你好,加标回收率实验怎么做在什么情况下会达到140%呢?这个数值应该不正常吧(用的免疫亲和柱)

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[ 来源:烟台鑫康商贸有限公司 ]
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1) 什么是免疫亲和柱?工作原理是什么?
答:免疫亲和柱的全称为免疫亲和层析柱(immnuoaffinitychromatography columns,IAC),常简称为:亲和柱、免疫亲和柱、亲和层析柱等。它是利用抗原抗体特异性可逆结合特性的SPE技术,根据抗原抗体的高选择性,从复杂的待测样品中提取目标化合物。主要原理是将抗体与惰性微珠共价结合,然后装柱,将抗原溶液过免疫亲和柱,而非目标化合物则沿柱流下,最后用洗脱缓冲液洗脱抗原,从而得到纯化的抗原。
2) 免疫亲和柱抗体的来源是什么?
答:免疫亲和柱使用的抗体可以是单克隆抗体,也可以是多克隆抗体。多克隆抗体具有生产工艺简单,效价通常较高等特点,但也有交叉反应率高,生产批次之间差异大的缺点。单克隆抗体是由稳定的杂交瘤细胞传代产生,具有高特异性、高均一性,有效的避免了批间差,这对于产品质量的稳定有决定性的效果。
成都摩尔科学仪器有限公司的真菌毒素免疫亲和柱均使用高效价的单克隆抗体制备。
3) 免疫亲和柱的生产周期是多长时间?是否有常规库存?最短供货时间是多久?
答:亲和柱的生产周期与抗体的库存量相关。在抗体库存量充足时,生产周期一般为4-5天(如果数量较大,会有一定的延迟)。常用的黄曲霉毒素系列三种亲和柱一般有5-10盒的库存。有现货的亲和柱供货时间为一周(物流特别不方便的地区会有延迟)。
4) 免疫亲和柱的产品规格和相关技术参数是什么?
答:亲和柱主要的产品规格为:柱容量,回收率和柱容积。其他的参数包括生产日期,批次,储存条件,有效期等。主要参数请查阅产品说明书。
5) 免疫亲和柱的保质期多长?储存条件有什么要求?
答:百奥宜康的亲和柱保质期为1年-1.5年。储存条件为4℃-30℃,并以4℃-8℃的保存条件最佳。切记0℃以下的低温,因为缓冲液冻结,会严重影响亲和柱内的物理结构,对亲和柱的质量影响很大。
6) 温度对实验结果有什么影响?
答:抗原抗体发生反应的最佳温度是在25℃左右,所以实验需要的环境温度最好是室温25℃左右,太高或太低的温度都会对亲和柱的回收率有一定的影响。亲和柱在使用前如果在4-8℃环境下保存,也需要恢复至室温在进行实验。0℃以下的环境温度,不适合实验的进行。
7) 免疫亲和柱每月产能是多少?
答:免疫亲和柱每月的产能主要和抗体的存量相关,在原料能够保证的条件下,目前可以达到月产能1万支的目标。
8) 免疫亲和柱包装是什么规格?报价和实际成交价是多少?
答:免疫亲和柱的包装规格一般为25支每盒,黄曲霉毒素总量,B1,M1的市场报价均为3000元/盒,给经销商的价格一般为元。
9) 如果你们的产品快要过期,能否给予调换?
答:我们给客户的商品一般都有1年左右的有效期,如果客户未能在效期内使用完,可以与我们沟通协商更换事宜。
10) 黄曲霉毒素总量、B1和M1免疫亲和柱的差异是什么?
答:黄曲霉毒素总量、B1和M1免疫亲和柱的主要差异在于使用的抗体不同。黄曲霉毒素中亲和柱使用的抗体要求对黄曲霉毒素G1,G2,B1,B2以及M1都要有比较好的交叉反应率,黄曲霉毒素B1亲和柱使用的抗体则要求只能对黄曲霉毒素B1有很强的特异性,对其他几种黄曲霉毒素的交叉反应率要接近0。黄曲霉毒素M1亲和柱使用的抗体要求对黄曲霉毒素M1有很高的效价,但也容许对其它几种黄曲霉毒素有一定的交叉反应。适用于HPLC的黄曲霉毒素M1亲和柱因为进样量较大,在柱容积上采用3ml的柱具,大于黄曲霉毒素总量和B1的1ml柱具。
11)黄曲霉毒素总量、B1和M1免疫亲和柱都适用于何种样品?
答:黄曲霉毒素总量和B1亲和柱适用于各种谷物,粮油酒类,奶制品,副食品,饲料等样品,黄曲霉毒素M1亲和柱适用于牛奶,奶粉以及奶酪奶油等奶制品样品。其中黄曲霉毒素B1亲和柱是唯一适用于荧光计法,检测样品中的黄曲霉毒素B1含量的免疫亲和柱。
12)国家对免疫亲和柱的使用有那些相关规定,具体内容是什么?
答:相关国家标准中黄曲霉毒素总量和B1免疫亲和柱并没有明确的规定,但是为了实验结果的尽可能准确,一般要求免疫亲和柱的回收率能大于70%。在GB 0中HPLC法中对黄曲霉毒素M1免疫亲和柱的规定为:免疫亲和柱应该含有黄曲霉毒素M1的抗体。亲和柱的最大容量不小于100ng黄曲霉毒素M1(相当于50 mL浓度为2mg/L的试样)、当标准溶液含有4ng黄曲霉毒素M1(相当于相当于50 mL浓度为80ng/L的试样)时回收率不低于8, 0%。
13)国家对免疫亲和柱是否有批量检查验收制度,你们如何保证产品质量?
答:没有相关的制度。但是企业对自己的产品必须有相应的质检制度。我们的免疫亲和柱在出厂前会经过严格的测试,批次随机抽样,进行3-4个浓度水平实验,保证产品变异系数小于15%。回收率等关键参数符合说明书上的标准。
14)使用免疫亲和柱净化的优缺点是什么?
答:因为免疫亲和柱的高特异性,使用免疫亲和柱净化可以获得纯净的样品提取物,如同标准品般纯净的提取物可以用相对简单常见的检测方式获得准确的定量检测结果,这对于微量甚至痕量分析很重要。在样品净化过程中,使用亲和柱同时避免了常规液液萃取中大量有机溶剂的使用,加强了对实验员的保护。
缺点就是成本要稍高一些。
15)荧光计法、HPLC法和液质联用法的区别是什么?
答:GB 0中使用的荧光计法、HPLC法和液质联用法首先都是利用免疫亲和柱净化样品,然后再利用黄曲霉毒素M1本身的荧光性利用荧光计法、HPLC法以及液质联用法进行检测。荧光计法的基础是利用亲和柱净化后获得的纯净的提取物,其荧光强度和黄曲霉毒素M1成正比。HPLC法和液质联用法也需要相对纯净的提取物才能减少干扰,获得准确的数值。液质联用法与HPLC法的主要区别就是利用质谱代替HPLC中的荧光检测器,作为最终定量定性的检测器。
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