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干细胞成骨诱导培养基是不是这样配？
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在网上搜到的，看下方法有问题没？还有DXMS的浓度我看到有100nM和10nM的，哪种好些？另外这配置顺序有讲究没？还有过滤的问题是全部配好之后过0.22滤头吗？——————成骨诱导液配方：DMEM(H)+10%FBS+10mmol/Lβ-甘油磷酸钠+0.1μmol/L地塞米松+50mg/LVitC1）β-甘油磷酸钠分子量：216 溶于水10mmol/L=216mg/100ml称取216mgβ-甘油磷酸钠粉末溶于100ml低糖完全培养基中2）地塞米松分子量：392.5 在无水乙醇中的溶解度为1mg/ml.0.1μmol/L=0.04mg/L将100mg地塞米松溶于100ml无水乙醇中 制成25000X的浓缩液每100ml低糖完全培养基中加入4μl地塞米松浓缩液3）VitC分子量176.1 溶于水称取5mgVitC粉末溶于100ml低糖完全培养基中
不知道邀请谁？试试他们
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ayouvs 编辑于
Sola丶 在网上搜到的，看下方法有问题没？还有DXMS的浓度我看到有100nM和10nM的，哪种好些？另外这配置顺序有讲究没？还有过滤的问题是全部配好之后过0.22滤头吗？——————成骨诱导液配方：DMEM(H)+10%FBS+10mmol/Lβ-甘油磷酸钠+0.1μmol/L地塞米松+50mg/LVitC1）β-甘油磷酸钠分子量：216 溶于水10mmol/L=216mg/100ml称取216mgβ-甘油磷酸钠粉末溶于100ml低糖完全培养基中2）地塞米松分子量：392.5 在无水乙醇中的溶解度为1mg/ml.0.1μmol/L=0.04mg/L将100mg地塞米松溶于100ml无水乙醇中 制成25000X的浓缩液每100ml低糖完全培养基中加入4μl地塞米松浓缩液3）VitC分子量176.1 溶于水称取5mgVitC粉末溶于100ml低糖完全培养基中你准备自己配吗？
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李月ly 你准备自己配吗？有点想自己配，看Cyagen的成品要ml，不知道这个用量大不大。。
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Sola丶 有点想自己配，看Cyagen的成品要ml，不知道这个用量大不大。。我直接买的 我看我们实验室师兄师姐也没有自己配的
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关于丁香园前列腺素E2与地塞米松诱导BMSCs成骨过程的对比研究(R)医学论坛网-网聚医学的力量
&&请，我要！
前列腺素E2与地塞米松诱导BMSCs成骨过程的对比研究
&&&&&&&&&　　近期，广州市花都区花东镇中心卫生院研究人员发表论文，旨在比较前列腺素E2与地塞米松诱导促进骨髓间充质干细胞（BMSCs）骨向分化作用及其临床应用。研究指出，前列腺素E2具有更好增殖和诱导分化BMSCs的作用。该文发表在2015年第07期《中国临床研究》杂志上。 　　2011年10月至2013年10月收治的50例腿骨骨折患者，随机分为观察组、对照组两组，每组25例。两组患者均予骨髓穿刺各取出1
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　　近期，广州市花都区花东镇中心卫生院研究人员发表论文，旨在比较与地塞米松诱导促进（BMSCs）作用及其临床应用。研究指出，前列腺素E2具有更好增殖和诱导分化BMSCs的作用。该文发表在2015年第07期《中国临床研究》杂志上。
　　2011年10月至2013年10月收治的50例腿骨患者，随机分为观察组、对照组两组，每组25例。两组患者均予骨髓穿刺各取出10&ml骨髓，离心法分离出有核细胞，置入7.5%胎牛血清（FBS）培养基中，在5%CO2、37℃条件下培养12&h，弃掉未贴壁细胞，仅保留贴壁细胞。其后，观察组与对照组分别采用经前列腺素E2、地塞米松诱导分化后的自体BMSCs骨折处局部注射。比较两组的骨折愈合情况。
　　两组患者骨折均全部愈合，均无并发症发生。观察组骨折平均愈合时间（55.4&14.4）d，对照组骨折平均愈合时间（65.9&13.7）d，两组愈合时间比较差异有统计学意义（t=2.650，P&0.05）。两组局部注射经过诱导分化的BMSCs均未出现局部及全身不良反应。
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邮&&&&箱：骨髓基质细胞成骨诱导影响因子及中医药研究思路探讨
骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)是位于骨髓中的一种干细胞,因近年来大量研究表明,在体外经适当的培养条件可以向成骨细胞、成软骨细胞、成纤维细胞、脂肪细胞、成肌细胞等多种间充质来源的中胚层组织细胞分化,又被称为间充质干细胞(mesenchymal stem cell)。同时具有取材方便、机体损伤小、易于临床应用等优点,是目前最为合适的骨组织工程的种子细胞。在常用的BMSCs定向成骨诱导方法中,多选择地塞米松、VitC和β-甘油磷酸钠作为主要诱导剂,对其诱导过程的机制亦逐渐深入,而有关中医药在此过程中的作用研究相对较少,现将BMSCs成骨诱导影响因素的研究现状及其中医药相关研究进展总结如下。现代医学研究现状1雌激素雌激素(17β-estradiol)可促进BMSCs向成骨细胞分化,抑制其向脂肪细胞分化.来自小鼠双向分化潜能BMSCs系ST-2的研究表明,雌二醇能促进诱导细胞碱性磷酸酶(AL...&
(本文共4页)
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“龟鹿二仙膏”为传统古方，出自《医便》，方用鹿胶、龟胶、人参、枸杞四味，为阴阳气血交补之剂，可填阴补精，益气壮阳。根据导师多年相关学术临床经验，在“龟鹿二仙膏”的基础上，以益气补肾为基本法则，研制了防治骨质疏松药物“健骨二仙丸”胶囊。观察健骨二仙丸胶囊对骨质疏松症动物模型的治疗效果和探讨其作用机制。建立骨质疏松小鼠模型应用于中医药研究，用健骨二仙丸治疗卵巢切除小鼠有明显的效果，骨密度升高，骨生物力学显著改善，血钙维持在正常水平，ALP水平显著降低，在抑制骨吸收作用的同时并不引起明显子宫增生，在某些生物力学指标方面优于后17β雌二醇组及Raloxifene组，弹性载荷、弹性桡度、最大载荷等方面表现突出。明显抑制OVX小鼠体内骨吸收活动，而又同时具有Raloxifene不刺激子宫增生等优点，这方面是17β雌二醇所不具有的。给予健骨二仙丸治疗的卵巢切除大鼠骨密度上升，骨强度和骨韧性保持基本较为完好，健骨二仙丸治疗骨质疏松症不仅在于其增...&
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0引言骨髓基质细胞移植途径有多种。静脉注射移植为骨髓基质细胞植入脑内提供了一条更可行的途径,对科研和医务工作者具有广阔的应用前景。本实验主要探讨经脑缺血大鼠尾静脉注射移植骨髓基质细胞的可行性。1材料和方法设计:对照观察动物实验。教研室。材料:实验于6-08在北华大学医学院实验中心完成。体质量为280～320g的SD大鼠25只,北华大学动物实验中心提供。将25只大鼠中随机盲抓分为2组:骨髓基质细胞移植组(n=15)、对照组(n=10)。DMEM-LG培养基(GIBCO公司)、Percoll淋巴细胞分离液(SABC公司)、Hoeschst33342(GIBCO公司)、鼠抗人巢蛋白抗体(GIBCO公司)、羊抗鼠IgG(GIBCO公司)、DAB显色试剂盒(迈新生物技术开发公司)、离心沉淀机(上海医用分析仪器厂)、细胞培养瓶(北京华美生物公司)、CO2培养箱(日本)、倒置相差显微镜(Olympus)、荧光显微镜(Ol...&
(本文共3页)
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中药治疗骨折在我国已有数千年的历史,而且取得了很好的效果。近些年来,随着细胞生物学、分子生物学及发育生物学的发展,已认识到骨折愈合是一个复杂而高度有序的生理过程,涉及多种细胞和细胞因子的作用。对于中药治疗骨折的机理的研究有了新的认识,尤其是在骨髓基质细胞被发现后,该研究有了新的领域,研究表明两者之间在中药治疗骨折过程中有着十分密切的关系。1中药通过对生长因子的调节而影响骨髓基质细胞细胞分泌的与特异性的受体结合而导致信号转换从而调节细胞的增殖和分化的局部蛋白被称为生长因子。在中药及其复方治疗骨折愈合过程中,其可以通过促进生长因子的分泌对骨髓基质细胞影响而达到治疗骨折的目的。1.1中药促进BMP分泌以及其对骨髓基质细胞的作用骨形态发生蛋白(Bone Morphogenetic Proteins,BMP)是在去矿化骨质中发现的一种以二硫键连接的二聚体蛋白质,其有数种亚型,最早发现BMP能够使非骨化部位的组织发生骨化,经过一系列的试验表...&
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骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)是一类具有多向分化潜能的干细胞,其中部分细胞有自我复制、高度增殖和多向分化能力,在特定培养条件下可向骨、软骨、神经胶质细胞、心肌、骨胳肌、脂肪细胞、血管内皮细胞等间叶组织细胞转化,故又将这些细胞称为间充质干细胞(mesenchymal stem cells,BMSCs)[1,2]。近年来,组织工程中选择种子细胞的研究方兴未艾,由于BMSCs取材方便容易,扩增方法可靠,应用范围广泛及成骨确定且避免了免疫排斥问题,已成为最有前途的骨组织工程种子细胞。根据国内外近年文献对骨髓基质细胞的体外分离与培养及诱导成骨分化的研究综述如下。1BMSCs的基本概念上世纪70年代中期Friedenstein[3]描述了一群来自骨髓的非吞噬细胞性粘附细胞,呈成纤维样细胞外观,无论全骨髓低密度培养还是经密度梯度离心培养均能形成源于单一祖细胞的典型集落,称为成纤维样细胞集落形成单...&
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在临床上,造血干细胞移植技术虽然改善了某些血液肿瘤的预后,但化疗及化疗耐药仍是血液肿瘤治疗中的重点和难点。其中肿瘤微环境与化疗耐药之间的关系越来越受到重视。肿瘤相关间质细胞是肿瘤微环境中的主要成分,肿瘤相关间质细胞通过分泌多种细胞因子、细胞外基质蛋白等成分促进肿瘤细胞的生长、侵袭、转移、耐药、复发[1]。异常的骨髓微环境可能是血液肿瘤发生和进展的原因之一。骨髓微环境主要包括骨髓基质细胞(bone mar-row stroma cell,BMSC)、内皮细胞、破骨细胞与骨细胞、细胞外基质蛋白[如纤维连接蛋白(fibronec-tin,FN)]等。有研究表明在血液肿瘤中,骨髓微环境发生了改变,特别是BMSC细胞存在异常[2]。另外,有研究报道经β1整合素粘附到FN后,骨髓瘤细胞出现了G1期阻滞,并增加了对马法兰的耐药[3]。然而,在血液肿瘤中,是否存在骨髓微环境(特别是BMSC细胞)通过上调FN的表达,导致细胞周期阻滞,增强了化疗耐...&
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J Exp Hematol ):化疗作为恶性肿瘤综合治疗措施之一,在治疗的同时也带来各种不良反应,其中骨髓抑制尤为常见。临床上开展重组造血生长因子注射、造血干/祖细胞移植等方法,虽然可明显缩短肿瘤病人的骨髓抑制期,但仍不能完全恢复患者的造血功能和免疫功能[1-4],提示化疗可能损伤骨髓造血微环境,从而间接影响造血干/祖细胞的增殖、分化和成熟,导致造血功能障碍。目前基础实验和临床研究虽已初步证实体外扩增人骨髓基质细胞联合造血干细胞回输是受损骨髓造血重建的有效方法[5-6],但对于化疗导致骨髓造血微环境损伤及其影响造血细胞功能的机制尚不清楚。因此,深入研究化疗药物所致骨髓造血功能衰退的生物学机制,对缓解临床化疗副作用将有重要的现实指导意义。本研究以人骨髓来源基质细胞株HS-5为研究对象,探讨5-氟尿嘧啶对人造血微环境是否有损伤作用;以HS-5细胞为饲养层,建立人脐血单个核细胞和HS-5细胞共培养模...&
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冲击波与地塞米松诱导自体血清培养的hMSCs成骨分化的实验研究
目的:人骨髓间充质干细胞(human mesenchymal stem cells,hMSCs)是从骨髓中分离得到的一种多潜能干细胞,具有自我更新和多向分化潜能,已证实这类细胞在合适的体内外特定条件下可向成骨、软骨、神经、肌肉、皮肤和肝等多种类型的成熟细胞分化,因而是组织工程领域中的理想的种子细胞。但由于骨髓中hMSCs的数量有限,在进行体内移植前必须进行体外扩增。目前主要应用胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)进行hMSCs的体外培养,而胎牛血清本身可能传染病毒、带来异种免疫原,且存在排斥反应的问题,这极大地阻碍了hMSCs在临床上的应用,而自体血清(autologous serum,AS)可避免上述问题。而对hMSCs进行成骨诱导主要应用传统的地塞米松,但地塞米松浓度的差异对hMSCs的影响很大,浓度稍微增大,对细胞增殖有明显抑制作用,并有向脂肪细胞诱导分化的趋势。体外冲击波疗法(extracorporeal shock waves therapy,ESWT)因其能够显著促进成骨细胞增殖,近年来利用其治疗股骨头缺血性坏死、骨不连及骨折延迟愈合等取得了良好的疗效。我们利用ESWT与地塞米松比较对AS培养的hMSCs进行成骨分化。本研究国内外均未见报道。本研究利用ESWT与地塞米松比较对AS培养的hMSCs进行成骨分化,为临床治疗骨病探索一种新的治疗方法,从而指导临床治疗。　　
1抽取分离hMSCs及获取AS:选择10名志愿者(排除代谢性疾病),每名志愿者抽取骨髓60ml,用梯度离心法分离出hMSCs。抽取外周静脉血100ml,然后分离出AS(约55ml)。　　
2观察AS对hMSCs增殖的影响:把每名志愿者的骨髓分成两组,分别用10％AS和10％FBS对hMSCs进行体外培养,通过相差倒置显微镜观察细胞形态、检测24小时细胞贴壁率、细胞倍增时间、CCK-8(cellcounting kit-8)测细胞增殖曲线、检测细胞表面标记物、细胞周期及免疫细胞化学染色检测比较两组hMSCs的增殖状况。　　
3比较ESWT与地塞米松对AS培养的hMSCs成骨分化的影响:把AS培养的hMSCs分成两组,两组分别用ESWT(0.36mj/mm2/100次)和传统的诱导成骨培养基(10nM地塞米松、50uM抗坏血酸、10mMβ-甘油磷酸钠)分别对hMSCs进行成骨诱导,对诱导好的细胞进行ALP定量检测、ALP染色、茜素红染色及RT-PCR.测成骨基因(碱性磷酸酶、骨钙素、骨桥蛋白、骨结合素、Ⅰ型胶原)表达比较两组成骨分化情况。对所有数据(x)±s表示统计学分析,设定P<0.05为有统计学意义。　　
1 hMSCs显微镜下细胞形态学观察:AS和FBS培养的细胞在同一代次上形态无明显差异,具有典型的hMSCs形态,随着代次的增加,部分细胞逐渐变扁,贴壁性减退,出现一些漂浮的细胞；部分分泌强的细胞分泌物增多,细胞增殖速度明显下降,这种现象在7代以后尤为明显。根据P3细胞计数结果计算24h贴附率,两组组分别为:(94.34±1.7)％、(93.0±1.6)％,(P>0.05),无显著差异。根据P3细胞计数AS组细胞倍增时间(平均53小时,41.54h),FBS组(平均84小时,76-89h),P<0.01,有显著性差异,AS组的细胞倍增时间明显短于FBS组。CCK-8检测根据每日检测结果绘制细胞增殖曲线显示两组间差异非常显著(P<0.01),AS培养的hMSCs增殖能力提高,峰值增高。AS在细胞增殖上明显优于FBS。　　
2细胞表面分子测定和免疫细胞化学染色检测:流式细胞仪检测结果显示AS和FBS培养的细胞表面抗原CD44的表达阳性率分别为99.96％、99.30％,符合hMSCs的细胞表面特征,两组没有明显差异。免疫荧光染色显示两组细胞CD44、CD105均呈阳性表达,绿色、红色荧光遍及胞质。　　
3 hMSCs细胞周期测定:结果显示hMSCs具有干细胞的典型周期特性,大部分细胞处于G0/G1期,只有少数进入S期。随代次增加,处于G0/G1期的细胞的比例逐渐减少,S期细胞比例逐渐增多,与形态及生长特性的变化规律相一致,反映了细胞衰老的进程,两组没有明显差异。　　
4 ALP定量测定和ALP染色:结果显示在各时间点ESWT组ALP活性明显高于地塞米松诱导组,两组都在第四天开始持续增加,在第14天达到峰值,继而下降。两组有明显差异(P<0.05)。两组同样分别成骨诱导培养14天后,弃培养基,用PBS洗剂2次,用95％酒精固定10分钟。按ALP试剂盒说明书进行染色。结果显示ESWT组ALP染色强度明显高于地塞米松诱导组。　　
5茜素红法钙化结节染色:两组同样分别诱导28天后进行茜素红染色,两组均可见矿化结节。100倍镜下随机选取3个视野进行计数,结果ESWT组矿化结节数为7.5±1.2,地塞米松诱导组矿化节数为5.0±0.8,ESWT组钙结节数量明显多于地塞米松诱导组。　　
6 RT-PCR检测成骨基因表达:两组同样分别成骨诱导培养28天后检测:碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、骨钙素(osteocalcin,OC),骨桥蛋白(osteopontin,OP),骨结合素(osteonectin,ON),Ⅰ型胶原(collagenⅠ,ColⅠ),GAPDH(glyceraldehyde-3-phosphatedehydrogenase)表达情况。成骨诱导28天后,冲击波干预组中的ALP、ON、OP、OC、ColⅠ的基因表达明显高于地塞米松诱导组。　　
1、自体血清与胎牛血清相比,对人骨髓间充质干细胞更具有良好的促增殖作用。我们选择AS培养的hMSCs进行成骨诱导。　　
2、冲击波作用于人骨髓间充质干细胞的成骨效应明显优于地塞米松,因而是一种更好的诱导成骨分化的刺激方式。
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