· EUI-OE 植株下胚轴的细胞学分析第33-34页 　　　　· EUI-OE 植株根系的细胞学分析第34-35页 　　· EUI 参与拟南芥中GA 代谢与信号途径第35-36页 　　· EUI-OE 对外源ABA 的敏感性第36-37页 　　· EUI-OE 对逆境的反应第37-40页 　　　　· EUI-OE 植株对盐胁迫能力增强第37-38页 　　　　· EUI-OE 植株对干旱胁迫能力增强第38-39页 　　　　· EUI-OE 植株对高温胁迫能力减弱第39-40页 　　· WX1T-DNA 插入突变体的鉴定及遗传分析（第二部分）第40-42页 　　· WX1 过表达植株呈现早开花表型第42页 　　· WX1 蛋白主要在细胞核中表达第42-44页 4 讨论与结论第44-47页 　　· EUI 基因对植物生长发育的调节(第一部分)第44页 　　· EUI 过表达种子在萌发过程中对ABA 敏感第44-45页 　　· EUI-OE 影响了植物对于非生物胁迫的抵抗力第45页 　　· WX1 突变体呈现晚开花表型(第二部分)第45页 　　· WX1 蛋白主要定位于细胞核第45-47页 参考文献第47-52页 附录第52-62页 发表论文第62-63页 作者简介第63-64页 致谢第64-65页
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