求助PCR胶原降解产物测定胶回收的问题

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【悬赏金币】回答本帖问题,作者sam_mija将赠送您 5 个金币
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PCR产物在胶回收大小竟然发生了变化已有1人参与
PCR产物900bp, 胶回收后再把产物跑胶,条带竟然跑到了1.4kb, 重复了N次,不是marker也不是电泳的问题, 这是什么原因????从来没遇到过。
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【答案】应助回帖
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可能是形成了产物二聚体。产生80度水浴5分钟后立马放到冰上冷却就可以搞定了,试试吧
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确实很奇怪呀
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从没遇到过,遇到过变小的,没遇到变大的
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【答案】应助回帖
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是不是挖胶回收的时候本身条带特异性就不是很高,而且电泳时间太短就停止了,1.4 k的和900 bp的没有分开就挖了?
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【求助】刚刚接触实验,有关PCR产物纯化回收的问题?
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这个帖子发布于11年零12天前,其中的信息可能已发生改变或有所发展。
大家好,我刚刚开始接触实验,有一个地方总是想不明白。 DNA经PCR扩增后,跑电泳观察扩增情况,纯化回收涉及到是将胶纯化回收,还是将扩增后的产物纯化回收。我看了一些帖子,都说直接纯化回收扩增产物比较好,最好用试剂盒进行,这究竟有什么区别?是必须经过纯化回收之后的扩增片段才能够测序吗?谢谢各位的指点!!
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如果你的产物是单一的,那么可以考虑直接纯化回收扩增产物,毕竟跑胶后割带回收的染料残留对测序有影响。对于产物如果想准确测序,当然是连载体,不过麻烦了。呵呵。你如果不想回收可以将产物给测序公司,他们帮你纯化回收,当然是要额外收费的了。呵呵。
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测序前纯化主要目的是去除PCR体系中的蛋白、盐等杂质。由于测序PCR反应对于体系成分要求很严,加入的产物溶液必须是低盐的,不足以影响测序反应液成分。而测序反应中,也最好是单一的核酸片断做为模板,模板越不纯自然信号越不好直接纯化回收是指的PCR产物中的核酸全部沉淀回收,通常是乙醇沉淀法。这样得率很高,损失小,浓度较大。但是杂带、引物二聚体都在里面,可能会有杂信号。应该在你PCR条件摸的很稳定,条带单一时候再这样做胶纯化是电泳后根据条带回收,自然产物单一,浓度也较准确,有杂带也没关系。缺点如楼上。我们都是连T载体测序,准确,信号好,而且本来下面试验也需要的
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&&PCR产物及PCR胶回收产物的存放问题
PCR产物及PCR胶回收产物的存放问题
大家好,我想做土壤微生物的克隆文库,我现在条件摸好了,所以想先扩增出来,然后放冰箱-20度保存,然后过一段时间在连载体,摇菌测序什么的,请问,我的产物是直接放在-20度用的时候再胶回收保存的时间长,还是胶回收一下保存的时间长。求高手指点。非常感谢!
好的,谢谢啊,
恩恩,谢谢了,
不好意思啊,我刚刚点错了,没给你金币,我现在该怎么把金币给你啊,
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