【图文】第十四章G+产芽孢杆菌_百度文库
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第十四章G+产芽孢杆菌
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在一定条件下，芽胞杆菌属（如）及梭状芽胞杆菌属（如破伤风杆菌、气性坏疽病原菌）能在菌体内形成一个性很强的不易着色小体，称为内芽胞（endospore），简称芽胞。尽管芽胞与孢子的英文名称均为spore，但二者的界限从来就没有混淆过，微生物学界也不曾有过分歧意见。恶劣环境下，一个细菌产生一个芽孢，条件适宜时重新成为一个细菌，数量没有增加，因此芽孢不是细菌的繁殖体，是休眠体，因此称作“芽胞”更为确切。《微生物学名词(第2版)(2012)》是全国科学技术名词审定委员会审定公布的第二版微生物学名词，其中收录“芽孢”为规范词条，又称“芽胞”。
芽胞（spore）
芽胞一般只在动物体外才能形成，并受环境影响，当营养缺乏，特别是碳源、氮源或磷酸盐缺乏时，容易形成芽
胞。不同细菌形成芽胞还需不同的条件，如须在有氧条件下才能形成芽胞。成熟的芽胞可被许多正常如丙氨酸、、、乳酸等激活而发芽，先是芽胞酶活化，层及外壳迅速解聚，水分进入，在合适的营养和温度条件下，芽胞的向外生长成繁殖体，开始发育和分裂繁殖。芽胞并非细菌的繁殖体，而是处于代谢相对静止的休眠休态，以维持细菌生存的持久体。
芽胞含水量少（约40%），蛋白质受热不易变性。芽胞具有多层厚而致密的胞膜，由内向外依次为、、芽胞壁、、、芽胞壳和芽胞外衣（图2-10）。特别是芽胞壳，无通透性，有保护作用，能阻止化学品渗入。芽胞形成时能合成一些特殊的酶，这些酶较之繁殖体中的酶具有更强的耐热性。芽胞和层中含有大量（dipicolinic acid,dpa）,占芽胞干重的5～15%，是芽胞所特有的成分，在细菌繁殖体和其他生物细胞中都没有。dpa能以一种现尚不明的方式，使芽胞的酶类具有很高的稳定性。芽胞形成过程中很快合成dpa，同时也获得耐热性。芽胞呈圆形或椭圆形，其直径和在内的位置随而不同，例如，的芽胞为卵圆形、比小，位于菌体中央；破伤风杆菌芽胞正圆形、比菌体大，位于顶端，如鼓槌状。这种形态特点有助于细菌鉴别（图2-11）。芽胞在分布广泛，因此要严防芽胞污染伤口、用具、敷料、手术器械等。芽胞的抵抗力强，对热力、干燥、、化学等理化因素均有强大的抵抗力，用一般的方法不易将其杀死。有的芽胞可耐100℃煮沸数小时。杀灭芽胞最可靠的方法是。当进行消毒灭菌时往往以芽胞是否被杀死作为判断灭菌效果的指标。
某些细菌在一定的环境条件下，能在内部
芽胞结构模式
形成一个圆形或卵圆形小体，是细菌的休眠方式，称为内芽胞（endospore），简称芽胞（spore）。产生芽胞的细菌都是革兰阳性菌。
与芽胞相比，未形成芽胞而具有繁殖能力的称为繁殖体。
芽胞形成与发芽
芽胞形成条件：一般只在动物体外才能形成，其形成条件因菌种而异。有的要在需氧条件下形成（如），有的则相反（如破伤风杆菌）；多数芽胞形成是在营养缺乏时，但也有例外（如苏云金杆菌）。
芽胞生物学特性
折光性强，不易着色。大小、形状、位置因而易，有重要的鉴别价值。（图1-3）
成熟的芽胞由多层膜结构组成，带有完整的核质、酶系统和合成菌体组分的结构，保存有细菌的全部生命必须物质。
在芽胞形成后，可由于某些因素的刺激作用（如机械力、热等），破坏其芽胞壳，并供给水分和营养，芽胞即可发芽，形成新的。在细菌形成芽胞再发芽的过程中，细菌数量并未增加，故芽胞不是细菌的繁殖方式。（图）
增加了细菌对外界不良环境的抵抗力。芽胞赋予细菌对多种理化因素（如热力、干燥、辐射、等）强大的抵抗力，使细菌在恶劣的环境中得以长期保持活性。虽然芽胞不能直接引起疾病，但其强大的抵抗力可使病原菌有机会存活下来并在适当条件下致病。
芽胞抵抗力强原因
1.芽胞含水量少，蛋白质受热后不易变性；
2.芽胞具有多层致密的厚膜，理化因素不易透入；
3.芽胞中含有一种特有的化学组分（DPA），DPA与钙结合生成的钙盐能提高芽胞中各种酶的热稳定性。
判断灭菌效果的指标：因芽胞的抵抗力远较繁殖体强，故而当进行消毒灭菌时可将芽胞是否被杀死作为判断灭菌是否彻底的指标。
①灭菌的指标
②细菌鉴别
由于芽胞的各种特殊构造，在一般程度上，芽胞代表着生物学上灭菌难度的最高点，因此常以灭芽胞的指标作为微生物灭菌的标准。实验室一般采用，分为两种方式：120℃，保持20min；115℃，保持20min.。前者作为一般的灭菌方式，后者为含糖培养基的灭菌。
芽胞鉴别方式
鉴别芽胞的方式有专门额染色方式：芽胞染色法。
制备苗液：1）加1-2滴无菌水于小试管中，用接种环从斜面上挑取2-3环的菌体于试管中并充分打匀，制成浓稠的菌液。2)加染色液：加5%孔雀绿水溶液2-3滴于小试管中，用接种环搅拌使染料与菌液充分混合。 3)加热：将此试管浸于浴(烧杯)，加热15-20min。 4)涂片：用接种环从试管底部挑菌液于洁净的载玻片上，做成涂面晾干。 5)固定：将涂片通过酒精灯火焰3次。 6)脱色：用水洗直至流山的水中无孔雀绿颜色为止。 7)复染：加染色5min后，倾去染色液，不用水洗直接用吸水纸吸干。8)镜检：先低倍，再高倍，最后用油镜观察。结果：芽胞呈绿色，芽胞囊和菌体为红色。
(2)Schaeffer与Fulton氏染色法 1)涂片：按常规方法将待检细菌制成一薄的涂片。2)晾干固定：待涂片晾干后在酒精灯火焰上通过2-3 次3)染色： ①加染色液：加5%孔雀绿水溶液于涂片处(染料以铺满涂片为度)，然后将涂片放在铜板上，用酒精灯火焰加热至染液冒蒸汽时开始计算时间，约维持15-20mm。加热过程中要随时添加染色液，切勿让标本干涸(加热时温度不能太高)。 ②水洗：待破片冷却后，用水轻轻地冲洗，直至流出的水中无染色液为止。 ③复染：用液染色5m。 ④水洗、晾干或吸干。 ⑤镜检：先低倍，再高倍，最后在油镜下观察。 结果：芽胞呈绿色，菌体为红色。
芽胞相关介绍
芽胞含水量少（约40%），蛋白质受热不易变性。芽胞具有多层厚而致密的胞膜，由内向外依次为、、芽胞壁、、、芽胞壳和芽胞外衣。
特别是芽胞壳，无通透性，有保护作用，能阻止化学品渗入。芽胞形成时能合成一些特殊的，这些酶较之繁殖体中的酶具有更强的耐热性。芽胞核心和皮质层中含有大量（dipicolinicacid,dpa）,占芽胞干重的5～15%，是芽胞所特有的成分，在细菌繁殖体和其他生物细胞中都没有。
dpa能以一种现尚不明的方式，使芽胞的酶类具有很高的稳定性。芽胞形成过程中很快合成dpa，同时也获得耐热性。芽胞呈圆形或椭圆形，其直径和在菌体内的位置随菌种而不同，例如，的芽胞为卵圆形、比菌体小，位于菌体中央；破伤风杆菌芽胞正圆形、比菌体大，位于顶端，如鼓槌状。这种形态特点有助于细菌鉴别（图2-11）。芽胞在自然界分布广泛，因此要严防芽胞污染伤口、用具、敷料、手术器械等。
芽胞的抵抗力强，对热力、干燥、、等理化因素均有强大的抵抗力，用一般的方法不易将其杀死。有的芽胞可耐100℃煮沸数小时。杀灭芽胞最可靠的方法是高压蒸汽灭菌。当进行消毒灭菌时往往以芽胞是否被杀死作为判断灭菌效果的指标。
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XX人民医院检验科微生物室sop文件汇编-细菌室操作程序文件.doc
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文档介绍：
内江市第六人民医院检验科
微生物室sop文件汇编
生效日期:二零一二年一月一日
内江市第六人民医院检验科微生物室
细菌室人员岗位职责……………………………………………………..2
细菌室工作人员管理规定及报告时间………………………………….4
标本采集及保存要求……………………………………………………7
显微镜检查法操作规程…………………………………………………9
细菌室标本操作流程……………………………………………………11
细菌室形态检查操作规程………………………………………………13
细菌生化反应鉴定及其他实验操作规程………………………………18
细菌的接种与培养方法操作规程………………………………………23
支原体培养、鉴定、计数及药敏操作规程……………………………25
血液感染病原体检验操作规程…………………………………………27
中枢神经系统感染病原体检验操作规程………………………………29
创伤和外科感染病原体检验操作规程…………………………………31
下呼吸道感染病原体检验操作规程……………………………………32
消化道感染病原体检验操作规程………………………………………34
尿路感染病原体检验操作规程…………………………………………35
脓汁及病灶分泌物细菌检验操作规程…………………………………36
生殖系统标本的处理……………………………………………………38
超广谱β—内酰***酶(ESBLs)检.……………………………………40
消毒灭菌效果监测……………………………………………………….41
环境卫生学监测………………………………………………………….42
采样及检查原则………………….………….…………………………..43
各部位的消毒…………………………………………………………….48
JYK-SOP—001
细菌室人员岗位职责
细菌室人员岗位职责
1、上班后先搞好室内卫生、核查各个培养箱、冰箱的工作温度是否在设定的范围内,并做好记录。
2、检查各种培养基及试剂的库存量,做好需配制培养基或购买试剂的交班工作。
3、接收样本:核对各样本号与申请单联号是否一致,如不一致马上与病房联系以便作出相应的处理,如退单或重送样本等,并做好联系情况的记录。核查各送检样本是否符合要求。
①痰液样本:先看外观、再直接涂片镜检,低倍镜下见白细胞&25个,10&上皮细胞&25个/每个视野,为合格痰液。
②无菌体液样本:检查各种无菌体液样本的盛放器皿是否符合要求。
③容易干燥的样本:对一些容易干燥的样本如大便、咽拭子、脓液拭子、泌尿生殖道拭子等是否已经干燥。
对不符合要求的样本必需与临床联系,以便作出相应处理,方法如联号不符的样本。做好记录。对符合的样本进行原始单的登记。
4、样本编号:对符合的样本作出编号,普通细菌培养:痰液、咽拭子、血液增菌培养、尿液、胸、腹水、脑脊液、胆汁、脓液、泌尿生殖道拭子、大便致病菌培养。在各种培养基上及申请单上编号的同时均需明确标明接种日期。各种涂片样本编号:抗酸染色、G—双球涂片。
5、样本接种:
①血液、骨髓、腹水、关节液等:增菌培养瓶
②痰液、咽拭子、脑脊液分别接种:血平板、巧克力平板、麦康凯平板;
⑨尿液接种:血平板、巧克力平板、Mac:
④各种无菌体液、脓液、泌尿生殖道分泌物接种:血平板、巧克力平板;
⑤大便致病菌:接种SS平板、麦康凯平板;
⑥分泌物的淋球菌培养接种:淋球菌专用平板;
⑦支原体培养+药敏,按说明书接种支原体专用培养基;
对以上接种样本的当前编号应记录于登记本上。此外对痰、脓液、脑脊液等在接种的同时应对其沉渣进行革兰染色,如有细菌和/或何种细菌为主立刻通知临床,并做好记录。
6、涂片染色:抗酸染色严格按照操作规程,漂浮法涂片痰液样本,胸腹水、尿液、脑脊液等约10m1于试管中低速1000转/分离心2分钟后取上清于另一管中,5000转/分高速离心10分钟,取沉淀涂厚片,自然干燥后固定,按说明书染色后镜检。G—双球菌涂片,应用滚动式涂片法从波片一端涂向另一端,反复几次,火焰固定后进行革兰染色。
7、对需购买的试剂、平板、培养基、染色液以及需配置的培养基应及时交班。申报室组长、及下午配制人员。
8、对有新到岗的实习或进修人员时,应认真交代本岗位的一切事宜并且认真作好带教工作。
9、上班后首先检查各种仪器工作是否正常,做好记录。
10、查对昨天移种平板申请单及原始登记本,确定标本移种是否正确。观察血液增菌培养瓶,如发现有细菌生长,马上涂片革兰染色,将细菌的染色特性及形态报告给临床,并做好记录,同时进行移种。
11、观察平板,挑取可疑菌落涂片革兰染色,如为革兰阳性菌或阴性杆菌,将菌落纯化于普通血平板;如为真菌,将菌落纯化于沙博罗平板;如革兰阴性双球菌,将菌落纯化于巧克力平板,并置于CO2蜡缸中:对嗜血杆菌纯化于专用巧克力平板,并置于CO2蜡缸中。
12、将前一天分纯的细菌严格按照黑马系统说明书进行分析前各种鉴定试条和药敏试条的操作.。
13、对一些不适合用鉴定板测药敏的细菌,改用标准的K.B法进行检测。碰到异常的耐药模式应及时上报组长,如碰到耐万古霉素的葡萄球菌、粪肠球菌,耐泰能的大肠埃希菌、克雷伯菌属、肠杆菌属等。并加做特殊的药敏纸片,并改用纸片法加以比较。
14、对一些特殊细菌,如嗜血杆菌、棒状杆菌、李斯特菌属等用相应的鉴定条进行鉴定,用相应的手工试验进行检测,操作严格参照全国临床检验操作规程第三版。
15、定期做好本室所用鉴定和药敏试条的质控,做好记录。
16、每天必须消毒平板、基础培养基等用于常规医院感染监测;另外根据具体情况即时准备好各种中和剂、无菌瓶等,对48小时的空气培养出报告,同时注意是否有致病菌、菌落数是否超标。
17、工作完成后注意对工作台面进行消毒、室内进行消毒。
JYK-SOP—002
细菌室工作人员管理规定及报告时间
细菌室工作人员管理规定及报告时间
一、守班人员
1、上班后首先搞好接种室内卫生、核查各个培养箱、冰箱的工作温度是否在设定的范围内,并做好记录。
2、检查各种仪器工作是否正常,并做好记录。
3、查对昨天移种平板申请单及原始登记本,确定标本移种是否正确。观察血液增菌培养瓶,如发现有细菌生长,马上涂片革兰染色,将细菌的染色特性及形态报告给临床(第一级初级报告),二级报告:报告直接抗菌药物敏感试验和细菌种属的初步鉴定结果,三级报告(最终报告):报告细菌种属名和标准抗菌物敏感试验。阴性报告:普通血培养3天无细菌生长可报告为:“72小时培养未见细菌生长”,并做好记录,同时进行移种。阴性报告于7天后出结果。
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